柱花草叶肉原生质体提取与瞬时表达体系构建

柱花草(Stylosanthes guianensis)是一种重要的热区豆科牧草,为利用原生质体瞬时表达体系开展柱花草基因功能研究,以20 d龄期‘热研5号’柱花草子叶为试验材料,通过正交试验考察不同因素对原生质体分离及转化效率的影响。结果表明：采用1.5%纤维素酶、1.25%离析酶、0.5 mol·L^-1甘露醇和4 mmol·L^-1MES酶解液组合,酶解时间为16 h时,原生质体的产量和活性均达到最佳,分别为(4.567×10⁶)个·g^-1和92.271%;原生质体浓度为(6×10⁵)个·mL^-1、质粒浓度为0.6μg·μL^-1,PEG-4000浓度为50%、转化时间为5 min时,转化效率最高,可达52.524%。构建了目标蛋白SgRKL1表达载体pA7-BIUTNT::SgRKL1-GFP,利用PEG介导法将其转入柱花草原生质体,激光扫描共聚焦显微镜检测结果显示SgRKL1蛋白定位于细胞膜上,说明所建立的柱花草叶肉原生质体瞬时表...     

猪多杀性巴氏杆菌环介导等温扩增检测方法的建立

为建立猪多杀性巴氏杆菌(Pm)的快速检测方法,本研究以Pm的PlpB基因序列为靶基因设计特异性引物,建立了Pm特异性的环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法.经反应条件优化,确定反应条件为63℃,20 min.检测结果显示,建立的LAMP检测方法具有良好的特异性,灵敏度为25 cfu/mL;与大肠杆菌、副猪嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、沙门氏菌无任何交叉反应.采用建立的LAMP方法与常规PCR方法对临床54份分离样品进行检测,检测结果为31份为阳性,23份为阴性,二者符合率为100％.该方法的建立为Pm在临床上的快速检测提供了一种新的技术手段.     

白牦牛卵母细胞的采集方法及卵巢贮存条件对其体外成熟的影响

探讨了白牦牛卵母细胞的采集方法以及卵巢保存温度和时间对其体外成熟的影响。结果表明:先抽吸卵泡,每卵巢平均可获可用卵母细胞4.7枚,再切割卵巢,可显著提高可用卵母细胞数9.8枚/卵巢。将屠宰白牦牛卵巢分别置于20~29℃和30~38℃的生理盐水中,6 h内收集卵母细胞,其成熟率、卵裂率分别为65.7%、41.3%和73.3%、45.7%,两者之间的差异均不显著,但均与<20℃组(16.0%、0)差异显著。在30~38℃下,白牦牛卵巢保存时间超过6 h,卵母细胞的成熟率和卵裂率显著下降,卵巢保存时间在2 h以内最好,最晚不超过6 h。     

玉米种子培养皿法发芽试验误差分析

培养皿法是玉米种子发芽试验常采用快捷方便的方法,但此方法的发芽率比较低、变异系数较大,不能反映种子本来固有的发芽水平。对此,笔者进行了培养皿法发芽试验的研究,结果表明,在培养皿内种胚向下是造成发芽率低和变异系数大的原因,若将种胚全部向上置放,就能减少发芽率的误差,体现出玉米种子的正常发芽水平。     

瑞香狼毒粗提取比较与成分分析

主要采用了不同提取液、不同提取液倍数、不同提取方法对瑞香狼毒进行了提取率的研究．同时对不同提取方法所得提取物的成分进行了分析。结果表明：以6倍95％乙醇作为提取液．采用75℃浸泡5d的提取方法提取率高,成分含量多,特别是针对其杀虫效果而言,采用乙醇作为提取液效果更佳。     

柞蚕微孢子虫胶体金免疫层析检测法

利用柞蚕微孢子虫孢子液直接免疫家兔获得柞蚕微孢子虫多克隆抗体后,分别采用双抗夹心法和竞争法制作胶体金免疫层析试纸条,建立能简便、快捷、准确诊断柞蚕微粒子病的柞蚕微孢子虫胶体金免疫层析检测法。双抗夹心法和竞争法分别是将柞蚕微孢子虫多克隆抗体与25 nm和17 nm的胶体金颗粒结合并固定在金标垫上,然后均将羊抗兔二抗包被在硝酸纤维素膜上作为质控点(C),但是2种方法制作的胶体金免疫层析试纸条的反应模式不同:前者是以柞蚕微孢子虫多克隆抗体作为检测点(T),而后者以柞蚕微孢子虫孢壁蛋白作为检测点(T)。2种方法制作的胶体金免疫层析试纸条的检测时间均为10 min,检测灵敏度为0.8×107个/mL,与柞蚕血淋巴无交叉反应,特异性强,操作简单,其中,以双抗夹心法制作的试纸条显色更清晰,结果更可靠,更具实用价值。     

Analysis and experimental study on identification of inner force of steel tube under tension (compression) and bending using blind-hole method

为了解在役拉(压)弯钢管的内力情况,在盲孔法测量钢结构应力的基础上,提出了拉(压)弯钢管的内力识别方法.采用盲孔法对不同外径、不同荷载下的3组9根钢管试件进行了2种不同方式下的钻孔试验,研究了不同钻孔方式、不同外径、不同表面应力分布情况下的钻孔释放规律.试验结果表明:钻孔加工应变对测量精度影响较大,计算应力时应消除钻孔加工应变的影响;在应力超过f_y/2时需对释放系数进行塑性修正;钢管表面应力的测量精度随钢管直径的增大而提高.盲孔法用于拉(压)弯钢管的表面应力检测和杆件内力识别,无论理论上还是实际操作都是可行的,识别精度满足工程应用要求.     

副溶血弧菌检测技术的研究进展

副溶血弧菌引发食物中毒的规模呈明显的上升趋势,目前已超过沙门氏菌食物中毒,跃居首位。因此需要从多方面加强检测,以防止该菌对食品造成的大面积污染,保证人的身体健康。为此本文全面介绍了副溶血弧菌的各种检测方法,包括:传统方法,免疫学方法,分子生物学技术,传感器技术等,为副溶血弧菌的检测提供理论依据。     

Overestimation of canine albumin concentration with the bromcresol green method in heparinized plasma samples

Albumin concentrations are routinely measured in dogs with bromcresol green (BCG)-binding assays on automated chemistry analyzers. Several variables affect this assay, including the length of reaction time, sample type, and lack of specificity of BCG for albumin. We observed that albumin concentrations measured with BCG appeared higher in heparinized plasma samples in sick dogs. The objective of this study was to determine the effect of anticoagulant and assay procedure on BCG albumin concentrations in clinically ill dogs. We hypothesized that albumin concentrations would be overestimated in heparinized plasma compared with serum because of the combination of heparin and fibrinogen. Furthermore, we hypothesized that the overestimation would be influenced by assay parameters. Blood was collected from 32 clinically ill dogs into tubes containing heparin, citrate, or no anticoagulant. Citrate was chosen to assess the effect of fibrinogen in the absence of heparin. Albumin concentration was measured in all 3 sample types from each dog using 2 different BCG procedures on an automated chemistry analyzer. The BCG procedures (standard and modified) differed in the wavelengths used for absorbance readings (standard, 600/700; modified, 570/505) and the time point at which absorbance was measured (standard, 100 seconds; modified, 40 seconds). In addition, the modified method incorporated a sample blank. Globulin fractions, fibrinogen concentration, and indices of lipemia, hemolysis, and icterus were evaluated for their contribution to the overestimation of albumin concentration in heparinized plasma compared with serum samples. Albumin concentrations were significantly higher (P 相似文献   

内标法同时测定挥发性脂肪酸和乳酸的方法探究

选用巴豆酸作为内标物,以内标标准曲线法定量,探讨无需任何前处理便能同时测定挥发性脂肪酸和乳酸的最佳色谱条件。用HP-INNOWAX(19091N-133)毛细管柱,以高纯氮作为载气,用氢火焰离子化检测器对挥发性脂肪酸和乳酸进行测定。结果表明:其理想检测条件为载气总压力160kPa,气化室温度250℃,检测室温度270℃,柱温采用程序升温法,初始温度120℃,然后以10℃/min升温速率升至220℃,保持2min。