稻瘟病菌无毒基因研究进展

水稻与稻瘟菌间存在广泛而特异的相互作用,是研究寄主与病原物互作的重要模式系统。无毒基因是病原物遗传因子,能诱发寄主植物产生抗病性,是稻瘟菌与水稻互作最重要的激发子。为寻求稻瘟病防治的新策略,本研究概述了研究稻瘟病菌无毒基因的意义,归纳了抗性基因与无毒基因互作的3种模式,总结了国内外稻瘟病菌无毒基因的克隆及功能研究,探讨了无毒基因在生产上病害流行预测中的应用,指出利用抗性基因与无毒基因的关系对稻瘟菌分类将会更为科学和实用,应进一步加快稻瘟病菌无毒基因的克隆。     

黄河裸裂尻生长激素(GH)基因的PCR扩增和克隆

为了克隆黄河裸裂尻生长激素(GH)基因并获得表达产物,试验采用异硫氰酸胍法提取黄河裸裂尻脑组织总RNA,以分离的RNA为模板,采用RT-PCR扩增获得GH基因cDNA,将cDNA插入质粒pQE30中,并在大肠杆菌RB791中表达,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导后,SDS-PAGE电泳检测蛋白的表达情况。结果表明:扩增后黄河裸裂尻GH基因长度为508 bp,黄河裸裂尻GH基因与青海湖裸鲤的同源性很高,电泳显示出1条新的分子质量约为14.4 ku的特异性条带。     

安义瓦灰鸡早期生长规律研究

通过对不同羽速基因及不同性别安义瓦灰鸡的早期生长规律进行研究,结果表明:不同性别安义瓦灰鸡的早期生长规律有较大差异(P<0.01),不同羽速基因安义瓦灰鸡的早期生长规律差异不显著;安义瓦灰鸡的生长速度与出壳重无关,出壳重只影响其育雏期的体重;性别对体重的影响较晚,且公鸡大于母鸡。     

细毛羊黑素皮质激素受体1(MC1R)基因与毛色表型的研究

为了研究黑素皮质激素受体1(MC1R)基因与黑色素生成的关系及该基因突变导致毛色发生改变的机理,研究采用RT-PCR和PCR等技术克隆得到了白色东北细毛羊MC1R基因长1 093 bp的cDNA片段,编码364个氨基酸,其中包括70个氨基酸信号肽和294个氨基酸的成熟肽,具有7个跨膜结构域。结果表明:细毛羊cDNA与绵羊、牛、马、人、小鼠、犬等同源性均大于91%,氨基酸序列与其他动物的同源性高于89%;除绵羊外与其他动物相比有5处发生突变,且这5处突变均位于MC1R蛋白跨膜结构区;而细毛羊和绵羊之间只有1处发生突变,由K→M,同源性达98.97%。说明细毛羊与绵羊的亲缘关系最近。     

西门塔尔牛CS基因多态性与肉质性状的相关性分析

以柠檬酸合成酶基因（citrate synthetase,CS）为候选基因,分析了该基因外显子3的遗传多态性与西门塔尔牛肉质性状的相关关系。选用95头西门塔尔牛为试验材料,采用PCR-RFLP的方法对该基因的外显子多态性进行检测,并利用SPSS软件对该外显子多态性与肉质性状的相关性进行分析。结果表明：CS基因第三外显子第206bp处存在G/A突变,该基因多态性与脂肪颜色呈显著相关,AA型显著高于BB型。对其他性状的影响差异不显著。通过研究CS基因外显子的多态性,为西门塔尔牛利用该基因的多态性进行分子育种提供了试验依据。     

Canine corneal fibroblast and myofibroblast transduction with AAV5

Objective The aims of this study were (1) to determine the efficacy of adeno‐associated vector serotype 5 (AAV5) for delivering gene therapy to canine corneal fibroblasts (CCFs) and myofibroblasts (CCMs) using enhanced green fluorescent protein (GFP) marker gene and (2) to evaluate the cytotoxicity of AAV5 to CCFs and CCMs using an in vitro model. Methods Healthy donor canine corneas were used to generate primary CCFs by growing cultures in minimal essential medium supplemented with 10% fetal bovine serum. Canine corneal myofibroblasts were produced by growing cultures in serum‐free medium containing transforming growth factor β1 (1 ng/mL). An AAV5 titer (6.5 × 10¹² μg/mL) expressing GFP under control of hybrid cytomegalovirus + chicken β‐actin promoters (AAV5‐gfp) was used to transduce CCF and CCM cultures. Delivered gene expression in CCFs and CCMs was quantified using immunocytochemistry, fluorescent microscopy, and real‐time PCR. Transduction efficacy of the AAV5 vector was determined by counting DAPI‐stained nuclei and EGFP‐positive cells in culture. Phase‐contrast microscopy, trypan blue, and dUTP nick end labeling (TUNEL) assays were used to determine the toxicity and safety of AAV5 in this canine corneal model. Results Topical AAV5 application successfully transduced a significant population of CCFs (42.8%; P < 0.01) and CCMs (28%; P < 0.01). Tested AAV5 did not affect CCF or CCM phenotype or cellular viability and did not cause significant cell death. Conclusions The tested AAV5 is an effective and safe vector for canine corneal gene therapy in this in vitro model. In vivo studies are warranted.     

新城疫病毒F基因的真核表达及其免疫原性检测

为了探讨F基因在DNA免疫防制新城疫(ND)中的免疫原性,将NDV Z株F基因插入到真核表达载体pcDNA3.1/V5-H is-TOPO中,构建了真核表达质粒pcDNA NDV ZF。在脂质体作用下将pcDNA NDV ZF转染CEF细胞,用间接免疫荧光试验检测,在CEF细胞中可见有大量F蛋白表达。将重组质粒以100μg/只的剂量肌注免疫SPF雏鸡,经间接ELISA试验检测二免前后的血清,结果证明,pcDNA NDV ZF基因可在SPF鸡体内诱导相应抗体的产生,具有特定的免疫原性。     

影响波尔山羊超排效果的因素

对204只(次)波尔山羊采用C IDR+FSH+PG法超数排卵(以下简称超排),发情配种后第6天采用手术法从子宫角采胚,采胚成功率为92.16%(188/204),头均获胚(16.68±7.89)枚,其中头均获可用胚(14.11±8.37)枚,可用胚率84.66%(2 654/3 135)。对不同国家产FSH、不同剂量FSH、注射LRH+P4、不同季节、重复超排、左右侧卵巢等因素对波尔山羊超排效果的影响进行了研究。结果表明,以日本和国产(动物所)FSH超排效果为佳,头均获可用胚分别为(15.66±8.26)枚(n=89)和(15.39±6.91)枚(n=23);日本产FSH 14~16 mL组效果最佳,头均获可用胚(19.63±8.96)枚(n=19);注射LRH+P4组头均获可用胚(16.04±8.84)枚(n=80),极显著高于对照组(12.16±7.68)枚(n=62);春季、秋季、冬季超排头均获可用胚分别为(10.86±5.10)枚(n=7)、(11.30±8.29)枚(n=23)、(11.00±6.17)枚(n=10),差异不显著;重复超排(间隔12月)第1次头均获可用胚(15.08±5.12)枚(n=26),第2次头均获可且胚(16.92±8.32)枚(n=26)。     

猪CD4分子的全长cDNA克隆与序列分析

CD4分子为动物辅助性T细胞（TH）和部分胸腺细胞的共受体与信号传导分子，参与TCR介导的TH细胞活化和胸腺细胞分化过程。本研究应用RT-PCR和RACE技术从猪胸腺细胞总RNA中扩增克隆了猪CD4全长cDNA序列，并进行了序列特性分析。序列分析结果表明，在猪胸腺细胞和外周血淋巴细胞中存在2种方式剪接的CD4 mRNA转录本，其中一种mRNA转录本缺失编码40个氨基酸残基的120nt序列，提示该转录本可能编码猪分泌型CD4分子；猪CD4全长cDNA序列为2715nt。其中5′非编码区159nt，3′非编码区1183nt，1374nt的开放阅读框编码457个氨基酸的猪CD4前体蛋白（含4个糖基化住点）；猪CD4分子的7个Cys残基（Cys^43、Cys^122、Cys^327、Cys^418、Cys^421、Cys^444和Cys^446）和2个Ser残基（Ser^432和Ser^439）在动物种间保守；在猪CD4分子胞浆区．存在高度保守的Src家族蛋白酪氨酸激酶p56^kk。识别位点KKTCQC和内化相关双亮氨酸基序。推导氨基酸序列分析结果显示，猪与人、免、猫、狗和鼠CD4蛋白的氨基酸同源性分别为56．0％，54．5％。56．9％，56．5％和44．9％。     

牛分枝杆菌MPB70基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

本研究以牛分枝杆菌Vallee111染色体DNA为模板,以MPB70成熟蛋白基因特异性引物进行PCR扩增,获得约500bp的DNA片段.通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至pGEM-T Vector中,成功地构建出克隆载体pGEM-T-70.以BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切pGEM-T-70和pET28a( ),并将纯化的MPB70基因亚克隆至pET28a( )中,构建出原核表达载体pET28a-70.将pET28a-70转化至感受态E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,可见约25Ku外源蛋白带.Western blot分析发现,该蛋白具有牛分枝杆菌抗原性,从而为进一步研究MPB70的亚单位疫苗及DNA疫苗奠定基础.