感染茶假眼小绿叶蝉的金龟子绿僵菌菌株筛选

采用喷雾法测定8株金龟子绿僵菌菌株对假眼小绿叶蝉的致病力。结果表明:以浓度(1±0.5)×107孢子·mL-1的绿僵菌孢子悬液接种12 d后,各菌株对假眼小绿叶蝉均有一定的致病力,校正死亡率和僵虫率分别为(43.08±0.76)%-(76.92±1.72)%和(40.67±1.25)%-(76.67±1.55)%,LT50为6.76-11.48 d。其中,Ma1775菌株对假眼小绿叶蝉致病力最强,校正死亡率和僵虫率分别为(76.92±1.72)%和(76.67±1.55)%,LT50为6.76 d,6 d的LC50为4.156 3×107孢子·mL-1。通过时间—剂量—死亡率模型参数估算,Ma1775菌株对该虫致死效应较强的时间段为3-5 d,该菌株在假眼小绿叶蝉的生物防治中有很大的应用潜力。     

杨梅叶片矿质营养及对土壤重金属的富集效应

以8年生的杨梅叶片为试材,采用微波消解法处理样品,电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)测定杨梅叶片矿质营养及土壤元素含量,探讨杨梅适宜营养指标,为杨梅合理施肥提供科学依据。结果表明, N、 Ca和K元素是杨梅叶片中的主要营养元素,含量均高于7.048 g·kg-1;杨梅叶片中B的含量(35.82 mg·kg-1)显著高于土壤中B的含量(18.4 mg·kg-1),为满足杨梅对B的需求,栽培过程中需补充B肥;杨梅叶片中含有丰富的Fe、 Mn和Zn等微量元素, B含量与Fe含量呈显著正相关, Mn含量与Fe、 Zn含量均呈负相关。杨梅对土壤中Zn、 Cu、 Cr和Ni等重金属元素有一定的富集效应。     

西藏“一江两河”流域越冬黑颈鹤种群数量及分布1）

对西藏“一江两河”流域越冬黑颈鹤（ Grus nigricollis）种群数量及分布情况进行了调查,并分析了黑颈鹤昼间活动生境和人为干扰情况。结果表明：2010年12月—2011年1月、2012年12月—2013年1月、2015年1月在“一江两河”流域越冬的黑颈鹤数量分别为6041、59496、496只。拉孜到南木林之间雅鲁藏布江中上游河谷和墨竹工卡到林周之间的拉萨河－澎波河谷一区是越冬黑颈鹤最为集中的2个区域;黑颈鹤昼间活动的主要生境是农田和水体,在这2种生境活动的黑颈鹤集群分别占集群总数（ n＝125）的80．8％和17．6％;12．0％的越冬黑颈鹤集群受到人为干扰的影响,其中69．2％的干扰来自开发建设。     

阿维链霉菌BAC文库的构建及分析

为进一步阐明阿维菌素的生物合成路径和调控途径,提高阿维菌素的产量,采用BamHⅠ限制性内切酶酶解阿维链霉菌基因组DNA的方法,构建了阿维链霉菌的细菌人工染色体(BAC)文库。该文库共包含2 304个克隆,平均插入片段为101kb,空载率约9%,覆盖了该菌基因组的25.9倍。该文库的成功构建可以为其他微生物尤其是基因组具有磷硫酰化修饰的微生物的文库构建提供参考。     

新型穿膜肽介导 p53融合蛋白的表达及其免疫原性分析

目的：原核表达新型细胞穿膜肽RDP介导p53融合蛋白,并检测其免疫原性的强弱．方法：以质粒pET28a‐p53为模板扩增p53基因,并克隆至原核表达载体pET28a‐RDP中,构建重组表达质粒pET28a‐RDP‐p53,转化至大肠杆菌Rosetta ,IPTG诱导表达蛋白并纯化,SDS‐PAGE确定该蛋白准确性．同时,将昆明小鼠分为空白对照组（等容生理盐水）和RDP‐p53融合蛋白高、中、低剂量（4 mg／kg ,2 mg／kg ,1 mg／kg）组,经腹腔注射免疫,每隔2 d给药1次,30 d后眼球取血,用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清中IgG的含量．结果：双酶切及测序结果显示, p53基因已克隆入表达载体中;RDP‐p53融合蛋白在上清和沉淀中均获得表达．ELISA测定结果表明,与对照组比较,低、中剂量组小鼠血清中IgG含量没有明显升高（p＞0.05）,高剂量组显著升高（p＜0.05）．结论：成功表达并纯化RD P‐p53融合蛋白,其免疫原性较弱且与给药剂量相关,为进一步研究RD P‐p53融合蛋白对脑肿瘤的药理作用奠定基础．     

用于RNA干扰研究的大肠杆菌表达系统的条件优化

选取在E.coli中对于dsRNA表达比较重要的3个因素,即诱导时间、诱导温度和诱导剂IPTG浓度。利用已经构建好的大肠杆菌E.coli HT115(DE3),并结合正交试验设计研究dsRNA在HT115(DE3)内的最优表达条件。结果表明,工程菌在诱导时间8 h、诱导温度30℃、诱导剂浓度10.0 mmol/L的培养条件下所得到的dsRNA表达量最大。     

黄花蒿精油对绿豆象成虫体内酶活力的影响

本试验测定了黄花蒿精油对绿豆象成虫体内几种酶活力的影响。试验结果表明:黄花蒿精油对绿豆象成虫体内多种酶均有影响。黄花蒿精油对绿豆象成虫体内乙酰胆碱酯酶活力表现出明显的抑制作用,对谷胱甘肽-S-转移酶表现出明显的诱导作用,对绿豆象成虫体内羧酸酯酶、酸性磷酸酯酶、碱性磷酸酯酶表现出一定的抑制作用。黄花蒿精油进入成虫体内后,同时作用于多靶标,提高了黄花蒿精油对绿豆象成虫的毒杀效果,也将有效延缓害虫产生抗药性。     

饥饿和再投喂对日本黄姑鱼代谢率和消化器官组织学的影响

采用封闭式呼吸仪测定日本黄姑鱼(8.14±1.07 g)在饥饿和恢复投喂过程中的耗氧率;用石蜡切片法观察和分析饥饿和再投喂对日本黄姑鱼消化器官形态结构和组织学的影响。结果表明:随着饥饿时间的延长,其耗氧率逐渐降低;恢复投喂之后,其耗氧率开始逐步上升。从组织结构看,食道无明显变化,而胃、肠和肝胰脏则随着饥饿时间的延长出现不同程度的损伤;饥饿5 d组无明显变化,而饥饿15 d组变化明显,表现为胃腺细胞收缩,皱壁和上皮细胞高度减少,分泌颗粒减少,肠胃绒毛退化,肝组织致密,肝细胞内脂滴减少,胰腺泡缩小,排列不规则;饥饿10 d组介于饥饿5 d组和饥饿15 d组之间,再投喂各主要结构均有恢复。     

三疣梭子蟹FAMeT基因克隆及其在蜕皮周期中的表达水平

法尼酸甲基转移酶(farnesoic acid O-methyl transferase, FAMeT)是甲基法尼酯(methyl farnesoate, MF)生物合成途径中最后一步的关键酶,MF是一种类似昆虫保幼激素(juvenile hormone, JH)的倍半萜,在甲壳动物的生长发育及繁殖过程中起到了重要作用。本文克隆得到了三疣梭子蟹FAMeT的全长cDNA序列（GenBank登录号：KC192659）,它包括一个201bp 的5非编码区、一个318bp的 3非编码区,和一个825bp的开放阅读框（ORF）,编码274个氨基酸;推导的氨基酸序列与已公布的其他甲壳动物FAMeT进行比对,发现一致性达75%-97%,其中与远海梭子蟹FAMeT的一致性最高;而且该氨基酸序列由两个CF（CPAMD8/FAMeT）区域组成,这两个CF区域是FAMeT的标志,在所有甲壳动物的FAMeT里均有发现,因此推导的氨基酸序列是三疣梭子蟹FAMeT基因。我们运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)的方法分析了其在不同组织中、不同蜕皮周期中的表达量变化,发现FAMeT在三疣梭子蟹的各个组织里均有表达且在胸神经节(Taoracic ganglia)里表达最强;在三疣梭子蟹蜕皮过程中,大颚器FAMeT在D1期表达最强,然后逐渐下降至D4最低。该结果表明FAMeT在三疣梭子蟹蜕皮调控中起着重要的作用。     

星斑川鲽MHCⅡ恒定链Ii基因的克隆和表达特性

为了研究星斑川鲽MHCⅡ类分子的作用及调控机制,实验通过SMART-RACE技术克隆得到了星斑川鲽MHCⅡ恒定链(MHCⅡIi)的全长cDNA序列,其长度为1766 bp,包含135 bp的5′非编码区、837 bp的开放阅读框和794 bp的3′非编码区。该基因共编码279个氨基酸。理论分子量为30.848 ku,等电点为6.89。与已知物种MHCⅡIi进行同源性比对,结果与狼鲈、紫红笛鲷和鳜关系较近,同源性均为79%。利用quantitative realtime PCR(qRT-PCR)技术检测了MHCⅡIi在星斑川鲽不同组织中的表达,以及爱德华氏菌感染前后对该基因在不同组织中表达水平的影响,结果显示:在脾脏、头肾、肝脏、后肠、性腺、心脏、血液、鳃和肌肉组织中,MHCⅡIi mRNA均有表达,但在表达量上有明显差异,脾脏和头肾组织相对表达水平较高,鳃、血液、肌肉、心脏和性腺中的表达水平较低。病原感染后,免疫相关组织脾脏和头肾的表达水平升高最明显,肝脏和后肠的表达水平也略有升高,但变化不明显。本研究可为星斑川鲽MHCⅡ类分子的作用机理提供理论依据,同时为海水养殖鱼类的抗病遗传育种工作提供研究基础。