鸭维甲酸诱导基因I克隆及其结构域功能分析

【目的】克隆鸭维甲酸诱导基因I（retinoic acid inducible gene I,RIG-I）,分析其不同结构域的功能。【方法】根据GenBank上公布的鸭RIG-I序列设计引物,利用RT-PCR克隆鸭RIG-I基因CDS（coding sequence）区,根据保守结构域预测结果,构建携带6*his组氨酸标签的不同结构域缺失突变体的真核表载体（RIG-I-Full、RIG-I-N和RIG-I-C）,转染鸡胚成纤维细胞DF1,经RT-PCR、间接免疫荧光方法鉴定重组质粒在细胞中转录与表达;同时,利用RT-qPCR检测RLR抗病毒信号通路中的IFN-β、Mx1和PKR等下游基因的表达变化。【结果】鸭RIG-I基因CDS区全长2 802 bp,共编码933个氨基酸;不同结构域缺失突变体的真核表载体转染DF1细胞后,重组蛋白均在DF1细胞中表达;RT-qPCR结果显示,N端能显著激活RLR通路上IFN-β、Mx1及PKR基因的表达上调。【结论】 duRIG-I及不同区段均能在DF1细胞中表达,其中N端在调节RLR抗病毒信号通路下游基因的表达过程中发挥了重要作用。     

胰腺炎型鸭1型甲肝病毒结构蛋白VP1基因的克隆和表达

通过RT-PCR方法扩增出MPZJ1206株胰腺炎型鸭1型甲肝病毒结构蛋白VP1基因,将其与原核表达载体pGEX-6P-1连接获得重组表达质粒pGEX-VP1,进行条件优化诱导表达,将表达的重组蛋白经SDS-PAGE分析。结果表明,分子量约为52 kDa的重组目的蛋白得到表达。该研究为开发胰腺炎型鸭1型甲肝病毒诊断方法和研究VP1蛋白功能奠定基础。     

番鸭细小病毒VP3基因的原核表达及多克隆抗体的制备

为获得针对番鸭细小病毒VP3蛋白的多克隆抗体,根据已发表的该病毒基因序列设计一对引物,利用PCR扩增出VP3基因,将其克隆到原核表达载体p ET-32a,转化感受态细胞BL21(DE3)。经IPTG诱导后,SDS-PAGE检测重组蛋白。将重组蛋白切胶免疫BALB/c小鼠,制备抗番鸭细小病毒部分结构蛋白的多克隆抗体。结果显示成功获得VP3基因,构建的原核表达重组质粒成功表达预期的重组蛋白,免疫小鼠获得的多克隆抗体能与番鸭细小病毒及VP3蛋白反应。表明制备的多克隆抗体可用于MDPV的检测,并为进一步研究MDPV奠定了基础。     

鸭坦布苏病毒鸡胚弱化毒株的选育

【目的】将鸭坦布苏病毒BZ_2010株在SPF鸡胚上进行连续传代致弱,旨在选育安全性高、免疫原性好的活疫苗候选毒株。【方法】以SPF鸡胚为增殖宿主,将BZ_2010株连续传代,直至第120代,以1日龄雏鸭和30周龄的产蛋种鸭为试验对象,对第120代次毒株（命名为VC2）的安全性进行评价;以1d雏鸭为试验对象,对VC2株的返强情况进行评价;以18周龄的种鸭为试验对象,对VC2株免疫后的中和抗体进行监测;以25周龄的种鸭为试验对象,对VC2株免疫后的保护效果进行评价;利用RT-PCR方法分别扩增BZ_2010株和VC2株的E基因和NS4A基因,进行测序分析。【结果】传代病毒对鸡胚的平均死亡时间逐渐缩短,而病毒毒价有逐渐提高的趋势,ELD50由第20代的10^-5.3/0.1mL提高到第120代的10^-5.8/0.1mL,而且第80代之前提高较快,后期基本稳定。将VC2株通过颈部皮下接种1d雏鸭和肌肉接种30周龄产蛋种鸭,接种后试验鸭无异常临床表现,肝脏也无明显病理变化,这说明VC2株具有良好的安全性。将VC2在1d雏鸭进行连续5次传代,未发现试验鸭有任何异常症状,将第5代组织悬液接种1d雏鸭,采集肝脏进行病理切片观察,发现无明显病理变化,这说明VC2株具有良好的稳定性。基因测序分析结果显示,VC2株 E蛋白的第86、157、189、301和312位氨基酸发生改变,而NS4A蛋白只有一个氨基酸发生突变,即第54位氨基酸由F变为L。VC2免疫种鸭后抗体水平上升很快,第4周即可达到高峰,并且维持较长时间;VC2免疫后于第2周和第50周利用强毒株进行攻毒试验,结果VC2免疫组在攻毒后未出现异常症状,粪便正常,产蛋率保持正常,这说明VC2株免疫可对强毒株的攻击产生完全保护。【结论】本研究通过鸡胚连续传代成功获得了一株安全性高、免疫原性好的鸭坦布苏病毒鸡胚弱化毒株。VC2免疫种鸭后抗体水平上升很快,可维持较长时间。攻毒试验结果表明,VC2株免疫可对强毒株的攻击产生完全保护。     

鸭坦布苏病毒XZ-2012株的分离鉴定与基因变异分析

[目的]2012年10月徐州地区某鸭场的樱桃谷种鸭突然发生产蛋下降,疑似鸭坦布苏病毒病.为了确诊病因,本试验进行了剖检与病原的分离鉴定.[方法]将病料匀浆处理后尿囊腔接种SPF鸡胚,分离病毒,接种BHK细胞培养,应用RT-PCR扩增病毒全基因,测序并进行基因进化分析.[结果]分离到一株鸭坦布苏病毒,命名为DTMUV XZ-2012株.该病毒株能适应鸡胚,无血凝活性,在BHK-21细胞上第5代的病毒滴度为5×104 PFU·mL-1.测序结果表明该病毒株基因组全长为10 990 nt,编码的多聚蛋白含3 426个氨基酸.DTMUV XZ-2012株与BYD株、YY5株和JS_2010株等分离株的全基因同源性为98.5％ ～99.3％.与最早分离的BYD株等相比,XZ-2012株的基因变异主要分布于E基因、NS1基因、NS2基因和NS5基因,提示该病毒在自然界的流行存在一定的免疫压力.[结论]本试验成功分离鉴定了一株鸭坦布苏病毒,为鸭坦布苏病毒候选疫苗株的筛选及病毒分子流行病学研究提供了参考信息.     

兴义鸭的肉质性状测定及其相关性

为兴义鸭的选育及科学养殖提供理论依据,随机选取同批出雏、健康无病、体况相近的10周龄兴义鸭50只(公母各半),进行肉质性状测定及其相关性分析。结果表明:兴义鸭具备优良的肉品理化特性,保水性好,肌内脂肪含量和嫩度适中,脂肪酸以棕榈酸、硬脂酸、油酸和亚油酸为主,含量在95.23%左右,不饱和脂肪酸含量(57.075%)高于饱和脂肪酸(42.944%),且多不饱和脂肪酸较丰富。公母鸭脂肪酸含量无显著差异(P0.05);pH值与肉色呈显著正相关(P0.05),与失水率呈显著负相关(P0.05);不饱和脂肪酸间及其与SFA、EFA、UFA间多数呈极显著相关,C17:0与pH值呈显著负相关,C14:0、C16:1、C18:0、C18:1、C18:2、C20:3、C20:4、EFA与嫩度呈显著或极显著相关(P0.05或P0.01)。兴义鸭具有良好的肉质特性,是一个值得开发的优良地方鸭品种。     

高产蛋鸭配套系的选育

从福建龙岩蛋鸭原种场选择7个蛋鸭品种（品系）S,、S2、S3、J、P、F、K,组建5组不同的三系杂交配套组合：Jδ×（Fδ×S1δ）、Pδ×（Fδ×S3辛）、Fδ×（Pδ×S2δ）、Fδ×（KδXS2δ）、Fδ×（PδXS3δ）．5个配套系商品代经500日饲养试验测定,筛选出生产性能最优的2个配套系为青壳蛋系Jδ×（FδXS1δ）、白壳蛋系Fδ×（PδχS3δ）．青壳蛋系的产蛋率达50％时,平均日龄（118±2．45）d,平均体重（1595．6±22．5）g,500日龄的产蛋数、总蛋重、蛋重、料蛋比分别为（330．6±4．29）枚、（22．694-0．21）kg、（72．50±0．20）g、（2．864±0．03）：1;自壳蛋系的产蛋率达50％时,平均日龄（114．7±1．25）d,平均体重（1526．6±12．31）g,500日龄的产蛋数、总蛋重、蛋重、料蛋比分别为（335．29土1．8）枚、（23．224±0．17）kg、（71．364±O．05）g、（2．77±0．01）：1．可见,2个配套系的生产性能均达国内领先水平,具有推广应用价值．     

稻鸭共生中鸭的放养密度及作用效果研究

在稻田中放养鸭子的密度为10只/667 m2、20只/667 m2和30只/667 m2,根据试验田的面积,将110只巢湖麻鸭随机分为4组,经58 d的稻鸭共生试验表明:稻鸭共生技术具有良好的稻田除虫、除草和防水稻病害效果。在稻田中放养鸭子20只/667 m2具有良好的鸭只生长情况和最高的水稻产量,为最佳放养密度。     

散装卤制鸭翅尖中乳酸菌生长预测模型研究

[目的]探讨散装卤制鸭翅尖中乳酸菌的生长规律。[方法]采用Gompertz模型对不同温度条件下散装卤制鸭翅尖中乳酸菌的生长曲线进行拟合,利用平方根模型构建乳酸菌的二级模型,并应用计算准确因子(Af)和偏差因子(Bf)验证建立的生长模型。[结果]试验表明,Gompertz模型能很好地模拟不同温度下乳酸菌的生长情况(R2>0.98);数学检验参数Af、Bf接近1.0,均在接受范围。平方根模型描述温度与最大比生长速率和延滞期的关系,得到乳酸菌的生长预测二级模型。[结论]该模型可预测5～25℃范围内乳酸菌的变化情况,为散装卤制鸭翅尖腐败微生物的预测研究提供理论依据。     

不同光照制度对绍兴鸭和高邮鸭生长与相关激素及其基因表达的影响

取33日龄高邮鸭和绍兴鸭公鸭各32只，每品种分为两组，分别给以20h和6h光照，试验期14d。试验前后称重。Nothern杂交法测定垂体GH mRNA和下丘脑SS mRNA表达水平，放免法测定血清中生长激素（GH）、胰岛素生长因子－1（IGF－1）、甲状腺激素（T3、T4）水平。结果表明：高邮鸭20h光照时增重、GH及T4水平显著低于6h光照（P＜0．01）；而绍兴鸭的增重变化则与高邮鸭相比（P＜0．01），血浆GH水平变化与高邮鸭相同，T4水平无显著变化。光照制度的改变未引起两品种鸭IGF－1、T3水平的显著变化。垂体GH mRNA表达水平的变化与增重变化相反。提示光照直接影响鸭生长轴基因的表达以及激素水平，从而显著影响生长速率，但这种影响在不同品种可有完全不同的表现。