湿地公园及昆明地区湿地园林的调查

主要阐述了昆明湿地园林的园林布局、表现类型及所具有的特色,分析了昆明湿地园林存在的问题和今后的发展趋势,对昆明湿地园林的改造和昆明城市建设提出了新颖的观点和展望。     

The Lapinized Chinese Strain Vaccine Against Classical Swine Fever Virus： A Retrospective Review Spanning Half A Century

Classical swine fever （CSF）, a list A disease of Office International des Epizooties, is caused by classical swine fever virus （CSFV） belonging to the Flaviviridae family. The well-known lapinized Chinese strain of CSFV, also known as C-strain, was developed in China in the mid-1950s. In the past half a century, the vaccine has been proved to be safe and immunogenic in pigs of essentially any age. It is of high efficacy, providing immunized animals with broad-spectrum, sometimes lifelong, protection, which is contributed by both cell-mediated immunity and humoral immunity, against essentially all genotypes or subgenotypes of the virus. The maternal antibodies derived from immunized sows can confer solid protection of their offspring from disease; however, they have been proved to inhibit the successful active immunization of C-strain vaccine. The complete genomes of C-strain and dozens of established or field strains have been sequenced and annotated. Recently, the reverse genetics system of C-strain has been developed, resulting in several C- strain-derived candidate marker vaccines. Many countries manage to control or even eradicate CSF with the aid of mass vaccination with C-strain. in spite of these efforts, the eradication of the disease worldwide remains a big challenge and needs to go a long way, and provably still resorts to genetically modified C-strain vaccine. The authors present an overview of the characteristics of the vaccine, which has stood the test of half a century.     

一株猪细小病毒7群的鉴定和分离

猪细小病毒7群(Porcine parvovirus 7,PPV-7)是2016年首次从美国猪群发现和鉴定的新的猪细小病毒。为弄清我国猪群中是否存在PPV-7,本文用PPV-7特异性的实时荧光定量PCR和常规PCR方法对采集的10份猪流产胎儿和10份保育仔猪病料分别进行检测,结果发现其中1份保育仔猪样品的常规PCR和实时荧光定量PCR检测结果均为阳性,常规PCR扩增出的246 bp特异性条带测序和分子遗传演化时发现,该序列与PPV-7参考毒株KU5637332和KY996757的同源性分别为99.6%和98.0%,表明该样品中含有PPV-7,进一步用PK-15细胞分离病毒,连续传代5次后PK-15细胞都没有出现典型的细胞病变,但其上清液用实时荧光定量PCR方法都可以检测到该病毒。本研究结果证实我国猪群中存在PPV-7的感染,且检测到的PPV-7毒株能在PK15细胞中增殖。     

不同剂量氟苯尼考对猪血液生化指标及猪瘟抗体的影响

40头70日龄健康猪随机分为高、中、低剂量组和对照组,每组10头,各试验组注射猪瘟弱毒疫苗(2头份/猪),同时高、中、低剂量组分别按每千克体质量于饲料中加入120、60、30 mg氟苯尼考,连续给药7 d,停药后1、8、15、22、29 d,对相关的血液生化指标以及猪瘟抗体水平进行检测分析.结果表明,停药后1、8 d,所有氟苯尼考添加组的猪瘟抗体滴度下降,仅120 mg/kg组差异显著(P<0.05),停药15 d后抗体水平恢复至正常水平;60和120mg/kg给药组TP含量在停药后1、8 d均显著下降(P<0.05);所有给药组的ALT活性在所有检测时间内均显著上升(P<0.05或P<0.01);所有给药组的γGT活性在停药后1 d均显著上升(P<0.05),而60和120 mg/kg组γGT在第8天仍显著上升(P<0.05);所有给药组的BUN含量在停药后1 d均显著升高(P<0.05或P<0.01);AST、LDH、CHE活性和ALB、CRE含量与对照组相比无显著差异(P>0.05);表明每千克体质量60 mg以上氟苯尼考在饲料中饲喂7 d后,对部分生化指标有一定的影响,应引起重视.     

用荧光定量RT-PCR方法检测猪瘟病毒

为了建立能特异检测不同基因型猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV),同时又能区分其他瘟病毒的基因检测方法,本实验针对CSFV基因组5′端非编码区设计并合成了简并引物和TaqMan探针,在优化反应条件的基础上,成功地建立了特异检测CSFV的荧光定量RT-PCR检测方法。再以已知滴度的CSFV石门株血毒总RNA反转录产物建立标准品,该标准品可以用于定量临床样品中的CSFV滴度,所建立的荧光定量PCR方法可以灵敏地检测出10~(-0.82)个TCID_(50)病毒含量。最后用建立的方法对108份临床样品进行检测并同时进行病毒分离,荧光定量PCR方法检测出73份阳性样品且与病毒分离的符合率为100%,而常规RT-PCR只检测出54份阳性样品,表明本荧光定量RT-PCR法在检测猪瘟病料上具有潜在的应用价值。     

猪瘟、猪圆环病毒病和猪繁殖与呼吸综合征寡核苷酸芯片诊断方法的建立与初步应用

猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）和猪圆环病毒Ⅱ型（PCV-2）是引发猪繁殖障碍的主要病原,建立其基因芯片快速检测体系,对开发猪繁殖障碍快速检测试剂盒具有重要意义。根据GenBank中已发表的PRRSV、CSFV和PCV-2的病毒基因组序列,设计合成特异性引物和特异性较强的60mer的寡核苷酸探针,并将探针按所设计阵列固定于表面经氨基化修饰的玻片上,制备出寡核苷酸芯片。通过引物标记及特异性验证,建立了带标记引物的多重PCR检测体系,从而产生大量可与寡核苷酸探针特异性互补的带标记的DNA片段。将标有荧光染料的扩增产物与芯片上寡核苷酸探针杂交,扫描、分析芯片上荧光信号。结果表明,芯片上各样本对应探针位点呈现阳性荧光信号,而阴性对照和空白对照则基本不能检测到荧光信号。分别用基因芯片检测方法和PCR/RT-PCR检测60份临床病料,两者符合率高达92%,表明该检测技术能够用于临床病料的检测及快速诊断PRRSV、CSFV和PCV-2。     

“生物统计方法”课程题库建设与测试评价

以统编教材《田间试验和统计方法》中“生物统计方法”课程内容为主,根据经典测试理论建成“生物统计方法”课程题库,适用于农业高等院校农学类不同专业、不同对象、不同内容、不同时期及不同长度的测试.本科生测试 A,B,C 及研究生入学测试 D 的测试平均区分度、信度、效度分别为0.35,0.77,0.32,低区分度(D<0.1)题目占测试分数比例均在16%以下,自学测试 E 区分度为0.49.实例分析表明,题库组卷可控性强、难度适宜、区分度及信度较高。但是判断题目难度(0.14)及区分度(0.17)平均值偏低且平均变异系数(CV%)偏高(90.8%及135.3%).在题库定期更新中应注意改善判断及选择题目的参数估计及命题质量.     

三种鉴别诊断PRRSV美洲型经典毒株和变异株的方法比较

我国流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV）包括美洲型经典毒株和变异株。本研究应用RT—PCR、直接免疫荧光（ direct immunofluorescence asay, DFA ）及病毒分离3种检测方法对99份不同类型的猪繁殖与呼吸综合征临床疑似病料和人工感染病料进行检测。结果显示,RT—PCR检测试剂盒敏感性最高,DFA鉴别诊断试剂盒次之,病毒分离最差。DFA与病毒分离、RT—PCR的总符合率分别为92％和85．5％。RT—PCR灵敏性高,可作为PRRSV鉴别诊断的首选方法;DFA鉴别诊断法所需时间较短、特异性好,但需要一定的操作经验;病毒分离敏感性低、操作繁琐,阳性分离需要其它方法验证,不适合于PRRSV的鉴别诊断。     

猪瘟病毒衣壳蛋白与宿主丝/苏氨酸蛋白激酶N1相互作用的鉴定

为筛选并鉴定与猪瘟病毒(CSFV)衣壳(C)蛋白相互作用的宿主蛋白,本研究采用酵母双杂交技术以CSFV C蛋白为诱饵从猪外周血单个核细胞(PBMC)c DNA表达文库中筛选与之相互作用的宿主蛋白,共筛选到6种蛋白,分别为ATP5B、SON3、PKN1、PCBP1、RPS20和IQGAP1,根据Gene Ontology分析结果,这些蛋白分别参与细胞的增殖和代谢等过程。本研究选取丝/苏氨酸蛋白激酶N1(PKN1)进行进一步验证,经酵母共转化试验、免疫共沉淀试验和GST pull-down试验证实,宿主PKN1蛋白与CSFV C蛋白之间存在特异性结合。本研究首次证明PKN1与CSFV蛋白之间的相互作用关系,为进一步研究PKN1蛋白在CSFV感染过程中发挥的作用奠定了基础。