猪殃殃对AHAS抑制剂靶标抗性的快速分子检测

为建立猪殃殃靶标抗性快速检测方法,并明确小麦田猪殃殃Galium aparine var.tenerum对AHAS抑制剂靶标的突变类型及分布,从河南、陕西、安徽、江苏和山东5省不同田块采集疑似对AHAS抑制剂产生抗性的猪殃殃植株,采用特异性引物PCR扩增靶标酶AHAS基因保守区片段,并以直接测序法检测采集样品,通过与拟南芥AHAS基因序列比对分析后明确其突变位点。结果显示,在5省25个农田的样品中共有19个农田检测到AHAS突变,分布在河南、安徽和江苏3省;在检测样品中发现突变发生在2个位点,共有3种突变类型,分别是197位脯氨酸(CCC)突变为丙氨酸(GCC)或丝氨酸(TCC),或者是574位色氨酸(TGG)突变为亮氨酸(TTG),检测结果与田间药效反应基本一致。这种用特异性引物扩增目的片段测序的方法,由于其可以在生长当季进行检测,适用于田间靶标突变抗性猪殃殃的快速检测与监测。     

芽胞杆菌CQBS03抑菌蛋白TasA基因的克隆及原核表达

为了探讨柑桔溃疡病生防菌芽胞杆菌Bacillus CQBS03菌株TasA基因的功能,采用PCR方法从CQBS03基因组DNA中扩增出编码TasA基因的全长DNA序列,并构建pEASY-E1/TasA原核表达载体,经大肠杆菌Escherichia coli表达获得TasA基因的融合表达蛋白,纸碟法检验融合蛋白对柑桔溃疡病菌Xanthomonas citri citri的抑制作用。结果显示,CQBS03菌株的TasA基因包含1个786 bp的完整开放阅读框（GenBank登录号为JQ309841）,编码261个氨基酸残基;该序列与来源于解淀粉芽胞杆菌B.amyloliquefaciens的1个已知同源TasA基因序列FJ713580的相似性达99.75%。原核表达产物经SDS-PAGE分析,检测到约31 kD的融合蛋白;纯化后的融合蛋白对柑桔溃疡病菌有明显的抑制作用,72 h后抑菌圈直径达11.5 mm。研究表明TasA基因是生防菌芽胞杆菌CQBS03抑制柑桔溃疡病菌的功能基因之一,并且该基因对原核表达宿主没有抑制作用,具有较好的开发利用前景。     

高职城运类专业“四阶段递进式”实践教学模式的研究与实践

“完善教育教学标准,启动1+X职业技能证书制度,重视学生职业技能大赛,培养复合型技术技能人才”是国家“职教二十条”提出的要求,其目的是解决我国职业教育教学实践中普遍存在的“产与教分离,赛与教冲突,教与证不符”等问题,从而提出了高职城运类专业“四阶段递进式”实践教学模式,以城市轨道交通运营管理专业为例,从“以岗定教、产学结合”、“以赛促教、赛教融合”、“学以致用、双证融通” 3个方面,以“四阶段递进式”实践教学模式实施方法来具体阐述“岗、课、赛、证”相互融通的思想内涵与实施方法。     

通过染色体整合β-1,4-葡聚糖酶基因glu14提高绿色木霉对小麦纹枯病的防治效果

 绿色木霉LTR-2是生物防治菌株。利用来自巨大芽胞杆菌Ap25的β-1,4-葡聚糖酶基因glu14构建木霉表达载体pSilent/glu14,利用限制性内切酶介导法(REMI)转化绿色木霉LTR-2。PCR扩增及Southern杂交证实目的基因已插入木霉转化子的染色体DNA上。转化子的β-1,4-葡聚糖酶水解活性,对小麦纹枯病菌的平板抑制作用及温室防治效果较原始菌株LTR-2明显提高(P<0.01),其中转化子L-10的效果最好,平板抑制率比LTR-2提高了27.0%,温室防治效果比LTR-2提高了26.7%。本试验表明,利用REMI技术,将β-1,4-葡聚糖酶基因重组到木霉染色体DNA上,是获得高效木霉工程菌株的有效手段。     

拮抗放线菌B1菌株鉴定及其防治番茄灰霉病的初步研究

为明确放线菌B1菌株在植物病害生物防治中的应用潜力,采用平板对峙培养法、离体叶片和果实及温室盆栽苗测定其抑菌作用,通过多相分类法研究其分类地位,并且采用单因子试验与正交试验相结合的方法,筛选出该菌株的液体发酵培养基配方.结果表明:菌株B1对10种植物病原真菌和3种植物病原细菌有抑制作用,其中对番茄灰霉病菌、番茄早疫病菌、小麦纹枯病菌、甘蓝黑腐病菌和西瓜果腐病菌的抑制作用较强,对番茄灰霉病菌的生长抑制率达86.25%;菌株B1的代谢产物对番茄灰霉病菌菌丝有致畸作用;菌株B1发酵上清液在离体叶片和活体植株上对番茄灰霉病具有良好的生防作用,其防治效果分别为68.80%和64.03%.根据形态特征、培养性状、生理生化特性和16S rDNA序列分析结果,将菌株B1初步鉴定为淡紫灰链霉菌Streptomyces lavendulae.通过正交试验筛选出菌株B1的液体发酵培养基组成为:葡萄糖15 g、玉米浆20g、NH4H2PO40.5 g、MgSO41.0 g、自来水1 000mL,pH 7.2～7.4.     

浙紫薯1号及其突变体新栗再生体系的初步建立

[目的]为研究浙紫薯 1 号及其突变体新栗的遗传转化及 IbMYB1 基因控制紫甘薯花色苷的合成机理奠定材料基础。[方法]以浙紫薯 1 号及其突变体新栗为研究材料,选择不同部位外植体及不同培养基进行甘薯离体再生体系及胚状体诱导试验。[结果]利用茎尖、带芽茎段的外植体在 MS(+0.000 3 g/ml VB 溶液)培养基中培养可快速获得无菌试管苗;在愈伤组织的诱导试验中,新栗的叶柄在 LS 培养基中的出愈率较高,同一品种的甘薯其茎尖、茎段的出愈率均高于叶片、叶柄的出愈率,不同外植体的生长状况最好的是茎尖,其次是茎段,叶片和叶柄的生长状况都分别出现不同程度的愈伤组织黄化、褐化、皱缩、变枯性状。诱导胚状体发生的培养基为 LS+4 mg/L 脱落酸(ABA)+1 mg/L赤霉素(GA₃)+ 蔗糖 30 g/L+ 琼脂 6 g/L(pH 5.8)。[结论]初步建立了甘薯离体再生体系,并从叶片、叶柄、茎尖、茎段不同外植体都获得了胚性愈伤组织,利用茎尖、茎段的胚性愈伤组织成功诱导出胚状体。