H7N9 禽流感疫情对东莞家禽经营环节公共卫生安全的影响及思考

从2013 年4 月份东莞市检出H7N9 禽流感病毒感染阳性样品,造成家禽产业巨大经济损失的事件中,引发对东莞家禽经营环节公共卫生安全的思考。对东莞市东城、常平和凤岗三大家禽批发市场和各镇街的农贸市场、超市家禽经营商铺的家禽销售和屠宰情况进行调查,分析当前东莞市家禽经营环节公共卫生安全存在的问题与风险,提出从8个方面加强家禽经营环节动物防疫监督和采取科学的应对措施,以保障公共卫生安全和家禽产业健康持续的发展及社会稳定。     

优质稻品种“甬优9号”示范表现及高产栽培技术

甬优9号在沙县夏茂镇西街村示范种植,表现群体整齐、株型适中、丰产性好、米质优.总结了甬优9号示范表现及配套高产栽培技术.     

籼粳杂交稻甬优9号在永安种植表现与主要栽培技术

甬优9号是浙江省宁波市农业科学研究院作物研究所和宁波市种子公司用甬粳2号A与K6093杂交配组育成的籼粳三系杂交稻品种,在永安种植表现群体整齐、株型适中、穗大粒多、后期转色好、米质优、分蘖中等、易感稻曲病。总结了2010---2012年甬优9号在永安种植表现及主要栽培技术。     

HVJ-E作为禽流感H9亚型灭活苗免疫佐剂的展望

近年来,禽流感已经成为各国动物疾病防控的重中之重,其中H9N2亚型虽然是一类低致病性禽流感病毒,但其感染范围广,发病迅速,可造成重大损失。现阶段,使用灭活苗是预防H9亚型禽流感的主要方法,虽然该类疫苗可以使免疫鸡在临床上不表现发病症状,但并不能阻止其感染后的排毒和对肌肉品质造成一定的影响。研究发现,HVJ-E具有双重免疫调节作用,有希望作为H9亚型灭活苗免疫佐剂应用于临床。     

Two cases of acute polyradiculoneuritis in dogs consuming a raw poultry diet

A 9-year-old female mixed-breed dog presented with ascending flaccid tetraparesis, and a 5-year-old castrated male Poodle dog presented with ventroflexion of neck, dysphonia, and hindlimb weakness, which progressed to acute ascending tetraparesis. Both dogs were fed raw poultry for over 9 and 5 years, respectively. Blood examination and other test results were normal or unrelated to the present case. Fecal polymerase chain reaction analysis in the Poodle dog was positive for Clostridium perfringens and Campylobacter jejuni. Tetraparesis improved with supportive care in both dogs. Human IV immunoglobulin was only administered to the Poodle dog, which showed a shorter recovery (12 days compared to 34 days in the mixed-breed dog). Both dogs returned to normal conditions eventually.     

应用CRISPR/Cas9体系对番茄PSY 1基因的定点编辑

基于NCBI数据库提供的番茄八氢番茄红素合成酶基因(PSY 1)全长,并根据基因序列中PAM(proto adjacent motif)的位置设计特异性sg RNA,构建CRISPR/Cas9 Level 1、Level 2载体;将设计好的载体转化农杆菌,继而转染番茄子叶,利用PCR产物测序法检测sg RNA在番茄基因组中的敲除效率。结果表明,36个转基因植株中有22个PSY 1基因目标区出现不同数目的碱基缺失、增加或互换,初步估计基因敲除效率为61%。本试验在番茄中初步建立了CRISPR/Cas9介导的基因敲除技术,该技术能够稳定的在番茄中实现基因敲除。     

H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Shandong/LY1/2017株反向遗传操作系统的建立

为了构建H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Shandong/LY1/2017的反向遗传操作平台,通过RT-PCR技术分别扩增该毒株的8个基因片段,并分别克隆至双向转录表达载体PHW2000中.8个质粒共转染293T/MDCK混合细胞,96 h后将细胞板反复冻融3次收获细胞悬液,将其接种10日龄SPF鸡胚,96 h后收集尿囊液并将拯救毒株命名为rH9N2,测定其HA效价为1:256.rH9N2在HA、MDT、EID50、TCID50以及病毒生长曲线、空斑等方面保持了与亲本毒株一致的生物学特性.本研究成功构建了A/Chicken/Shandong/LY1/2017的感染性克隆,为今后通过基因替换、定点突变技术研究H9N2亚型禽流感病毒致病性的分子机制奠定了基础.     

非洲猪瘟病毒MGF 360-9L基因序列分析、蛋白结构预测及亚细胞定位

前期研究结果表明，非洲猪瘟病毒（ASFV） MGF 360-9L能显著抑制宿主天然免疫应答，故通过比较、分析ASFV中MGF 360基因序列，进一步研究MGF 360-9L基因结构和功能间的关系。本研究采用生物信息学方法，分析该基因的一级结构并预测该基因的表达蛋白二、三级结构；根据GenBank公布的Georgia 2007/1（FR682468.1）序列，合成MGF 360-9L基因并构建其重组真核表达质粒，Western blot验证该基因表达后，将重组质粒转染至PK-15细胞，经染色后观察其蛋白的亚细胞定位。结果表明，以Ⅱ型Georgia 2007/1基因组中MGF 360-9L基因为参照，其在Ⅱ型ASFV毒株中高度保守，在54株不同基因型毒株间的相似性与ASFV系统进化关系一致，保守序列为3'末端378 bp片段，高级结构以α螺旋为主，核定位序列预测其定位于细胞核内；构建真核表达质粒，成功表达目的蛋白且定位于细胞核内。本研究结果为进一步研究MGF 360-9L基因抑制免疫应答和明确MGF 360基因家族在ASFV的致病机制积累了资料。     

大豆生物钟基因GmLNK1/2、GmRVE4/8和GmTOC1 CRISPR/Cas9组织表达分析及敲除靶点的鉴定

生物钟基因能够参与调控植物的整个生命进程,对提高作物产量具有重要的作用。LNK1(NIGHTLIGHTINDUCIBLE AND CLOCK-REGULATED 1)、LNK2、RVE4 (REVEILLE 4)、RVE8 (REVEILLE 8)和TOC1 (TIMING OF CAB EXPRESSION1)是植物中重要的生物钟基因。本研究利用BLAST同源比对和进化树分析的方法分别鉴定AtLNK1、AtLNK2、AtRVE4、AtRVE8和AtTOC1在大豆中的同源基因,通过qRT-PCR实验证明这些生物钟基因在大豆根、茎、叶等组织中均有表达。成功构建这些基因的CRISPR/Cas9敲除载体,并利用大豆根毛转化体系成功鉴定出13个基因的CRISPR/CAS9有效靶点。为进一步获得稳定的大豆突变体材料及研究其生物钟基因的功能提供了理论基础。     

H9N2亚型禽流感病毒反向遗传操作平台的建立

H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在自然界中广泛存在和传播,给养禽业造成了巨大损失。为了进一步揭示该病毒的致病机制,本研究采用RT-PCR技术扩增禽流感病毒A/Chicken/Shanghai/1/2006(简称SH1)的PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M、NS 8个基因片段,并分别克隆至PLLB双向表达载体上。采用8质粒系统共转染293T细胞,转染48 h后加入TPCK胰酶作用2 h,将上清液和细胞一同接种9~11日龄SPF鸡胚,并检测其血凝效价。经序列比对,拯救获得的病毒rSH1的8个基因片段序列均与亲本病毒SH1的序列相同。实验结果表明,本研究成功建立了H9N2亚型禽流感病毒反向遗传操作系统,为该病毒的致病机理和传播机制研究等奠定了技术平台。