兔防御素cDNA表达质粒的构建及其表达

将兔防御素（MCP－1）cDNA插入真核表达载体pcDNA3的EcorRⅠ和XbaⅠ酶切位点之间，构建了兔MCP－1cDNA的真核表达质粒pcDEF。通过脂质体转染，使兔MCP－1 cDNA在COS－7细胞中表达，在转染60、84、108h后，提取总RNA。采用RT－PCR，在288bp的位置扩增出1条特异性带；RNA斑点印迹杂交表明，兔MCP－1 cDNA在60、84、108h均有表达。     

中国林蛙Sox基因的PCR扩增

以特异扩增人SRY基因HMG -box保守区的一对引物 ,扩增了中国林蛙Sox基因(SRY -boxgene)。结果表明 ,雄性中国林蛙扩增出了两条带 ,分子长分别为 2 5 0bp和 60 0bp ,而雌性个体中未见扩增带 ,显示了中国林蛙Sox基因在雌雄性别间有差异。本研究为探讨中国林蛙的性别决定机制及性别控制的早期鉴定提供了分子依据     

鸡传染性支气管炎M41毒株S1基因的克隆与真核表达研究

根据Genbank中公布的IBVS1基因序列 ,设计了一对引物 ,克隆出IBV强毒株M41的S1基因 ,基因大小为 1 .62kb ,导入真核表达载体系统pIRS1neo中 ,表达蛋白分子量为 61ku ,并具有中和活性。为今后开发鸡传染性支气管炎基因工程疫苗奠定了基础。     

马动脉炎病毒N蛋白基因GST融合表达载体的构建及表达

采用RT-PCR方法扩增出马动脉炎病毒核衣壳蛋白基因0RF7,并将其克隆到pMDl8-T载体,构建成重组质粒pMDl8-N,在上海生物工程公司测序。结果表明,所克隆的核衣壳蛋白基因序列与EAVNC-002532株的同源性为99％。表明0RF7是EAV基因组内的保守序列,将0RF7亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建成重组质粒pGEX-6P-N,用pGEX-6P-N转化表达菌株BL21（DE3）,诱导表达后SDS-PAGE和Westernblotting分析表明,克隆在谷胱苷肽硫转移酶（GST）下游的核衣壳蛋白基因与GST获得了高效融合表达,表达的融合蛋白GST-N分子质量约为40ku,为马动脉炎病毒病血清学诊断方法的建立奠定了基础。     

转基因技术在动物遗传改良上的应用进展

简要介绍了几种比较常用的转基因方法.包括显微注射法、脂质体介导法、电转染法、胚胎干细胞法、病毒载体法、精子载体法、卵巢直接注射法.传统的转基因方法与基因打靶、体细胞核移植、RNA干扰以及线粒体转移技术相结合,在基因功能研究和疾病治疗中发挥越来越重要的作用.特别是近年来在植物上出现的外源基因清除技术,为我们在动物上彻底去除外源基因的影响提供了新思路.     

Expression profiling of transgenes (Cry1Ac and Cry2A) in cotton genotypes under different genetic backgrounds

Transgenic cotton carrying the CrylAc gene has revolutionized insect pest control since its adoption,although the development of resistance in insect pests has reduced its efficacy.After 10 years of cultivating Bacillus thuringiensis(Bt) cotton with a single Cry1 Ac gene,growers are on the verge of adopting Bt cotton that carries the double gene(Cry1 Ac+Cry2 A) due to its better effectiveness against insect pests.Thus,the current study was designed to evaluate the role of each gene in the effect...     

Tth DNA聚合酶基因的分段PCR克隆及其表达载体构建

利用计算机软件对取自ＧｅｎＢａｎｋ的嗜热栖热菌ＴｈｅｒｍｕｓｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓＨＢ－８的ＤＮＡ聚合酶基因（Ｔｔｈ）进行分析,并设计了两组引物进行ＰＣＲ,分段克隆该基因。将两个ＰＣＲ产物同时连接到另一个克隆载体上,使之成为完整基因,最后将完整基因克隆到表达载体上,构建了Ｔｔｈ基因的表达质粒,使之适合在以大肠杆菌为寄主的细胞中进行表达。     

大黄鱼冰鲜杂鱼饲料中细菌多样性研究

为研究大黄鱼（Larimichthys crocea）冰鲜杂鱼饲料中细菌的多样性,用细菌通用引物构建了细菌16S rRNA基因克隆文库。从文库中随机挑选125个克隆子进行限制性片段长度多态性（ RFLP）分析,得到82个不同的RFLP 带型。对部分代表性克隆子进行测序,得到23条有效序列。序列同源性分析和系统进化分析结果表明,大黄鱼冰鲜杂鱼饲料中细菌主要分为3大类群,其中γ-变形菌纲（γ-Proteobacteria）细菌占据明显地优势地位,约占所分析克隆子数的84.4％;其次是黄杆菌纲（Flavobacteria）细菌,约占10.9％;还有少量的梭杆菌纲（Fusobac-teria）细菌,约占4.7％。γ-变形菌纲细菌中以嗜冷杆菌（Psychrobacter sp.）最多,其次是发光杆菌（Photobacteri-um）。     

Cloning and expression of nucleocapsid protein gene of TGEV HB06 strain

The nucleocapsid protein gene of transmissible gastroenteritis virus, 1 149 bp in length, was amplified by RT-PCR from isolated strain HB06 and cloned into pMD18-T. Sequence comparison with other transmissible gastroenteritis virus (TGEV) strains selected from the Gene Bank revealed that the homology of N gene complete sequence shares more than 97% in nucleotide. N gene was cloned into BamHI and EcoRI multiple cloning sites of the prokaryotic expression vector pET 20 b, and named pETN. After being induced by isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside (IPTG), the recombinant nucleocapsid protein was expressed. The result of SDS-PAGE and Western-blot showed that the recombinant nucleocapsid protein was 47 kDa and had strong positive reactions with TGEV-specific antibody.     

琅琊鸡胚MSX2基因克隆及发育性表达变化

【目的】 克隆鸡Msh同源框2(Msh-homeobox 2,MSX2)基因,并对其进行生物信息学和胚胎期表达模式分析,为进一步研究MSX2基因的结构和功能提供支持。【方法】 对80枚琅琊鸡种蛋进行孵化,分别于孵化期第1、2、3、4、5、6、9、12、15、18天采集样品(1~6胚龄采集整胚,9、12、15、18胚龄分别采集心脏和肝脏),提取总RNA,利用RT-PCR方法扩增并克隆MSX2基因,对其进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR技术分析MSX2基因在琅琊鸡鸡胚和组织中的表达水平。【结果】 成功克隆了琅琊鸡胚MSX2基因,序列长度为818 bp,开放阅读框为780 bp,编码259个氨基酸。琅琊鸡MSX2氨基酸序列与日本鹌鹑、秃鹰和仓鸮的相似性最高,均为99.23%,与山羊的相似性最低,为74.54%;系统进化树分析结果显示,琅琊鸡与日本鹌鹑聚为一类。生物信息学分析表明,MSX2蛋白分子质量为28 235.18 u,等电点(pI)为9.71,没有信号肽和跨膜域,为不稳定的亲水性蛋白,主要分布在细胞核(60.9%);存在37个磷酸化位点、8个O-糖基化位点和1个N-糖基化位点;二级结构主要由无规则卷曲(63.32%)和α-螺旋(28.19%)组成。实时荧光定量PCR分析表明,MSX2基因在整胚(1~6胚龄)中的表达水平呈现先上升后下降趋势,且在4胚龄时表达水平最高,极显著高于1、2、3胚龄(P<0.01);MSX2基因在12胚龄鸡心脏中的表达水平极显著低于9胚龄(P<0.01);在9~18胚龄鸡肝脏中的表达量呈逐渐下降趋势,且在9胚龄鸡肝脏中表达水平最高(P<0.05)。【结论】 试验成功克隆了琅琊鸡MSX2基因序列,其表达模式在不同胚龄和同一胚龄不同组织间存在差异,为进一步探索琅琊鸡MSX2基因的结构和功能奠定了基础。