游泳应激对小鼠肾脏、肺脏和脑组织脂质过氧化状态的影响

为探讨游泳应激对小鼠肾脏、肺脏和脑组织脂质过氧化水平的影响,本试验选取50只小鼠进行游泳试验,于游泳前、游泳10、20、30、50 min后分别随机选取10只小鼠眼眶采血致死,采集肾脏、肺脏和脑组织,测定样品中MDA含量、SOD和GSH-Px活性。结果表明,10或20 min游泳应激后,小鼠肾脏、肺脏和脑组织MDA含量均显著增加(P<0.05),之后均有不同程度的降低;游泳过程中小鼠肾脏SOD活性持续升高,30和50 min后均显著升高(P<0.05),游泳20 min后肺脏SOD活性显著降低(P<0.05),30 min后有所回升,50 min后又轻微下降,游泳过程中脑组织SOD活性均无显著性变化;游泳20和30 min后,肾脏GSH-Px活性显著增加(P<0.05),50 min后显著下降(P<0.05),游泳前40 min过程中肺脏GSH-Px持续下降,30 min组显著降低(P<0.05),游泳10和20 min后,脑组织GSH-Px活性显著降低(P<0.05),之后发生波动性变化。结果提示,游泳应激显著影响小鼠肾脏、肺脏和脑组织脂质过氧化水平,推测游泳应激可能引起小鼠全身脂质过氧化反应。     

Studies on the immune status of calves with chronic inflammation and thymus atrophy

The thymus is a primary lymphoid organ where the primary T cell repertoire is generated. Thymus atrophy is induced by various conditions, including infectious diseases, glucocorticoid treatment, and poor breeding management. Cattle with thymus atrophy tend to exhibit weak calf syndrome, a condition in which approximately half of neonates die shortly after birth. Calves with thymus atrophy that survive the first month typically contract chronic inflammatory diseases. In this study, we analyzed the populations of the peripheral blood mononuclear cells and thymocytes in calves with thymus atrophy. In addition, we evaluated polarization of master gene and cytokine mRNA expression in peripheral blood CD4⁺ cells in the calves. The population of CD4⁺CD8⁺ cells in thymus of the calves with thymus atrophy was lower than that of control calves. IL10 mRNA expression in peripheral blood CD4⁺ cells of calves with thymus atrophy was significantly lower than that of control calves. TBX21 mRNA expression in peripheral CD4⁺ cells of thymus atrophy calves was tended to be higher than that of the control group. In addition, FOXP3 mRNA expression in peripheral CD4⁺ cells of the thymus atrophy calves was tended to be lower than that of the control calves. Thymus atrophy calves exhibited chronic inflammatory disease leading, in severe situations, to conditions such as pneumonia with caseous necrosis. These severe inflammatory responses likely are due to decreases in IL10 mRNA expression, impairing control of macrophages, one of the main cell fractions of natural immunity.     

Enolase在鸭疫里默氏杆菌侵袭鸭脑微血管内皮细胞中的作用

旨在明确鸭疫里默氏杆菌烯醇化酶(Enolase)在其侵袭鸭脑微血管内皮细胞(DBMEC)以及血脑屏障(BBB)中的作用。本研究以鸭疫里默氏杆菌RA-LZ01株为亲本株，利用同源重组和结合转移的方法构建enolase基因缺失株ΔEnolase和回复株cΔEnolase，并测定RA-LZ01、ΔEnolase和cΔEnolase对DBMEC黏附和侵袭能力的差异；用上述菌株感染雏鸭，测定雏鸭血液和脑组织中的载菌量。结果表明，与亲本株RA-LZ01相比，缺失株ΔEnolase对DBMEC的黏附率和入侵率均极显著降低；回复株cΔEnolase恢复了对DBMEC的黏附和入侵能力。感染RA-LZ01、ΔEnolase和cΔEnolase菌株的雏鸭的血液载菌量无显著差异；与感染RA-LZ01和cΔEnolase菌株的雏鸭相比，感染ΔEnolase菌株的雏鸭脑组织中的载菌量极显著降低。以上结果说明，Enolase与鸭疫里默氏杆菌黏附和入侵DBMEC以及入侵雏鸭脑组织显著相关，可能为介导鸭疫里默氏杆菌突破鸭血脑屏障的毒力因子。     

舞毒蛾脑和咽下神经节的形态及其三维模型构建

为探究舞毒蛾控制和分泌滞育激素的器官，于室内对舞毒蛾幼虫的中枢神经系统进行显微解剖，对其中枢神经系统和咽下神经节进行观察，并测量舞毒蛾1~5龄幼虫咽下神经节长度、宽度和面积，运用共聚焦激光扫描显微镜对脑和咽下神经节玻片逐层扫描，获取舞毒蛾幼虫脑和咽下神经节各高度的图像，将扫描后的图片描绘成1组多边图形，将其导入软件中，软件将多边图形叠加后构建其三维模型。结果显示，舞毒蛾幼虫的中枢神经系统包括脑、咽下神经节、3个胸部神经节和7个腹部神经节；舞毒蛾不同龄期幼虫的咽下神经节在外观形态上无较大差异；随着龄期增长，舞毒蛾咽下神经节的长度、宽度以及面积也不断增加，其中4龄幼虫咽下神经节的长度、宽度以及面积的增长速度最快，而5龄幼虫咽下神经节的长度、宽度以及面积的增长速度略微下降，1~3龄幼虫咽下神经节的长度、宽度以及面积的增长速度大致相同，均小于4龄和5龄幼虫。通过测量外部形态结构重建了舞毒蛾脑和咽下神经节的三维模型。     

重组子小插入片段间接内切酶图谱研究

针对重组子中１００ｂｐ左右的小插入片段与载体不能同时在普通琼脂糖胶上呈现而无法用内切酶图谱鉴定此类重组子的问题，提出了小插入片间接内切酶图谱，并用普通琼脂糖凝胶电泳研究分析了此类图谱。     

低氧胁迫和恢复对长吻鮠脑组织低氧应答基因、生理生化指标和食欲的影响

为了解长吻鮠脑组织应对低氧胁迫的调控机制，实验运用酶活性测定、H.E染色、qRT-PCR和TUNEL检测等方法，分析比较了低氧胁迫[(0.8±0.1) mg/L] 0、2、4、6 h(标示为H0、H2、H4和H6)和恢复[(7.3±0.5) mg/L]2、4、6 h (标示为R2、R4和R6)下长吻鮠脑组织低氧应答基因、生理生化指标和食欲基因的变化。结果显示，在低氧胁迫和恢复下，长吻鮠脑组织氧传感蛋白相关基因(HIFs、PHDs和Vhl)表达量整体呈现出先上升后下降趋势；呼吸代谢酶(HK、PK和LDH)活性在H0时显著升高，SDH和MDH活性在H6时显著降低，恢复溶解氧后，代谢模式由无氧呼吸逐渐转变为有氧呼吸；抗氧化酶(GSH-Px、CAT和SOD)和应激指标(MDA和LPO)在低氧2 h后逐渐升高，恢复溶解氧后氧化应激现象仍然存在。观察脑组织形态发现，在低氧胁迫下长吻鮠脑组织出现了神经细胞肿胀、空泡等受损现象，恢复溶解氧6 h后脑组织受损并未得到有效改善。随着低氧时间延长，脑组织细胞凋亡程度不断增加，凋亡相关基因(Bax、Caspase-3和p53)表达量显著升高，而Bcl-2基因表...     

急性非洲猪瘟脑损伤及NF-κB介导脑水肿形成机制研究

【目的】 在试验条件下研究非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）所致急性脑损伤及核因子κB （NF-κB）介导脑水肿发生的相关病理机制。【方法】 18头健康长白猪随机分为2组，攻毒组（13头）和对照组（5头），攻毒组肌内注射剂量为10²HAD₅₀/mL （HAD₅₀：半数红细胞吸附量）的ASFV毒株Pig/HLJ/18，对照组注射等体积生理盐水，试验期为15 d。试验期间观察临床症状，剖检死亡猪并观察脑部病变；利用原位PCR检测进行病毒定位；HE染色及甲苯胺蓝染色观察脑组织病理变化；免疫组化染色法检测脑组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、干扰素-γ（IFN-γ）、NF-κB、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、水通道蛋白4（AQP-4）的表达。【结果】 攻毒组9头猪表现出临床神经症状，脑部剖检病变主要为脑膜充血和不同程度的脑实质水肿；ASFV主要位于脑部微血管中；病变早期主要为脑水肿，脑皮质区结构疏松、血管周围间隙增宽、神经元肿胀变圆、染色变淡，中后期除了表现脑水肿的特征外，还可见脑血管充血、多量微血栓形成及淋巴细胞浸润；免疫组化结果显示，攻毒组TNF-α、IL-1β、IFN-γ、NF-κB及MMP-9主要在神经元及胶质细胞中表达，AQP-4的阳性细胞主要是微血管周围的星形胶质细胞，与对照组相比，攻毒组上述6种因子的阳性表达率均极显著增高（P<0.01）。【结论】 急性非洲猪瘟脑损伤的主要表现为脑膜血管充血出血和脑实质水肿、组织学病变显示病毒性脑炎，ASFV感染脑部，促进炎性因子的异常高表达，通过激活NF-κB信号通路对TNF-α、IL-1β、IFN-γ的转录进行调控，使这几种炎性因子的产生和释放增多，扩大炎症反应，影响血脑屏障的通透性，还能上调MMP-9与AQP-4的表达，破坏血脑屏障，促进脑水肿的发生发展。     

Large-brained birds display lower extra-pair paternity

Extra-pair paternity (EPP) benefits to improve the reproductive success via extra-pair fertilizations without the costs of parental care in males and through improved offspring quality with additional food and parental care in females among species of birds. Variations in the EPP appear to link to behavioral and ecological factors and sexual selection. According to the “relationship intelligence hypothesis”, the cognitive abilities of the birds play an important role in maintaining long-term relationships. Here, we undertook the first comparative test of the relationships between extra-pair paternity and brain size, testis size, and life histories among 315 species of birds using phylogenetically controlled comparative analyses and path analysis. After controlling for the effects of shared ancestry and body mass, the frequency of EPP was negatively correlated with relative brain size, but positively with testis size across species of birds. However, the frequency of EPP was not linked to life-history traits (e.g. incubation period, fledging period, clutch size, egg mass, and longevity). Our findings suggest that large-brained birds associated with enhanced cognitive abilities are more inclined to maintain long-term stable relationships with their mates and to mutualism with them than to increase the frequency of EPP.     

黑斑侧褶蛙脑微血管内皮细胞的原代培养及鉴定

为了建立蛙脑微血管内皮细胞原代培养方法，实验以黑斑侧褶蛙脑组织为实验材料，在无菌条件下分离出大脑灰质，利用0.1%Ⅱ型胶原酶和胶原酶-分散酶进行消化，经过Percoll密度梯度离心后，将获取的脑微血管段接种于鼠尾胶包被的培养瓶中，于28°C、5%CO₂条件下原代培养蛙脑微血管内皮细胞，并通过细胞形态学观察和Ⅷ因子相关抗原免疫荧光对细胞进行鉴定，最后用四唑蓝比色法(MTT)测定细胞的生长状态。结果显示，微血管段在体外培养1 d后开始贴壁生长，并逐渐扩大成团簇状，培养至7 d时，细胞呈“铺石路样”镶嵌式排列，表现为区域性单层生长；Ⅷ因子免疫荧光检测发现胞质呈红色，表达为阳性，阳性细胞率达97%以上；MTT实验显示，细胞在第3～5天时生长速率最快。本研究首次建立了蛙脑微血管内皮细胞的原代培养与鉴定方法，为体外研究蛙类神经性疾病的发病机理奠定基础，也为相关药物的研发和筛选提供了细胞模型。