牛病毒性腹泻病毒弱毒活疫苗免疫持续期的研究

为检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)弱毒活疫苗在免疫牛体内抗体产生及其消长规律,评价弱毒疫苗的保护效力,并确定免疫持续期,本试验对免疫试验牛每头颈部肌肉接种BVDV SM株弱毒疫苗104.5TCID50,监测血清抗体效价,进行免疫持续期的确定。在疫苗免疫后的6个月、9个月和12个月,分别抽取5头免疫组和5头对照组牛,采用BVDV-JL强毒株进行攻毒试验,每头牛攻毒剂量为6×107.0TCID50/mL。结果显示疫苗免疫后12个月时血清中和抗体效价仍维持在1∶1048以上。攻毒结果显示,在3个不同时间点进行强毒攻击后,免疫组所有动物白细胞数量都没有下降也没有分离到病毒,而对照组动物白细胞数下降均超过30%,6个月和9个月时动物血清中均能分离到病毒,而12个月对照组动物由于年龄大,没有分离到病毒,因此暂定此疫苗的免疫持续期为9个月。     

自家疫苗防治奶牛隐性乳房炎效果的研究

将武汉某牧场的38头隐性乳房炎患牛随机分为两组,第一组进行自家疫苗免疫试验,第二组使用药物治疗。每月采集奶样送至湖北省DHI检测室,探究自家疫苗对降低隐性乳房炎患牛乳体细胞数的效果。结果表明,自家苗免疫组牛奶体细胞数下降幅度极显著高于药物治疗组。     

弓形虫代谢分泌抗原疫苗对山羊流产高发区的免疫效果试验

制备以弓形虫E/SA（代谢分泌抗原）疫苗为主,辅以衣原体疫苗,对天祝县流产高发区的299只四群适龄母山羊（对照1群）在配种前进行免疫注射效果观测。结果在产羔期结束后统计流产率较往年显著降低,免疫后的三群羊分别由上年流产率的42%、36.7%、35%降为24.39%、0%和22.88%,流产率较上年度分别降低了41.92%、100%、34.62%,未免疫的对照群却上升了52.7%（37%上升为56.5%）。经现场考察和血清学分析,排除多种因素的干扰,证明弓形虫E/SA疫苗在本次免疫中效果显著。     

猪IL-10的表达及其免疫原性鉴定

为探明原核表达的重组猪IL-10对仔猪的免疫原性,根据GenBank公布的猪IL-10基因序列(登录号:L20001)设计并合成了扩增猪IL-10基因的引物。利用ConA刺激猪外周血淋巴细胞,通过RT-PCR扩增出pmIL-10完整基因及其成熟蛋白基因片段(pmIL-10),分别插入质粒pVAX1和pET32α(+),对猪IL-10基因进行原核与真核表达。利用纯化的重组蛋白免疫仔猪,制备抗血清,利用间接ELISA检测血清效价。将pVAX-pIL-10转染COS-7细胞,利用RT-PCR检测pmIL-10的转录,以间接免疫荧光(IFA)鉴定其与原核表达产物制备抗体之间的反应。结果显示:该试验成功获得了猪IL-10基因,重组菌pET-pmIL-10/Rosetta经IPTG诱导后,猪IL-10获得表达,目的蛋白表达量以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的39.7%;以白油佐剂重组蛋白免疫仔猪可产生高水平的抗猪IL-10的抗体,经ELISA检测,P/N值可达到8,OD630吸光值可达1.875,该抗体与转染pVAX-pmIL-10的COS-7细胞发生明显的荧光反应,说明原核表达的重组猪IL-10免疫产生的抗体具有生物学活性,为日后利用猪IL-10抗体消除病毒感染中产生的内源性IL-10研究奠定了基础。     

猪瘟病毒Taqman实时定量RT-PCR检测方法的建立和临床应用

根据猪瘟病毒5’非编码区(5’-UTR)设计特异性引物和Taqman探针,建立Taqman实时定量RT-PCR检测猪瘟病毒法。检测结果显示,该方法的灵敏度为1μl 10拷贝,在病毒拷贝数为1μl 108～101时,循环数(Ct)值与拷贝数对数呈现较好的线性关系,且重复性好,批间变异系数小于1%。用该方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、牛病毒性腹泻病毒,结果均为阴性。用该方法检测采集自江苏和新疆的192份组织和血清样品,猪瘟病毒阳性率为71.9%;检测感染猪的不同脏器,发现在心、肺、肝、肾、脑、脾脏、淋巴结、腹水中均可以检测到猪瘟病毒,与常规RT-PCR方法相比,该方法敏感性更高。该方法的建立为猪瘟病毒的流行病学调查和定量提供了有效手段。     

应用特异PCR方法诊断2例猪弓形虫病

[目的]应用特异PCR方法诊断猪弓形虫病。[方法]分别以弓形虫核糖体DNA第一内部转录间隔区(ITS1)序列和529 bp重复序列为目的片段,扩增2例疑似猪弓形虫病的病料肺门淋巴结DNA,对疑似猪弓形虫病的病料进行PCR诊断。[结果]2对引物均能分别扩增出2例肺门淋巴结中弓形虫DNA的特异条带。[结论]基于2种扩增片段的PCR方法均具有较高的特异性,是诊断猪弓形虫病的一种快速检测方法。     

转移猪轮状病毒VP4基因玉米植株的获得

根据GenBank中猪轮状病毒VP4基因序列设计引物,从重组克隆载体pMD18-T-VP4中PCR扩增VP4基因,将其插入到植物表达载体pCAMBIA3301中CaMV35S启动子下游,构建成高效植物表达载体pCAMBIA3301－VP4;然后利用农杆菌介导法,以玉米自交系H99茎尖来源的玉米愈伤组织为材料,将pCAMBIA3301－VP4导入其中,分化诱导获得再生苗后,对其进行PCR、Southern杂交和RT-PCR检测。结果表明,外源目的基因VP4已成功地转入玉米基因组中,并且目的基因能在转基因玉米植株中获得转录。     

Safety and immunogenicity of BPV-1 L1 virus-like particles in a dose-escalation vaccination trial in horses

Reasons for performing study: Infection with bovine papillomaviruses types 1 and 2 (BPV‐1, BPV‐2) can lead to the development of therapy‐resistant skin tumours termed sarcoids and possibly other skin diseases in equids. Although sarcoids seriously compromise the welfare of affected animals and cause considerable economic losses, no prophylactic vaccine is available to prevent this common disease. In several animal species and man, immunisation with papillomavirus‐like particles (VLP) has been shown to protect efficiently from papillomaviral infection. Hypothesis: BPV‐1 L1 VLPs may constitute a safe and highly immunogenic vaccine candidate for protection of horses against BPV‐1/‐2‐induced disease. Methods: Three groups of 4 horses each received 50, 100 or 150 µg of BPV‐1 L1 VLPs, respectively, on Days 0, 28 and 168. Three control horses received adjuvant only. Horses were monitored on a daily basis for one week after each immunisation and then in 2 week intervals. Sera were collected immediately before, 2 weeks after each vaccination and one and 2 years after the final boost and analysed by pseudovirion neutralisation assay. Results: None of the horses showed adverse reactions upon vaccination apart from mild and transient swelling in 2 individuals. Irrespective of the VLP dose, all VLP‐immunised horses had developed a BPV‐1‐neutralising antibody titre of ≥1600 plaque forming units (pfu)/ml 2 weeks after the third vaccination. Eight of 10 trial horses still available for follow‐up had neutralising antibody titres ≥1600 pfu/ml one year and ≥800 pfu/ml 2 years after the last immunisation. Conclusion: Intramuscular BPV‐1 L1 VLP vaccination in horses is safe and results in a long‐lasting antibody response against BPV‐1. Neutralisation titres were induced at levels that correlate with protection in experimental animals and man. Potential relevance: BPV‐1 L1 VLPs constitute a promising vaccine candidate for prevention of BPV‐1/‐2‐induced disease in equids.     

短链有机酸及其盐替代抗生素对猪生产性能的影响研究

本文就短链有机酸的种类、对猪的生产性能影响及可能的作用机理等作一综述,旨在为猪日粮无抗营养调控技术的研发与实践提供参考。     

自家苗治疗连城白鸭浆膜炎的效果研究

选择刚死亡且具有典型鸭传染性浆膜炎病变的病死鸭,无菌采集其肝组织,对疑似鸭疫里默氏杆菌进行分离鉴定,证明确为鸭疫里默氏杆菌,然后将该菌株扩增培养,通过甲醛灭活,再经无菌试验和安全性试验验证,制成安全的自家苗,随后对自家苗作临床效力试验,结果证明该苗具有较好的免疫防治效果,适合在当地推广使用。