鸡毒霉形体TM-1基因原核表达载体的构建及表达

对从含有鸡毒霉形体H3株TM-1基因的大肠埃希氏菌DH5α中提取的质粒，进行EcoR Ⅰ和Sα／Ⅰ双酶切，获得了大约为786bp的目的片段。将此片段与经EcoRⅠ和Sαl Ⅰ双酶切的线性原核表达载体pET-30a-1连接。转化宿主菌BL21(DE3)，筛选阳性克隆。提取质粒，经酶切、PCR扩增和测序分析确证其插入正确，从而构建成了重组表达载体。阳性克隆用IPTG诱导表达，表达产物经SDS-PAGE电泳分析，证明其分子质量约为29ku；Western-blotting分析表明，该蛋白可被鸡毒霉形体阳性血清识别，具有生物学活性。     

大肠埃希氏菌F18ab菌毛F亚单位基因的克隆与鉴定

根据已发表的大肠埃希氏菌F18ab菌毛F亚单位(FedF／ab)的基因(fedF／ab)序列，设计了1对引物，利用PCR技术从大肠埃希氏菌F107／86、YCED1、YCED2、C、D和12F株中分别扩增获得了一段序列，并克隆至pGEM—T载体，获得了重组质粒TF107F、TYCED1F、TYCED2F、TCF、TDF、T12FF。经琼脂糖凝胶电泳、序列测定及分析，6个重组质粒的大小均为903bp，与fedF／ab基因大小一致。其中大肠埃希氏菌F107／86、YCED1、C和12F株的fedF基因序列完全相同；只有YCED2株在第181位碱基处存在1个C→T的无义变异差异，D株在第655位碱基处存在1个T→C变异差异并在氨基酸水平出现1个S→P变异。结果表明，所克隆的序列均为F18ab菌毛F亚单位的基因。     

猪胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白(OMP)5′末端保守区基因的克隆、表达及其免疫活性研究

以猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型25-4株基因组DNA为模板,PCR方法扩增外膜蛋白(OMP)5′末端保守区基因片段(OMPc),酶切及核苷酸序列分析鉴定后,与原核表达载体质粒pGEX-6P-1进行连接,构建成重组表达载体pGEX-OM-Pc,转入大肠杆菌BL21中,以IPTG进行诱导,SDS-PAGE电泳分析发现,转化了重组质粒的菌株所表达的融合蛋白相对分子量为34 kD,与实际预测相符,命名为GST-OMPc.GST亲和层析柱进行纯化,ELISA方法对纯化蛋白进行检测.结果表明:纯化蛋白GST-OMPc能够与兔抗猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型的阳性血清反应.OMPc蛋白的成功表达为其功能的研究打下基础.     

缓解高蛋白日粮引发禽痛风的典型药物比较试验

将200只22日龄罗曼肉鸡随机均分5组,以筛选能缓解高蛋白日粮引发痛风症的最佳药物。经5周试验,与未添加药物的对照组相比:①VA组能降低25%(P<0.01)的痛风,提高12.83%(P<0.01)的增重速度和8.43%的饲料报酬,对肠胃无不良影响;②别嘌呤醇(Allopuri-nol)组能降低22.5%(P<0.01)的痛风,提高11.95%(P<0.01)的增重速度和7.66%的饲料报酬,但产生了5%(P>0.05)的其他腹泻病;③苯溴马隆(Benzbromarone)组能降低20%(P<0.05)的痛风,提高11.5%(P<0.01)的增重速度和6.51%的饲料报酬,但也产生了5%(P>0.05)的其他腹泻病;④爱西特(Medicinalcharcoalcapsules)组能降低30%(P<0.01)的痛风,对肠胃无不良影响,但降低了3.54%(P>0.05)的增重速度和3.83%的饲料报酬。     

禽流感的实验室检测

禽流感是禽流行性感冒的简称．又称真性鸡瘟．是由正粘病毒科A型流感病毒的某些亚型引起的主要以禽类感染为主的一种急性、高度接触性传染病．对养禽业危害很大。禽流感由于感染毒株的毒力不同、感染禽类品种与健康状况不同．其临床症状、病理变化、致死情况大不相同：同时．由于本病在临床症状、病理变化方面与新城疫、传染性支气管炎、产蛋下降综合征等传染病很相似．从而给本病的临床诊断带来很大困难．要想确诊必须进行实验室检测。     

IFNγ诱导的p47GTPase对细胞内病原体的免疫

干扰素通过各种信号途径诱导它的效应基因转录和表达,这些被表达的蛋白质因子种类很多,它们通过不同的机制来发挥免疫作用。除了抗病毒、抗肿瘤及免疫调节作用以外,有些蛋白质因子还具有对细胞内寄生病原体的免疫作用。p47GTPase家族就是其中典型的一类,当其成员中的某个基因缺失时,动物表现出对相应病原体的易感性增强。p47GTPase通过与吞噬体结合来溶解病原微生物,并将病原体的抗原表位呈递给淋巴细胞,发挥多环节的免疫作用。     

草原区煤电基地景观格局演变及对群落α多样性的影响

为探明我国北方草原区在矿业开采背景下景观格局演变规律以及对群落α多样性的影响,选择锡林浩特市大型煤电基地为研究对象,分析了该区土地利用/覆盖变化和景观格局动态变化,以及景观格局变化对草原群落α多样性指标(Shannon-Wiener指数与Pielou均匀度指数)的影响.主要结论如下:1)在1991-2016年间,作为主...     

塞尼卡病毒A在BHK-21细胞中培养条件探索

研究发现,塞尼卡病毒A(Senecavirus A,SVA)是引发猪原发性水疱病(PIVD)的主要原因,感染猪的鼻吻、蹄冠部出现水疱性病变,还可造成新生仔猪死亡.为探索SVA在BHK-21细胞中培养的适宜条件,笔者分别从同步接毒法、单层接毒法、细胞浓度、收毒时间、血清含量等方面设计试验开展研究.本试验结果为制备高效价的...     

固体超强酸SO42-/TiO2-ZrO2 催化β-月桂烯与马来酸酐的Diels-Alder反应研究

研究了SO42-/TiO2-ZrO2型固体超强酸催化剂的制备及其催化β-月桂烯与马来酸酐的Diels-Alder反应,通过GC、GC-MS和红外分析,确定其主产物为4-(4-甲基-3-戊烯基)-4-环己烯-1,2-酸酐。结果表明,该催化剂对β-月桂烯与马来酸酐的Diels-Alder反应有较高的催化活性和较好的选择性。考察了其催化性能的影响因素。结果表明,适宜的催化剂制备条件是:n(钛)∶n(锆)为1∶1,焙烧温度450℃。Diels-Alder反应优化的工艺条件:n(β-月桂烯)∶n(马来酸酐)为1∶1、反应时间4 h、反应温度60℃、催化剂用量1%。该条件下β-月桂烯转化率96.5%,产物选择性94.0%,产物得率90.7%。同时考察了催化剂放置时间对异构产物的影响和催化剂重复使用情况。     

红豆树异黄酮类成分抑制番茄灰霉病菌的活性研究

【目的】研究红豆树提取物及其异黄酮对番茄灰霉病菌的抑菌作用,为植物源抑菌剂的开发和红豆树提取物利用奠定基础。【方法】采用生长速率法筛选红豆树异黄酮对番茄灰霉病菌的抑制作用,进一步测定异黄酮鹰嘴豆芽素A对番茄灰霉病菌的菌丝干重、细胞膜、还原糖含量、过氧化氢酶、过氧化物酶和超氧化物歧化酶等保护酶活性的影响,探讨抑制植物病原真菌的生理生化的作用,评价单体在离体番茄上的抑菌效果。【结果】鹰嘴豆芽素A对番茄灰霉病菌具有好的抑制效果,EC50值为203.189μg·mL^-1。番茄灰霉病菌经鹰嘴豆芽素A处理后,菌丝干重减少,细胞膜的通透性增加,菌体内还原糖含量减少,保护酶含量增多,并且在离体番茄上菌丝生长防治效果较好。【结论】红豆树种子乙酸乙酯活性部位富含生物碱和黄酮类化学成分,其中异黄酮成分是关键的抑菌活性成分。异黄酮成分发挥抑菌活性的作用方式,可能与其干扰菌丝生长、使菌丝细胞膜正常功能受损以及降低菌丝体内保护酶活性等有关。