农杆菌介导海岛棉胚性愈伤高效遗传转化体系的研究

以新海30和新海16的胚性愈伤组织为转化受体,用农杆菌介导法将苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白(Bt)基因导入新海30和新海16.结果表明,在相同的转化条件下,新海30遗传转化效率大于新海16.培养基中无机盐浓度为1/2MS,凝固剂gelrite浓度为2.0 g/L时,能够提高胚状体萌发和成苗率,降低畸形苗频率.通过T1代P...     

农杆菌子房注射法对棉花的活体转化

采用根癌农杆菌直接注射子房,对8个棉花栽培品种进行活体方式的遗传转化.为了确立注射细菌的适宜时期,先采用含考马斯亮蓝染料的菌液对授粉前3d(-3 DPA,days post-anthesis)至授粉后2d(2DPA)的棉花子房进行注射,观察到细菌(染料)可以在-2 DPA至授粉后24h之间进入子房.为了避免注射对花柱的...     

红肉苹果组织培养及转基因体系的建立与优化

于早春取红肉苹果植株上当年生茎段,建立其组织培养体系,并对其组织培养体系进行优化.结果表明:在添加0.2 mg/L IBA+-1.0 mg/L TDZ的MS培养基上红肉苹果叶盘不定芽诱导率最高,再生率为100％,平均每个叶盘再生9.57个不定芽;1 mg/L IBA+I mg/L BAP组合有利于植株扩繁,其扩繁率为8.27;添加0.6mg/L IBA的培养基上的生根率最高,为93.3％.转基因测试结果表明,农杆菌菌株EHA105适于红肉苹果的基因转化;农杆菌浸染后进行3d的共培养有利于转化效率的提高.     

根癌农杆菌介导反义蜡质基因获得水稻植株研究初报

采用根癌农杆菌介导法,将水稻反义蜡质基因导入寒地 4 个水稻品种(系)成熟胚的愈伤组织。这些愈伤组织经连续2 次 25~50 mg/L潮霉素抗性筛选,获得抗性愈伤组织的转化频率为12.15%~25.95%,经分化培养,不同品种的绿苗转化频率分别为 2.49%~4.43%。分化成苗的植株经GUS检测,80%以上的植株叶片呈阳性反应,显示兰色。经 PCR检测,也能扩增出外源基因相应的DNA片断,证明外源基因已整合到转基因植株中。     

茶树愈伤组织诱导与共培转化的初步研究

以福鼎大白无性系茶树大田种子胚为材料，切取子叶、胚芽、胚轴和胚根进行培养，诱导形成愈伤组织。选用较致密的愈伤组织切块与带ＮＰＴⅡ和ＧＵＳ基因Ｔｉ质粒的根癌农杆菌共培养，通过卡那霉素抗性选择，得到了抗性愈伤组织并得到了芽的分化。抗性愈伤组织的诱导率在５％左右。共培过程中发现茶树愈伤组织能较强烈地促进农杆菌生长，表现在农杆菌在茶树愈伤组织周围的聚结。这可能是由于茶树多酚类含量较高，而通常酚基复合物有利于农杆菌对植物细胞的附着和转化。     

利用玉米萌动胚获得抗除草剂转基因新材料

从甲磺隆抗性结缕草植株中克隆得到乙酰乳酸合成酶基因(ALS),构建35S启动子驱动的该基因的植物表达载体p33-ALS.用农杆菌介导的玉米萌动胚转化方法转化玉米种子,获得抗除草剂的转ALS基因玉米材料.结果表明,经除草剂筛选共获得抗性植株7株,阳性率为1.4％,T1代植株除草剂抗性试验表明,转基因植株能够耐受住5％的甲磺隆溶液喷洒.分离得到的ALS基因导入玉米基因组后能够极大地提高对甲磺隆的耐受能力.     

农杆菌介导的花生遗传转化现状与分析

介绍农杆菌介导的花生遗传转化的原理和方法并对影响转化率的因素进行了探讨.     

口蹄疫病毒vp1基因的克隆与植物双元表达载体的构建

通过RT．PCR法获得阿克苏（Akesu／O／58）FMDV结构蛋白基因vp1，将该基因克隆到pGEM．TEasy载体进行核苷酸序列测定。将vp1基因、Kozak序列等插入中间表达质粒pBin438，构建重组中间表达载体pBinVP1。采用三亲融合法构建植物双元表达载体pBinFMDV-vP1。结果表明：vp1基因为639bp。重组中间表达载体pBinVP1经BamHI／Sal I双酶切、PCR扩增和序列测定，表明vp1基因、Kozak序列等插入pBinVP1中。在含50mg／L卡那霉素、25mg／L链霉素和50mg／L利福平的YEB培养基上筛选及对融合农杆菌质粒进行vp1基因的PCR检测，证明植物双元表达载体pBinFMDV-vP1构建正确。     

带有GFP标签的油松苯丙氨酸解氨酶基因表达载体的构建

利用基因重组技术,将油松的苯丙氨酸解氨酶基因（TaPAL）克隆到PBI121植物表达载体中,并且用报告基因GFP替换了GUS,构建了包含绿色荧光蛋白(GFP)基因的植物重组表达载体PBI121-GFP-TaPAL,GFP标签比GUS基因更加易于检测,方便进行TaPAL功能鉴定方面的研究。利用电击法将重组表达载体成功的转化进农杆菌GV3301中。该研究可以为深入研究苯丙氨酸解氨酶的结构及功能及进一步通过导入次生代谢关键酶来提高植物的抗病育种提供基础。     

根癌农杆菌介导水稻成熟胚及抗褐飞虱基因植株的获得

以水稻(Oryza sativa L.)籼型两系恢复系M5274和晚粳稻不育系N55S成熟胚为材料,以携带有双元载体的根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105为载体进行抗飞虱基因Bph14、Bphi008A、Osg1的遗传转化,共获得515棵再生植株,包括198株Bph14转基因植株、72株Bphi008A转基因植株和245株Osg1转基因植株。PCR检测结果表明,获得的515株再生植株中,有244株阳性转基因植株,3个不同抗褐飞虱基因中,转Bph14基因的再生苗阳性率最高,增加筛选次数能有效减少转化所得的假阳性植株。