玉米黑粉菌菌瘤内内生细菌对黑粉菌的冬孢子萌发的影响

利用高通量测序分析明确玉米黑粉菌菌瘤内菌粉培养液中内生细菌种类,结合16SrDNA分析,分离并鉴定在培养液中占比最高的菌株。以溶菌酶及Amp处理玉米黑粉菌冬孢子为对照,显微镜下观察菌瘤内内生细菌对玉米黑粉菌冬孢子萌发的影响。结果表明,在4份样品的菌粉培养液中,肠杆菌属细菌的占比在90%以上。当肠杆菌大量增殖时对黑粉菌的冬孢子萌发产生影响,可引起黑粉菌的冬孢子发生质壁分离,释放原生质体,部分原生质体再生成菌体;也可以使冬孢子壁直接被降解,原生质体萎缩。研究发现,玉米黑粉菌菌瘤内的内生细菌以肠杆菌为主,该内生细菌对黑粉菌的冬孢子萌发产生影响。     

The mechanism of resistance to sterol 14α demethylation inhibitors in a mutant (Erg 40) of Ustilago maydis

Resistance to DMI fungicides is a problem in both agriculture and medicine. Several mechanisms of resistance exist, but, as yet, few have been characterised in field resistant strains of plant pathogens. One approach to evaluating the role of mutations in the sterol 14α demethylase (14DM) target site requires cloning this gene and confirming its identity by complementation in an appropriate mutant. The azole‐resistant mutant, Erg 40, of Ustilago maydis which is totally blocked at the 14α demethylation step in sterol biosynthesis seems to be suitable for such expression studies. Transformation of Erg 40 with a plasmid containing the yeast 14α demethylase (CYP51A1) gene removed the block in sterol biosynthesis and generated azole‐sensitive transformants. Detailed analysis of these transformants failed to detect the presence of the yeast gene and suggested, instead, that changes in sterol biosynthesis resulted simply from the transformation protocol and not from the incorporation of extracellular DNA. Subsequent sequence analysis has revealed a mutation in the 14α demethylase gene of Erg 40. The results suggest that azole resistance in Erg 40 is not simply controlled by this mutation but involves some additional regulatory function, and consequently Erg 40 is not suitable for complementation studies with CYP51A1 genes. © 2000 Society of Chemical Industry     

玉米瘤黑粉病抗病性研究

调查研究了沈阳地区田间玉米瘤黑粉病2004年自然发病情况,结果表明:供试的10个玉米品种的产量损失率为1%~10%,都是玉米瘤黑粉病的抗病品种;其中辽单37和辽单120是抗病品种,产量损失较大;新铁单10、沈农1号、丹玉90、铁单17和沈单12是中抗品种;铁单16、掖单2和沈单14是高抗品种,产量损失较小。玉米育种时,应当先从铁单16、掖单2和沈单14等抗病品种中选取,缩短育种周期,加快玉米品种的选育。     

青稞散黑穗病拮抗菌LN-176的分离鉴定、发酵条件及发酵产物的研究

从西藏佩古错湖湖边的土壤中分离到一株对青稞散黑穗病菌具有较强抑制作用的细菌,经鉴定为多粘芽孢杆菌,命名为LN-176。该菌株对多种植物病原真菌、部分革兰氏阳性细菌及革兰氏阴性细菌有较好的拮抗作用。以10%的接种量将该菌接种到初始pH7.0的发酵培养基中,28℃旋转培养,发酵液在84h时抗菌活性达到最高,且具有较好的热稳定性和pH稳定性,对蛋白酶K有一定的耐受性。LN-176菌株的发酵液在260nm和280nm下进行吸光度测定,结果表明发酵液中蛋白质含量明显升高;发酵液经硫酸铵盐析后,取上清液和沉淀物分别做抗菌试验,发现沉淀物对青稞散黑穗病菌有拮抗活性而上清液无活性。     

谷子黑穗病田间接菌方式试验

谷子黑穗病是山西省谷子的一个主要病害,近年来有加重的迹象。试验通过对谷子黑穗病设立不同的接菌方式和接菌的定量指标,分析接菌效果,以便准确地鉴定谷子黑穗病的发病情况,更好地研究谷子黑穗病,具有较强的实际指导意义。     

青稞黑穗病菌LAMP检测体系的建立

【目的】大麦坚黑粉菌(Ustilago hordei)和裸黑粉菌(Ustilago nuda)是引起青藏高原青稞黑穗病的主要病原菌,建立快速、简便、特异性强的大麦坚黑粉菌和裸黑粉菌环介导等温扩增技术(LAMP)检测体系,检测青稞种子的带菌量,再依据带菌程度进行播前种子处理,是控制青稞黑穗病的重要技术手段。【方法】根据大麦坚黑粉菌(Ustilago hordei)和裸黑粉菌(Ustilago nuda)的ITS基因序列与其他对照菌株同源性低的区段设计并获得有效引物1组,建立LAMP检测体系,并选取影响LAMP反应体系的5个主要因素dNTPs、甜菜碱、镁离子、Bst DNA聚合酶及温度进行单因素试验对其进行优化,最后对优化后的LAMP检测体系进行灵敏度和特异性检测。【结果】建立了青稞黑穗病菌的LAMP检测体系,其优化后dNTPs浓度为1.8 mmol/L、甜菜碱浓度为0.8 mmol/L、镁离子浓度为10 mmol/L、Bst DNA聚合酶浓度为320 U/mL,反应温度为65℃。应用该体系在45 min内能检测出2×10~(-4)ng/μL的裸黑粉菌,在60 min内能检测出2×10~(-4) ng/μL的大麦坚黑粉菌,即在60 min内可检测出2×10~(-4)ng/μL的大麦坚黑粉菌和裸黑粉菌。建立的青稞黑穗病菌LAMP检测体系对大麦坚黑粉菌和祼黑粉菌具有特异性。【结论】建立了青稞黑穗病菌的LAMP检测体系,该体系能在1 h内检测出2×10~(-4)ng/μL的裸黑粉菌和大麦坚黑粉菌。     

甘蔗黑穗病及其病原菌研究进展

甘蔗鞭黑粉菌（Sporisorium scitaminea）引起的甘蔗黑穗病是一种世界性重要甘蔗病害,也是中国蔗区危害最严重的甘蔗病害,使甘蔗产量及品质均受到严重损失。综述甘蔗黑穗病病原特征、分类归属、生理分化、遗传多样性、快速检测,以及甘蔗黑穗病的发生危害及防治措施,并探讨进一步研究对策。     

基于PCR和巢式PCR技术的甘蔗黑穗病早期检测

为了探索甘蔗黑穗病早期检测的可能性,应用本实验室已建立的甘蔗黑穗病菌PCR和巢式PCR检测技术,对经人工接种甘蔗黑穗病菌冬孢子的植蔗叶片进行检测,并调查采样植株的黑穗病实际发生情况。结果表明,黑穗病实际发生率80％（16/20）,PCR检测阳性率35％（7/20）,巢式PCR检测阳性率70％（14/20）,PCR和巢式PCR检测为阳性的样品,其植株黑穗病发生率几乎为100％。这一结果表明了甘蔗黑穗病菌PCR和巢式PCR可用于甘蔗黑穗病早期检测,但巢式PCR检测结果与黑穗病的实际发生情况比较吻合,更适合于甘     

茭白黑粉菌耐热突变体的辐射诱变选育与生长特征研究

来自茭白正常膨大肉质茎的黑粉菌（M—T菌株）经5kGy和10kGy 60Co-γ射线辐照后,筛选获得耐40℃的耐热突变体（H—T菌株）各10个菌株,而来自灰茭的黑粉菌（T菌株）未观察到耐热突变体。对3种菌株在不同温度下的生长特性作了初步分析。研究结果表明,M—T和T菌株均不能在32℃及以上温度生长;15～28℃范围内,H—T菌株的生长速率显著快于T菌株,后者又显著快于M—T菌株;相对于最适温度下的延滞期,显著延长延滞期的临界温度分别为15℃（M-T菌株）、20℃（T菌株）和20℃（H-T菌株）。因此,H-T菌株与M-T菌株的生长特性存在较大差异。     

玉米黑粉菌基因组编码蛋白作用位点的计算机预测

利用已公布的玉米黑粉病菌基因组全序列数据及信号肽预测软件SignalP v3．0、亚细胞器中蛋白定位分布预测软件TargetP v1．01、跨膜螺旋结构预测软件TMHMM v2．0和膜锚定位点预测软件Big-PI Predictor预测分析了玉米黑粉病菌基因组编码蛋白的作用位点。结果表明,在6522个ORF中,具有分泌功能的有543个,占全基因组基因总数的8．3％;作用位点在线粒体的有1552个,占全基因组基因总数的23．4％;具有跨膜结构的有1269个,占全基因组基因总数的19．5％;锚定在膜上的有56个,占全基因组基因总数的0．9％。