不同猪种TGF-β1基因单核苷酸多态性分析

以二花脸猪、大白猪、长白猪、皮特兰猪和圣特西猪共计861 头为研究材料,采用PCR-SSCP技术,对猪TGF β1基因6 7外显子区的1156 bp序列进行多态性分析,发现一个多态位点。经克隆测序分析,位于第6内含子区内存在C→T突变,该突变位点为第7外显子上游的第9位碱基(序列:AJ621785中的第1043位点)。对不同猪群的基因型和基因频率统计结果表明,二花脸猪以等位基因T为主,而大白猪、长白猪、皮特兰猪和圣特西猪则以等位基因C为主,且各猪群均处于Hardy Weinberg平衡。     

半滑舌鳎转化生长因子TGF-β1和TGF-β3基因的克隆及受哈维氏弧菌感染后表达分析

转化生长因子β (transforming growth factor β,TGF-β)是一类具有多种功能的蛋白超家族,在细胞免疫、细胞增殖分化和组织损伤的修复中起着关键性作用.本研究从半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)肝脏中克隆获得了TGF-β1和TGF-β3基因.推导的TGF-β1和TGF-β3氨基酸序列均含有多个N糖基化位点和一个TGF-β家族标签.系统进化树分析显示,半滑舌鳎TG F-β1和TGF-β3分别与鱼类的TGF-β1和TGF-β3亲缘关系最为密切.qRT-PCR结果表明,半滑舌鳎TGF-β1和TGF-β3基因在健康鱼的多个组织中均有表达,二者在皮肤中表达量最高,在肌肉中表达量最低.经哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)感染后,TGF-β1在肝脏、脾脏和肾脏中呈现先上升后下降的表达趋势,在感染48 h后的肝脏中表达量达到最大值,是对照组的3.17倍;TGF-β3在脾脏、肾脏和鳃中也呈现先上升后下降的表达趋势,在感染24 h后的鳃中表达量达到最大值,是对照组的4.71倍.以上结果提示,TG F-β1和TGF-β3可能在半滑舌鳎抵御细菌感染的免疫中发挥了重要作用,本研究为证明二者参与机体免疫调节提供了有力证据,为半滑舌鳎分子免疫研究提供了理论依据.     

Smad7N端结构域的生物信息学及生物化学特性

Smad 7蛋白是一种对TGF-β信号通路产生负调节作用的重要蛋白.对Smad 7的氨基酸序列进行生物信息学分析,根据分析结果构建一系列删除不同氨基酸片段的重组蛋白,最后对这些蛋白进行生物化学特性分析.结果显示:Smad 7 N端前20个左右的氨基酸影响蛋白质的可溶性,它的删除还会造成蛋白质聚集,因此推测这些氨基酸残基...     

East Java Propolis Inhibits Cytokine Pro-inflammatory in Odontoblast-Like Cells Human Pulp

Inflammation in pulp tissue is caused by caries bacteria. Most bacteria found are Lactobacillus acidophilus. Propolis is a sticky resin material that is derived from the bees and the surrounding plants, which are reported to have several biological effects including anti-bacterial and anti-inflammatory. This study will prove the effectiveness of propolis against proinflammatory cytokines on odontoblast-like cells in human dental pulp. This study was performed on cultured odontoblast-like cells in pulp. Cell culture was derived from the pulp tissue of human M3 teeth that had been extracted. Odontoblast pulp culture was divided in three groups： group one, cultured cells with propolis; group two, cultured cells induced with inactive Lactobacillus acidophilus; group three, cultured cells induced with inactive Lactobacillus acidophilus and exposed to 3 μg/mL propolis. A measurement of TNF-α and TGF-β1 expression was done using the immunocytochemical technique to determine the effectiveness of propolis extracts from East Java Indonesia against proinfalmmatory cytokines. Data were analyzed using the analysis of variance （ANOVA） test （P = 0.05）. Propolis extract can inhibit the expression of TNF-α and increase the expression of TGF-β1 on odontoblast-like cell in human dental pulp. Anti-inflammatory effects of East Java propolis extract are associated with cytokine modulation.     

干扰和过表达BAMBI基因对猪卵泡颗粒细胞表型和功能的影响

为研究转化生长因子-β（TGF-β）信号通路中的骨形态发生蛋白和激活素膜结合抑制剂（bone morphogenetic protein and activin membrane-bound inhibitor,BAMBI）基因对猪卵泡颗粒细胞的调控作用,本研究设计构建BAMBI干扰和过表达载体,并将构建好的干扰（pSIREN-BAMBI-sh1、pSIREN-BAMBI-sh2、pSIREN-BAMBI-sh3）和过表达（pcDNA3.1-BAMBI）重组质粒转染猪卵泡颗粒细胞,通过实时荧光定量PCR技术进行有效片段的筛选,并对TGF-β信号通路下游基因（TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、SMAD1、SMAD2、SMAD3、SMAD4、SMAD5）和细胞凋亡基因（Bax、Bcl-2）mRNA的表达水平进行检测。最后,用MTT法和流式细胞术检测BAMBI干扰和过表达对卵泡颗粒细胞增殖及凋亡的影响。结果表明,BAMBI干扰和过表达载体成功构建,pSIREN-BAMBI-sh2抑制BAMBI表达的效果最好,干扰效率最高。干扰BAMBI时,TGF-βRⅡ表达量显著上升（P<0.05）,使得SMAD2、SMAD3的表达量显著上升（P<0.05）;过表达BAMBI时,TGF-βRⅡ表达显著下降（P<0.05）,使得SMAD2、SMAD3的表达量显著下降（P<0.05）;上调BAMBI可显著抑制猪卵泡颗粒细胞增殖,极显著促进猪卵泡颗粒细胞凋亡（P<0.01）。研究结果表明,BAMBI基因显著影响猪卵泡颗粒细胞的生长发育,可能通过调节TGF-β信号通路间接影响猪的繁殖性能。     

山羊毛乳头细胞分离鉴定及TGF-β/smad通路相关基因的表达

试验旨在分离山羊毛乳头细胞,并探索其中TGF-β/smad通路相关基因的表达,为体外开展山羊毛囊发育的相关机制研究提供良好模型。采用中性蛋白酶与胶原酶两步消化法对山羊背部皮肤做处理,在体视显微镜下分离毛乳头细胞并进行纯化。细胞免疫荧光和Western blotting验证平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）和波形蛋白（vimentin,VIM）在体外培养的毛乳头细胞中的表达,并检测TGF-β/smad通路中相关基因在山羊毛乳头细胞中的表达情况。结果显示,分离后进行贴壁培养的毛乳头细胞生长较慢,在分离15 d后具有成熟形态,可进行传代培养。细胞免疫荧光和Western blotting结果表明,α-SMA和VIM在体外培养的毛乳头细胞中均表达,TGF-β/smad通路中smad4、smad5基因的表达水平显著高于对照组（P<0.05）,smad2、smad6、smad7基因的表达量极显著高于对照组（P<0.01）,这些与毛囊发育相关的关键基因均呈现高表达,表明毛乳头细胞可能通过TGF-β/smad通路的调控从而影响毛囊的发育。本研究成功分离出山羊毛乳头细胞,为体外研究山羊毛囊发育机制奠定良好的理论基础和细胞模型。     

TGF-β系统及其在硬骨鱼中的研究进展

TGF-β（transforming growth factor-β）是一类多效应细胞因子,在很多生理活动中发挥功能。TGF-β以前体形式合成,随后被切割活化形成成熟的TGF-β。TGF-β以二聚体的形式发挥作用,与受体TβRI（transforming growth factor-β receptor I）和TβRII（transforming growth factor-β receptor Ⅱ）形成一个大型复合物后,磷酸化胞内的Smad,激活下游信号通路。鱼类中,对TGF-β家族成员的研究主要集中在对TGF-β1的研究,包括TGF-β1与免疫相关和与生殖相关的功能,也有研究表明TGF-β1与肝功能相关。此外,有少量对TGF-β家族其他成员和TGF-β受体的研究。     

p53和TGF-β在细胞生长调控中的相互作用及其与疾病的研究进展

肿瘤抑制因子p53是第一个被发现的肿瘤抑制因子蛋白家族成员,该蛋白家族能感知许多细胞信号以调节细胞增殖、凋亡和分化。TGF-β是机体内重要的生理生化调节因子,在机体细胞生长分化、胚胎发育、创伤修复等方面发挥重要作用。p53与TGF-β信号转导密切相关。作者对近年p53与其依赖的TGF-β在细胞生长调控方面的相互联系研究进展作一简要综述。     

Arkadia和UCH37表达载体的构建及其对TGF-β1/Smads信号通路的影响

【目的】构建泛素启动酶Arkadia和泛素羧基末端水解酶-5（亦称UCH37）的表达载体,并探讨Smad7蛋白的泛素化修饰对马兜铃酸肾病中TGF-β1/Smads信号通路的影响。【方法】通过观察绿色荧光的表达量及real-time PCR反应优化转染条件,转染Arkadia和UCH37 siRNA,real-time PCR检测mRNA表达抑制率。分别构建Arkadia和UCH37的表达载体pGPU6/GFP/Neo,经鉴定后转染细胞,real-time PCR和Western blotting检测Arkadia、UCH37和Smad7的表达变化。【结果】①30 pmol siRNA和1.5 μL LipofectamineTM 2000为最佳转染条件;②Arkadia-1490和UCH37-721的干扰效果最明显;③载体的插入序列完全正确,且pGPU6/GFP/Neo-Arkadia能上调马兜铃酸肾病模型中Smad7的表达,而pGPU6/GFP/Neo-UCH37使Smad7表达下降。【结论】成功构建了表达载体pGPU6/GFP/Neo-Arkadia和pGPU6/GFP/Neo-UCH37,且Arkadia和UCH37可分别放大、抑制TGF-β1/Smads信号通路。     

TGF-β受体mRNA在湖羊机体组织中的表达水平及其与排卵数的关系

 【目的】通过分析TGF-β受体(TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ)mRNA组织表达谱及其表达水平与湖羊排卵数的关系,研究TGF-β受体对湖羊排卵数的影响。【方法】挑选16头经产母羊,其中8只产多羔的为高产组,8只产单羔作为对照组,使用氯前列醇钠法进行同期发情,发情后48～60 h内屠宰,测定排卵数;分离取高产组母羊的下丘脑、垂体等组织样进行组织表达谱分析,用实时荧光定量PCR法检测湖羊卵巢TGF-βRⅠ和TGF-βRⅡ基因mRNA表达水平,分析TGF-β受体表达水平与湖羊排卵数的关系。【结果】TGF-βRⅠ在生殖器官相对表达量极显著高于肺和肌肉(P＜0.01),TGF-βRⅡ在生殖器官相对表达量极显著高于其它组织(P＜0.01),是卵巢高表达基因;高产组湖羊卵巢组织TGF-βRⅠ与TGF-βRⅡ基因mRNA表达量分别极显著(P＜0.01)与显著(P＝0.011)高于对照组;湖羊卵巢组织TGF-βRⅠ和TGF-βRⅡ基因mRNA表达量与排卵数呈正相关,相关系数分别为0.562 (P＞0.05)和0.711(P＜0.05)。【结论】TGF-β受体在卵巢组织中表达高,其中高产组TGF-βRⅠ和TGF-βRⅡ基因mRNA表达量极显著或显著高于对照组,而且与排卵数呈正相关。