Targeted Knock-in of a Fluorescent Protein Gene into the Chicken Vasa Homolog Locus of Chicken Primordial Germ Cells using CRIS-PITCh Method

In chickens, primordial germ cells (PGCs) are effective targets for advanced genome editing, including gene knock-in. Although a long-term culture system has been established for chicken PGCs, it is necessary to select a gene-editing tool that is efficient and precise for editing the PGC genome while maintaining its ability to contribute to the reproductive system. Clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/CRISPR-associated protein 9 (Cas9) and CRISPR-mediated precise integration into the target chromosome (CRIS-PITCh) methods are superior as the donor vector is easier to construct, has high genome editing efficiency, and does not select target cells, compared to the homologous recombination method, which has been conventionally used to generate knock-in chickens. In this study, we engineered knock-in chicken PGCs by integrating a fluorescent protein gene cassette as a fusion protein into the chicken vasa homolog (CVH) locus of chicken PGCs using the CRIS-PITCh method. The knock-in PGCs expressed the fluorescent protein in vitro and in vivo, facilitating the tracking of PGCs. Furthermore, we characterized the efficiency of engineering double knock-in cell lines. Knock-in cell clones were obtained by limiting dilution, and the efficiency of engineering double knock-in cell lines was confirmed by genotyping. We found that 82% of the analyzed clones were successfully knocked-in into both alleles. We suggest that the production of model chicken from the knock-in PGCs can contribute to various studies, such as the elucidation of the fate of germ cells and sex determination in chicken.     

氟磺胺草醚的生物测定方法研究

试验利用对氟磺胺草醚敏感的玉米、向日葵、高粱为指示作物,利用土培法研究了不同条件下,氟磺胺草醚不同浓度对作物的抑制作用,并建立了氟磺胺草醚玉米生物测定方法——玉米株高法.试验结果表明,最佳生物测定条件为在27℃条件下,培养120 h.研究结果对土壤中氟磺胺草醚的快速测定和轮作换茬具有重要意义.     

信息时代的家具设计方案评价方法

分析了家具方案设计的创新性、不确定性、层次性、多样性、经验性和反复性等基本特征,并阐述了家具方案设计的过程与内容,界定了家具方案设计评价的概念,模糊评价法、提出层次分析法、价值工程法、灰色系统评价法、感性评价法和人工神经网络评价法等家具设计方案评价方法。     

客运专线刚架系杆拱桥受力状态研究

对刚架系杆拱桥作了全桥空间有限元分析、拱墩连接处局部空间有限元分析和1∶3缩尺模型试验.研究结果表明：刚架系杆拱桥的预应力混凝土主梁由于和系杆分离，其受力行为相当于弹性支承上的连续梁，较普通系杆拱桥有很大改善；钢箱拱肋受力行为与普通系杆拱桥类似；墩拱节点是刚架系杆拱桥的关键部位，永修特大桥墩拱节点由于采用了足够多的栓钉、PBL键和足够大的螺纹钢筋预压应力，结构牢固，承载力很大，传力顺畅；刚架系杆拱桥在客运专线上的应用是完全可行的.     

图表法在农学生物化学教学中的应用

对图表法在农学生物化学教学中的应用做了探讨,证明这种方法有助于调动学生学习的积极性、改善教学效果和提高教学质量,值得更多教师在教学实践中进行尝试。     

乙醇浓度对六种中药多糖的累积沉积量的变化考察

为了初步了解中药多糖的组成,以便于进一步对其进行提取和纯化,实验选取六种中药,并以从中提取的多糖为研究对象,通过增加乙醇的浓度,测定多糖的累积沉积量,从此揭示二者之间的关系。所有多糖的累积沉积曲线都呈现相似的形状。此方法可以为中药多糖提取和纯化提供初步的依据。     

金属体积成形过程的无网格RPIM方法分析

建立了基于无网格径向点插值RPIM法的二维体积成形动态显式计算模型.采用具有Delta函数性质的RPIM形函数构造位移域，因此可以很方便地施加本质边界条件.基于防御节点法给出了二维接触碰撞问题的接触力计算方法，避免罚函数法罚因子选择问题，以及拉格朗日乘子法不适合显式算法的问题.采用完全拉格朗日格式和弹塑性本构关系解决金属体积成形过程所涉及的几何非线性和材料非线性问题，并通过将工件变形分解为偏量部分和体积部分，有效消除金属体积成形中的体积自锁现象.数值算例表明，该算法可方便准确处理大变形畸变问题，是模拟金属体积成形过程的一种有效方法.     

Comparative analysis on cable shielding effectiveness test by absorbing clamp method and line injection method

为分析功率吸收钳法和线注入法电缆屏蔽效能测试方法的可比较性,进行了2种测试方法测试结果关系的推导与分析.介绍了功率吸收钳法和线注入法电缆屏蔽性能测试的原理,推导了表征电缆屏蔽性能的屏蔽衰减与转移阻抗两参数间的关系,利用该关系进行功率吸收钳法和线注入法电缆屏蔽性能测试数据比较分析,结果表明:截止频率以下,由于线注入法受试电缆为电短,屏蔽衰减与电缆长度相关,2种测试方法测试结果不一致;截止频率以上,线注入法与功率吸收钳法受试电缆均为电长,测试结果一致.功率吸收钳法和线注入法测试结果相互关联,2种测试方法具有可比较性.     

橡胶树叶片转化酶提取方法的比较

比较液氮研磨样品与蛋白抽提液研磨样品对6种提取橡胶树叶片转化酶方法的效果。结果表明：液氮研磨法对转化酶活性影响很大，特别是中性/碱性转化酶和细胞壁结合的酸性转化酶已基本失活，而可溶性酸性转化酶活性丧失也比较严重。利用蛋白抽提液研磨样品，用Hepes-NaOH法提取的可溶性转化酶的酶活性最高，达472.44 μmol（glucose）/[g（FW）·h]； 虽然磷酸-柠檬酸法获得的粗酶液的蛋白含量较低， 但其酶活性高达441.61 μmol（glucose）/[g（FW）·h]； Tris-HCl法提取的细胞壁结合酸性转化酶的酶活性最高， 达35.83 μmol（glucose）/[g（FW）·h]。从转化酶的比活力看，磷酸-柠檬酸法最佳，所提取的可溶性转化酶比活力约为Hepes-NaOH法的4倍。本研究结果为进一步完善橡胶树叶片转化酶的提取方法提供重要的指导意义。     

卡尔费休法测定胡椒水分含量的比较研究

以蒸馏法测定胡椒水分含量结果为基准，比较卡尔费休容量法测定胡椒(Piper nigrum L.)水分的准确度和精确度，并获得校正系数平均值2.18。结果表明：卡尔费休法可达到蒸馏法的测定准确度和精确度，而且操作简便，是可靠的胡椒水分含量测定方法。