益母草转化酪醇合成红景天苷的研究

红景天苷是红景天属植物中一种重要的次生代谢产物,因其具有多种生理功能而广受人们的青睐。目前,红景天苷需求量不断增长,传统的天然提取和化学合成已难满足市场需求,因而亟待新方法解决这一困境。前期研究发现,益母草具有转化酪醇合成红景天苷的能力,故本研究对益母草水培和悬浮细胞培养转化酪醇生成红景天苷的条件进行探讨。结果显示,以喷洒0.5%(36.2 mmol·L^-1)酪醇溶液为主,再辅之以低浓度(<2 mmol·L^-1)的酪醇水培液,可较好地促进益母草转化酪醇生成红景天苷。另外,对于益母草悬浮细胞系,3 mmol·L^-1的酪醇浓度是最佳的培养浓度,对其转化48 h后可达红景天苷最高转化率(63%),而且相较水培方式,益母草悬浮细胞在转化时间和空间上都有较好的优势。综上所述,益母草转化酪醇合成红景天苷的研究,不仅进一步证明益母草具有转化酪醇生成红景天苷的能力,而且还为红景天苷的生物转化,以及益母草相关医药保健产品的开发奠定了基础。     

古松柏叶肉细胞超微结构的研究

笔者对油松、侧柏、白皮松3种古树的叶肉细胞的超微结构进行了观察,重点研究了叶绿体结构的变化特点。此外,对造成松柏类古树衰老的原因进行了探讨。     

杜仲含胶细胞的整体观察

利用变性处理和整体透明相结合的方法对杜仲各组织中含胶细胞的形态和分布,以及不同生长条件下含胶细胞的分布密度进行了研究。结果表明,杜仲含胶细胞是一种细长的、两端略膨大的、丝状分泌单细胞,在植株体内的分布与维管系统密切相关。在当年生杜仲幼茎中主要分布于初生韧皮部并靠近形成层的部位。光照有利于杜仲胶合成。西北林学院学报21卷第3期申延等杜仲含胶细胞的整体观察     

甘蓝纤维素合成酶基因BoCesA的克隆与序列分析

为研究甘蓝纤维素合成酶BoCesA基因在干旱胁迫下的表达模式,通过同源克隆得到甘蓝纤维素合成酶基因的cDNA全长,利用生物信息学软件分析该基因的特征;构建含BoCesA和GFP的融合表达载体,通过基因枪转化洋葱表皮细胞试验对该基因进行亚细胞定位;利用荧光定量PCR分析基因在不同组织中的表达情况及干旱胁迫下的表达模式。甘蓝纤维素合成酶BoCesA基因的cDNA全长为2 721bp,编码906个氨基酸,在N端含有锌指结构域和2个跨膜区,C端含有6个跨膜区,除包含植物纤维素合成酶基因共有的保守区外,还包含2个高突变区。通过氨基酸序列比对分析,发现甘蓝的该基因与拟南芥的AtCesA3基因同源性较高。亚细胞定位表明BoCesA基因初步定位于细胞质膜上。荧光定量PCR分析表明该基因在叶中的表达量高于茎和根中的表达量,在NaCl、PEG处理下BoCesA表达量呈现先升高后下降的趋势。通过对甘蓝纤维素合成酶BoCesA基因在NaCl、PEG胁迫下的表达分析,预测该基因对干旱胁迫有响应,它的表达受干旱胁迫的影响,这为进一步研究基因功能奠定了基础。     

MlNAC2基因的克隆及其在南荻根部的表达模式

克隆南荻MINAC2基因的c DNA序列,该序列全长为933 bp,编码产物含310个氨基酸残基,其蛋白质理论相对分子质量为34 427.8,等电点(p I)为5.85,不稳定系数为34.84,为稳定蛋白,具有保守的NAM基序,无信号肽和跨膜结构域,可推测其为亲水性蛋白。亚细胞定位试验结果表明,Ml NAC2定位于细胞核,可能在细胞核内行使功能。转录激活试验结果表明,Ml NAC2是一个转录因子蛋白,且转录激活域位于C端。荧光实时定量PCR分析结果表明,高盐、干旱、脱落酸、茉莉酸甲酯和机械伤害均能诱导Ml NAC2基因在南荻根部的表达上调,而低温处理时表达下调。     

棉花GbRvd的亚细胞定位及其超表达烟草抗病性分析

【目的】研究棉花NB-LRR家族基因GbRvd的亚细胞定位及超表达烟草的黄萎病抗性,为解析GbRvd介导的植物抗黄萎病机制提供依据。【方法】对真核表达载体pJCV52进行改造,在SpeⅠ酶切位点插入gfp,使其兼具亚细胞定位的功能,命名为GPJCV52。应用Gateway技术构建GbRvd的亚细胞定位和超表达载体,并分别转化农杆菌GV3101。利用生物信息学和农杆菌介导的烟草瞬时表达技术对GbRvd分别进行亚细胞定位预测与观察。采用农杆菌介导法转化烟草,并通过组织培养技术获得转基因植株。运用PCR对超表达GbRvd的烟草进行阳性植株筛选,且利用半定量RT-PCR对阳性转基因植株进行表达检测。制备棉花黄萎病菌孢子悬浮液,通过灌根法对T_3代转基因烟草株系进行接种,利用5级标准统计发病情况并计算病情指数。【结果】利用在线分析软件ProtComp预测GbRvd为一种胞外(分泌)蛋白;GbRvd的跨膜预测结果显示其包含3个跨膜域;在线分析软件Wo LF PSORT预测结果显示GbRvd在细胞膜、内质网及叶绿体的预测分值分别为7、3和1,表明GbRvd主要存在于植物细胞膜上。利用农杆菌介导的烟草瞬时表达技术进一步对GbRvd的亚细胞定位进行观察,结果显示在单独表达GFP蛋白的烟草细胞中,荧光信号在细胞核、细胞质和细胞膜均有分布;而GbRvd与GFP融合表达后的荧光信号主要分布于烟草表皮细胞质和细胞膜。综合生物信息学分析和亚细胞定位观察结果,表明细胞膜和细胞质是GbRvd的主要分布位置。利用农杆菌介导和组织培养获得了转基因烟草植株,通过对转基因烟草植株的PCR检测显示,阳性转基因烟草植株能够通过PCR扩增出与预期大小一致的目的条带,而野生型植株未出现相应条带;阳性转基因烟草植株半定量RT-PCR同样能够检测出与预期大小一致的目的条带,由此表明GbRvd成功整合于烟草基因组并能够进行正常转录。对3个T_3代超表达烟草株系的黄萎病抗性进行分析,结果显示超表达GbRvd的烟草植株病情指数显著低于野生型对照植株,表明过表达GbRvd可有效提高植株对黄萎病的抗性。【结论】GbRvd主要存在于植物细胞质和细胞膜,其超表达可显著提高烟草对黄萎病的抗性。     

宁夏地区大籽蒿精油成分分析及其抑菌性研究

为探究宁夏大籽蒿(Artemisia sieversiana Ehrhart ex Willd.)精油成分、抑菌功能及安全性,采用水蒸气蒸馏法进行精油提取,通过气相色谱-质谱连用法(GC-MS)进行成分分析,采用滤纸片法测定其对3种菌的抑菌圈直径,测定最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC),并通过cck-8法检测大籽蒿精油对于2种皮肤细胞的毒性作用。结果表明,宁夏大籽蒿精油的主要成分为母菊薁(29.61%),樟脑(4.80%)、桉叶油醇(4.32%)、异木香酸甲酯(4.02%);精油对铜绿假单胞菌和大肠杆菌的最低抑菌浓度为0.0781 μg/mL,最低杀菌浓度为0.3125 μg/mL;金黄色葡萄球菌MIC为0.0195 μg/mL,MBC为0.078125 μg/mL;当精油浓度小于100 μg/mL时对角质细胞(HaCaT)和皮肤成纤维细胞(NHSF)均无毒性。综上,宁夏地区大籽蒿精油具有较强的抑菌活性且安全性较高,以上结果为宁夏大籽蒿精油开发提供理论依据,以期为当地脱贫致富提供科技支撑。     

固定化酵母发酵生产酒精的研究——Ⅰ.小试试验

在实验室以糖蜜、红薯干为原料,进行了固定化酵母发酵生产酒精的研究.结果表明:(1)固定化酵母较自由细胞有较宽的pH 适应范围,因而可将发酵pH 调得偏酸些.(2)固定化酵母较自由细胞有较强的耐热性.温度偶然升到45℃,15min 内不会损害酵母活性.(3)固定化酵母颗粒连续使用3个月活力不减.(4)以糖蜜为原料其平均转化率达91.0%,残糖值为1.24;以红薯为原料,其转化率为94.8%。残糖值为0.48.     

非木材纤维纸浆中杂细胞沼气发酵条件研究

采用L9(34 )正交试验法 ,对影响杂细胞沼气发酵的基质浓度、发酵温度、添加剂三因素进行了初步研究。结果表明 ,基质浓度对发酵效果影响最大 ,其次是添加剂。发酵温度对发酵周期影响最大。以产气量和TS去除率为指标 ,结合生产实际情况 ,优选出最佳发酵条件是 :基质浓度 6 % ,中温 (35℃ )发酵 ,以碳铵为添加剂。     

温州蜜柑花芽分化期枝内细胞分裂素类型和脱落酸含量及其变化

 叙述了用高效液相色谱法分离、测定核糖基玉米素（ZR）、玉米素（Z）、二氢玉米素[（DiH）Z]和脱落酸（ABA）的方法，并从温州蜜柑枝内检测出了ZR和Z，但未发现有（DiH）Z存在。其中ZR的含量为Z的23-93倍。说明ZR是温州蜜柑枝内细胞分裂素（CTK）的主要成分。在花芽分化期Z和ZR的变化基本一致：在诱导期含量较低，而在花原基将出现时迅速上升，达到高峰。我们认为这时ZR和Z的急剧增加可促进花原基的形成。ABA在诱导期含量也较低，而在形态分期保持相对较高水平。本文对ABA与花芽分化的关系作了讨论。