牛奶中四环素类药物残留的确证方法--液质联用法

为了确证牛奶中土霉素、四环素、金霉素的残留，建立了电喷雾高效液相色谱／串联质谱法，采用正离子检测，选择离子方式扫描。牛奶样品经Mcllvaine-EDTA缓冲溶液提取离心后，上清液过C18小柱净化后甲醇洗脱，然后氮气吹干，甲醇-水（30：70）溶解（以去甲金霉素为内标）后进行分析。结果表明，牛奶中土霉素、四环素和金霉素的检测限（LODs）为0．01mg／L，定量限（LOQs）为0．025mg／L。3种药物在0．05～0．5mg／L范围内均呈良好线性关系，并且3个添加浓度的平均回收率范围为70．0％～87．6％，批内变异系数不大于10％，以最大残留限量浓度添加后所测得回收率的批间变异系数小于15％。本方法特异性强、灵敏度高、准确可靠，可作为牛奶及其他动物组织中四环素类药物残留的确证方法。     

粪源抗生素金霉素和喹乙醇在养殖水体中的残留及对锦鲤的生态毒理效应研究

用含不同剂量金霉素和喹乙醇的猪粪饲喂锦鲤,分别测定摄食10、20和30d时肌肉组织中抗生素含量、体表和消化道微生物数量,试验结束时对肝脏中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性和脂质过氧化物丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量进行了测定。结果表明,猪粪中金霉素和喹乙醇在养殖水体中溶出存在较大差异,从试验第1d到结束养殖水体中喹乙醇浓度Ⅲ和Ⅳ组分别为0．05-0．32mg·kg^-1和0．12～0．70mg·kg^-1,锦鲤肌肉组织中喹乙醇浓度Ⅲ和Ⅳ组在试验的10、20和30d分别为1．87、5．25、3．83mg·kg^-1和2．96、4．33、mg·kg^-1。没有在水环境和锦鲤体内检测到金霉素。锦鲤体表和消化道微生物随着加样次数增加,数量也急剧上升。猪粪中的成分能显著降低SOD酶活性,增加MDA含量,而加入金霉素和喹乙醇也未能使锦鲤肝脏SOD活性和MDA含量恢复到机体正常水平。     

口服金霉素微囊化颗粒对绵羊瘤胃微生物菌群数量的影响

目的 评估口服自主研制的金霉素微囊化颗粒对绵羊瘤胃微生物菌群数量的影响。方法 选取体质量（29.0±2.3） kg、6月龄左右、体况良好的18只绵羊,随机分为6组,包括1个空白对照组和5个给药组,每组3只。空白对照组只饲喂基础饲粮;5个给药组分别为试验I组：基础饲粮＋普通金霉素预混剂颗粒,试验II组：基础饲粮＋氢化油处方组金霉素微囊化颗粒,试验III组：基础饲粮＋PEG4000/单甘脂(质量比为5∶5)处方组金霉素微囊化颗粒,试验IV组：基础饲粮＋氢化油/单甘脂(质量比为9∶1)处方组金霉素微囊化颗粒,试验V组：基础饲粮＋氢化油/单甘脂(质量比为8∶2)处方组金霉素微囊化颗粒。给药组绵羊金霉素最终给药剂量均为25 mg/kg,每天给药1次且均在晨饲前灌胃给药,连续给药5 d,通过瘤胃液采样器采集瘤胃内容物。采集的瘤胃内容物经4层纱布过滤后,收集滤液装于冻存管内,所有样品经液氮速冻后置于?80 ℃保存,运用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术对绵羊瘤胃液相瘤胃微生物进行定量检测。结果 与普通金霉素预混剂颗粒相比,氢化油/单甘脂(质量比为9∶1)处方组金霉素微囊化颗粒有较好效果,只显著增加了产琥珀酸拟杆菌的数量,对绵羊瘤胃其他微生物菌群数量影响均不显著;与空白对照组相比,氢化油/单甘脂(质量比为9∶1)处方组金霉素微囊化颗粒及PEG4000/单甘脂(质量比为5∶5)处方组金霉素微囊化颗粒有相对较好效果,分别只对牛链球菌及产琥珀酸拟杆菌的数量有显著降低趋势,对绵羊瘤胃其他微生物菌群数量影响均不显著。结论 氢化油/单甘脂(质量比为9︰1)处方组金霉素微囊化颗粒对绵羊瘤胃微生物数量抑制作用较小,符合临床应用要求。     

不同加入方式下金霉素对猪场污水厌氧消化系统的影响

采用两种金霉素(CTC)加入方式,即经体内代谢法(系统中加入经饲喂金霉素后所获含金霉素的猪粪)和直接添加法(系统中加入空白猪粪+金霉素),两种CTC加入浓度为310.54 mg·kg~(-1)干猪粪(高浓度)和160.05 mg·kg~(-1)干猪粪(低浓度),研究了金霉素对猪场污水厌氧消化系统影响,并比较分析了两种研究方法间的差异。试验在有效容积为1.3 L的模型厌氧消化系统中进行,恒温30℃,连续7 d加入含金霉素浓度为310.54 mg·kg~(-1)和160.05 mg·kg~(-1)的猪粪,检测了加药期和停药期金霉素及其活性代谢产物4-差向异构金霉素浓度、系统产甲烷量、pH、产甲烷菌多样性等指标。结果表明,金霉素加入浓度为310.54 mg·kg~(-1)的直接添加组中金霉素浓度显著高于经体内代谢组(P0.05),4-差向异构金霉素浓度则显著低于经体内代谢组(P0.05);与经体内代谢组相比,加药期内两种浓度的直接添加组产甲烷量分别显著降低了4.40%、5.22%(P0.05),而且直接添加组中沼液pH显著低于经体内代谢组和空白对照组(P0.05);两种研究方法均未显著影响厌氧消化系统产甲烷菌多样性(P0.05)。由此可知,采用直接添加法时,加入310.54 mg·kg~(-1)的金霉素会导致厌氧消化系统中金霉素大量累积,并显著降低沼液pH和抑制加药期内厌氧消化系统的产甲烷量。但采用经体内代谢法时金霉素的加入未显著影响系统产甲烷量。因此,在本试验条件下,两种研究方法所得金霉素对猪场污水厌氧消化系统的影响不同,但经体内代谢法能更好地反映生产实际,获得更准确的研究结果。     

金霉素在鸡排泄物中的残留及降解动态

研究了肉鸡经由饲料摄入不同剂量金霉素后其排泄物中金霉素残留量的变化,以及不同处理条件下排泄物中金霉素残留的降解动态.结果表明:肉鸡分别摄入含金霉素204.23 mg-kg-1和589.66 mg·kg-1饲料,分别有62.37%和79.84%的金霉素被排入排泄物;排泄物中的金霉素残留浓度分别在6和8 h达到峰值,然后逐渐减少,到50和72 h分别降到检测限以下.金霉素在鸡排泄物中的降解动态符合一级动力学方程(R2>0.993 7) .排泄物中金霉素的降解方式主要是微生物降解和光解,并且与排泄物中金霉素含量有关,金霉素含量越高,降解半衰期越长.灭菌和避光处理明显减缓了金霉素的降解速率,灭菌兼避光处理组半衰期为138.62 d,避光未来菌组半衰期为63.01 d,光照未灭菌处理排泄物中金霉素含量从高到低为33.57、20.34和10.49 mg·kg-1,其半衰期分别为67.29、37.87和13.46 d.这表明肉鸡经饲料服用金霉素后有较高比例金霉素以原形形式随排泄物排出,且不易被降解.提示排泄物中高含量金霉素残留存在较大环境风险.     

三种抗生素对蔬菜种子芽与根伸长的生态毒性效应

采用水培法研究金霉素(Chlortetracycline,CTC)、诺氟沙星(Norfloxacin,NFLX)、磺胺对甲氧嘧啶(Sulfametoxydiazine,SMD)三种抗生素对黄瓜、油菜、小白菜三种蔬菜种子芽和根伸长的影响,比较分析了抗生素的生态毒性差异和相对敏感的蔬菜与指标。结果表明:(1)根长是更为敏感的生态毒性指标;(2)三种抗生素对黄瓜的生态毒性依次是金霉素磺胺对甲氧嘧啶诺氟沙星,对油菜和小白菜的生态毒性则分别是磺胺对甲氧嘧啶金霉素诺氟沙星和磺胺对甲氧嘧啶诺氟沙星金霉素;(3)三种蔬菜对于金霉素和磺胺对甲氧嘧啶胁迫的敏感性均为油菜小白菜黄瓜,而对于诺氟沙星胁迫的敏感性依次是小白菜黄瓜油菜。该结果为评价抗生素污染对生态环境和人体健康的潜在影响提供了理论依据。     

日粮中添加金霉素对肉鸡肾脏形态学的影响

为探明日粮中过量添加金霉素对肉鸡肾脏的影响,将健康肉鸡随机分为4组,其中1组肉鸡作为对照组,其余3组肉鸡日粮中添加不同剂量(30、40、50 mg/kg)的金霉素,制作肉鸡肾脏组织切片,在光学显微镜、电子显微镜下观察肾脏组织的变化.结果显示,对照组肉鸡肾小球滤过膜结构基本完整,各试验组肉鸡肾小球的滤过膜均有不同程度的损...     

金霉素对獭兔盲肠菌群和免疫功能的影响

为研究饲用金霉素对獭兔盲肠菌群和免疫功能的影响,采用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCRDGGE)和实时荧光定量PCR(qPCR)技术分析獭兔盲肠菌群;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞因子;qPCR技术对TLR2、TLR4mRNA进行定量检测。试验分为2组:对照组饲喂基础日粮;金霉素组在基础日粮中添加金霉素50mg/kg。结果表明:1)PCR-DGGE图谱显示,与对照组比较,金霉素组盲肠菌群结构和多样性等没有显著变化(P0.05);2)qPCR检测金霉素组普雷沃氏菌属数量是10.48(logcopy/g),对照组是10.10(logcopy/g),差异显著(P0.05);3)金霉素组獭兔外周血细胞因子IL-2、IL-4、TNF-α的浓度显著升高(P0.05),脾脏和肝脏指数均降低;4)回肠的TLR2、TLR4mRNA相对表达量和肝脏的TLR2 mRNA相对表达量均高于对照组,但差异不显著(P0.05)。在饲料中添加50mg/kg金霉素,对獭兔盲肠菌群结构和免疫功能均没有显著影响。     

金霉素微囊颗粒在猪体内的比较药动学研究

【目的】采用高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)建立了金霉素在猪血浆中的药动学检测方法,以三元健康杂交猪为对象,研究了10%和15%金霉素微囊颗粒在猪体内的药物代谢动力学,为金霉素的临床应用提供依据。【方法】16头大长白三元杂交猪,体重(20±2.5)kg,随机分为禁食组和非禁食组2组,采用三药剂三周期三交叉试验设计,分别按10 mg·kg^-1 b.w.静注盐酸金霉素溶液、40 mg·kg^-1 b.w.灌服10%和15%金霉素微囊颗粒。每次给药间隔为7 d,根据试验前设定好的时间点采集血样,分离血浆,进行HPLC-MS/MS测定,血药浓度-时间数据采用WinNonlin5.2.1软件非房室模型处理,计算主要药动学参数。血浆样品用0.1 mol·L^-1Na2EDTA-McIlvaine缓冲液超声提取,HLB固相萃取柱净化,35℃水浴吹干后用甲醇定容,进行HPLC-MS/MS分析测定。色谱柱为CNW C18柱;流动相为乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱,流速为0.25 mL·min-1;电喷雾离子源,多级反应监测正离子...     

金霉素胁迫下室内粪土模型中菌群多样性与四环素类抗生素耐药基因丰度研究

【目的】探究金霉素在粪土环境中对土壤微生物群落结构多样性和四环素类耐药基因(TRG)丰度的影响。【方法】分别设置金霉素质量0(对照)、10、100、1 000μg作为胁迫剂量,在处理后第1、7、14、28、56天采集样品,使用高通量测序和q PCR技术研究群落结构多样性和TRG丰度的变化。【结果】厚壁菌门能耐受低剂量(10μg)金霉素的毒害作用,对中、高剂量(100、1 000μg)敏感;放线菌门能耐受中、高剂量的毒害作用,生存繁殖具有一定优势;变形菌门的相对丰度除第28天各剂量组均显著低于对照组外,其余时间多显著高于对照组。金霉素–猪粪–土壤模型样品中共检测出3种四环素类抗生素耐药基因(TRGs):tet O、tet T和tet W,3个基因丰度变化趋势相似:与第1天相比,第56天各组TRGs相对含量均显著减少;低剂量组TRGs相对含量的日消减率在Ⅱ期高于对照组和中、高剂量组,第7天TRGs相对含量显著高于对照组以及中、高剂量组;中剂量组TRGs相对含量的日消减率在Ⅳ期低于其余组,第56天TRGs相对含量显著高于其余组。【结论】在猪粪–土壤环境中,不同菌群对金霉素敏感程度不同,金霉素可改变优势菌群的相对丰度,从而引起菌群群落结构的变化。金霉素可改变TRGs相对含量的日消减率,从而影响TRGs相对含量。本研究可为下一步养殖源性抗菌药物残留的生态风险评估提供一定依据。