海南3地区瓜绢螟种群对3种药剂的敏感性及其酶系比活性的测定

采用FAO推荐的微量点滴法,测定了海南澄迈、儋州、乐东3地区瓜绢螟种群对辛硫磷、三氟氯氰菊酯和阿维菌素等药剂的敏感性;并用分光光度计终止法对3地区瓜绢螟种群的乙酰胆碱酯酶、羧酸酯酶和多功能氧化酶的比活性进行了测定和比较。结果表明,3地区瓜绢螟种群对辛硫磷、三氟氯氰菊酯和阿维菌素等药剂的敏感性已产生差异,其变化与乙酰胆碱酯酶、羧酸酯酶和多功能氧化酶的比活性的关系表现为:3地区瓜绢螟种群对三氟氯氰菊酯不敏感性的强弱顺序与瓜绢螟的羧酸酯酶比活性在3地区的高低顺序是一致的,澄迈、儋州、乐东地区瓜绢螟对三氟氯氰菊酯的LD50和羧酸酯酶比活性分别为5.088 4、3.045 4、3.382 9 μg/g和22.329 9、8.085 6、17.621 5 μmoL/(min·mg)。3地区瓜绢螟种群对辛硫磷不敏感性的强弱顺序与瓜绢螟的乙酰胆碱酯酶和多功能氧化酶的比活性在3地区的高低顺序一致,澄迈、儋州、乐东瓜绢螟对辛硫磷的LD50分别为12.543 7、7.598 6、3.811 2 μg/g,其乙酰胆碱酯酶、多功能氧化酶比活性分别为14.660 5、8.578 3、5.3804 μmoL/(min·mg)和0.168 8、0.112 1、0.294 2 μmoL/(min·mg)。但3地区瓜绢螟种群对阿维菌素的不敏感性变化与所测定的3种酶系的比活性变化趋势不一致,澄迈、儋州、乐东瓜绢螟对阿维菌素     

一株耐热菌的产酶研究及其羧酸酯酶基因的克隆

将一株近海温泉耐热菌ZH1的16S rDNA克隆至pUCm-T载体进行测序,测序结果在NCB I上进行BLAST分析,并构建了系统发育树,将该菌株归属为Geobacillus sp.ZH1.在65℃条件下的产酶定性实验结果表明,该菌株产脂肪酶、木聚糖酶和碱性磷酸酶.以菌株ZH1的基因组DNA为模板,使用羧酸酯酶简并引物进行PCR扩增,将目的基因克隆至pUCm-T载体后进行测序,得到了741 bp的DNA片段.BLAST分析显示,目的基因预测编码羧酸酯酶,包含246个氨基酸.     

大豆蚜羧酸酯酶基因AgCarE的克隆、表达及活性分析

【目的】克隆大豆蚜羧酸酯酶基因,了解该酶的分子特性,为研究大豆蚜抗药性机理奠定基础。【方法】利用RT-PCR和RACE技术,克隆了1个大豆蚜羧酸酯酶基因的全长cDNA序列,命名为AgCarE,利用生物信息学软件及网上工具进行序列分析,以pET-21b为载体构建原核表达系统进行表达,并以α-醋酸萘酯溶液为底物进行活性测定。【结果】测序分析表明,羧酸酯酶基因AgCarE（GenBank登录号：JF970181）全长1 946 bp,编码526个氨基酸。羧酸酯酶AgCarE的等电点（pI）为6.08,蛋白活性中心包括3个氨基酸残基（催化三联体）：Ser186、Glu313、His434,5个N-联糖基化位点,具备羧酸酯酶的结构特征,属羧酸酯酶家族（EC: 3.1.1.-）。将该基因编码序列与pET-21b载体重组,经IPTG诱导表达HIS标签融合蛋白、SDS-PAGE分析和Western-blot检测,在大肠杆菌BL21中成功表达约59 kD的AgCarE蛋白,以α-醋酸萘酯为底物,检测表达的羧酸酯酶活性为0.036 mmol/100 μL酶液。【结论】成功克隆、表达了大豆蚜羧酸酯酶蛋白AgCarE,以α-醋酸萘酯为底物,检测表达的羧酸酯酶活性为0.036 mmol/100 μL酶液,有助于进一步了解羧酸酯酶的结构特征及水解作用,为设计研发新型杀虫剂提供可能。     

不同防治田内不同发育期拟环纹豹蛛乙酰胆碱酯酶及羧酸酯酶的活性比较

利用紫外分光光度法研究了生物防治田和化学防治田内不同发育期拟环纹豹蛛Pardosa pseudoannulata乙酰胆碱酯酶(AChE)和羧酸酯酶(CarE)的活性特征。结果表明,化防田拟环纹豹蛛各发育时期AChE活性均较生防田中的低,其各发育期AChE的Km值也均明显高于生防田种群。从整个发育期来看,幼体的AChE活性最高,卵囊的最低,说明不同发育阶段AChE活性存在较大差异。而CarE的活性正相反,化防田种群卵囊、幼蛛、雌成蛛和雄成蛛的CarE活性均高于相应生防田种群,且幼蛛的CarE活性高于相应成蛛,生防田种群每一发育阶段CarE的Km值也均高于相应的化防田种群。表明化防田中的拟环纹豹蛛有可能对部分农药产生了一定程度的抗药性。     

三种内吸性杀虫剂对棉花多酚氧化酶和羧酸酯酶活性的影响

用含不同浓度氧化乐果、吡虫啉和丁硫克百威的营养液分别处理棉花幼苗,研究不同处理时间其多酚氧化酶和羧酸酯酶活性的变化。结果表明,3种内吸性杀虫剂对两种酶活性的影响不仅与药剂种类有关,还具有一定的剂量效应和时间效应。400 mg/L 氧化乐果处理后24 h,棉花幼苗中多酚氧化酶活性比对照降低21.6%; 50 mg/L吡虫啉处理后120 h,多酚氧化酶活性比对照增 高47.3%; 200 mg/L丁硫克百威处理后72 h,多酚氧化酶活性增高75.7%。氧化乐果处理后120 h 内,各处理羧酸酯酶的活性均低于对照,且抑制率在70%以上; 50 mg/L吡虫啉处理后120 h,羧酸酯酶活性比对照增高30.7%;丁硫克百威处理后120 h内,羧酸酯酶活性与对照比较均无显著差异。     

溴氰菊酯和辛硫磷亚致死剂量对甜菜夜蛾酶活性的影响

研究了溴氰菊酯和辛硫磷亚致死剂量处理后,甜菜夜蛾羧酸酯酶(CarE)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)、乙酰胆碱酯酶(AChE)的活性变化规律,结果表明:经辛硫磷亚致死剂量5.20mg/kg和溴氰菊酯亚致死剂量0.73mg/kg处理后,甜菜夜蛾体内CarE和GST均被不同程度的抑制,辛硫磷处理后24h时与对照相比AChE活性下降了24.87%,而溴氰菊酯对AChE活性没有明显抑制作用。     

不同寄主植物对小菜蛾羧酸酯酶活性的影响

取食６种不同十字花科植物的小菜蛾各龄幼虫之间，α－ＮＡ羧酸酯酸和β－ＮＡ羧酸酯酶活性显著不同，其中以取食花椰菜的小菜蛾幼虫羧酸酯酶的活性最高。取食不同寄主植物的小菜蛾幼虫羧酸酯酶活性高低顺序为：花椰菜＞西洋菜＞白菜＞菜心＞甘蓝＞萝卜。     

Biochemical and molecular mechanisms of diafenthiuron resistance in the whitefly,Bemisia tabaci

B-biotype Bemisia tabaci has developed high levels of resistance to many insecticides. To investigate the risks and explore possible mechanisms of resistance to diafenthiuron in B. tabaci, a 32.8-fold diafenthiuron-resistant strain (R-DfWf) was established after selection for 36 generations compared with the susceptible strain (S-Lab). Biochemical assays showed that the activity of cytochrome P450 towards p-NA was significantly higher (4.37-fold higher) in the R-DfWf strain than in the S-Lab strain. Similarly, the carboxylesterase (COE) activity and glutathione S-transferase (GST) activity were also significantly higher (3.12- and 1.83-fold higher, respectively) in the R-DfWf strain than in the S-Lab strain. The expression of five of seven P450 genes was significantly higher (>3-fold) in the R-DfWf strain than in the S-Lab strain. The expression of COE2 was significantly higher (>2.5-fold) in the R-DfWf than in the S-Lab strain. The expression of GST and GST2 was significantly higher (>2.3-fold) in the R-DfWf than in the S-Lab. Thus, cytochrome P450, COE and GST may appear to be responsible for the resistance to diafenthiuron in B. tabaci. It is also valuable for usage of insecticides for resistance management and control of this species.     

水稻品种抗性对虫体酯酶的影响

采用苗期群体鉴定法对供试水稻品种进行了抗性鉴定,在此基础上测定了取食不同抗性水稻品种的褐稻虱(Nilaparvata lugens)羧酸醑酶、酸性及碱性磷酸酯酶活力的变化。结果表明,取食感虫品种的褐稻虱若虫及第2代若虫体内上述三种酶的活力明显高于取食抗虫品种的;取食中抗品种的褐稻虱若虫三种酶的活力介于取食感虫和抗虫品种的若虫之间。这一结果与褐稻虱在不同抗性水平上水稻品种的存活率和发育进度是一致的。表明抗虫品种对褐稻虱具有抗生机制,从而抑制了虫体的正常生长发育。取食不同水稻品种的褐稻虱的羧酸酯酶米氏常数(Km)值无明显差异,但最大反应速度(Vmax)值差异极显著。取食感虫品种的 Vmax 值明显高于取食抗虫品种的。这表明取食不同抗性水稻品种的褐稻虱羧酸酯酶性质相同,差异主要是由于酶量的不同。     

寄主植物对松墨天牛的营养效应及对体内酯酶与羧酸酯酶活性的影响

分别用马尾松、雪松、火炬松、湿地松和黑松饲养松墨天牛,研究不同寄主植物对松墨天牛补充营养期的营养效应以及对体内酯酶与羧酸酯酶活性的影响.结果表明:不同寄主植物对补充营养期松墨天牛的营养效应、酯酶与羧酸酯酶的活性有显著影响.用马尾松和雪松饲养的试虫,羽化后第5天体质量开始增加;其余3种树种饲养的试虫,至第7天体质量才开始增加.取食马尾松的松墨天牛雌、雄成虫,其相对取食量、相对代谢率和食物利用率均高于取食其他4种寄主植物的试虫;取食马尾松的松墨天牛雌、雄成虫体内酯酶和羧酸酯酶的活性也显著高于取食其他寄主的试虫;试验结果表明:马尾松是松墨天牛补充营养期的最适寄主.