猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株复合实时荧光定量RT-PCR鉴别方法的建立

根据GenBank中的猪瘟病毒强毒和弱毒株基因组序列设计了1对针对猪瘟病毒的通用引物和2条分别针对猪瘟病毒强毒和猪瘟兔化弱毒疫苗株的特异性TaqMan水解探针，建立了一种能区分猪瘟病毒强毒和兔化弱毒疫苗株的复合实时荧光定量RT—PCR检测方法。结果显示，该方法能将我国大陆流行的不同基因亚群的猪瘟病毒强毒株与猪瘟兔化弱毒疫苗株完全区分开来，而不与其他猪源病毒发生非特异反应，分别可检测到初始模板中41．8和81．5个拷贝的病毒RNA，与已建立的复合RT-套式PCR的敏感性相近，两种方法对152份样品检测的符合率达96．9％～100％。通过对8份猪瘟兔化细胞疫苗效价的检测，证实本方法与兔体反应热测定法有一定的相关性，可用于猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗的定量和鉴别检测。     

猪瘟疫苗质量的替代检验方法研究进展

国标的猪瘟疫苗效力检验、支原体检验、外源病毒检验等质量检验方法均存在试验周期长、操作繁琐、敏感性较低等缺点,随着现代免疫学与分子生物学技术的快速发展,猪瘟疫苗质量检验的新兴替代检验方法日臻发展和完善。论文就近年来针对猪瘟病毒的病毒含量测定、猪瘟疫苗效力检验、支原体检验、外源病毒检验等免疫学与分子生物学新兴检测方法的研究进展做一综述,以期为提高猪瘟疫苗的质量检验水平、保障猪瘟疫苗质量提供参考依据。     

传染性法氏囊病病毒变异株弱毒的免疫原性

传染性法氏囊病病毒（IBDV）JD1、JD2、NB变异株和HZ1、SC经典株弱毒分别以300TDID50、5000TCID50、1000TCID50、5000TCID50剂量免疫SPF鸡后的攻毒试验结果表明：IBDV－NB、JD1、HZ1弱毒株可诱导SPF鸡产生很高的血清和抗体,具有优良的免疫原性,弹毒攻击保护率达100％。IBDV－NB毒株的最佳免疫剂量为3000TCID50、IBDV－JD1和HZ1毒析的最佳免疫剂量为5000TCID50。抗体消长规律表明NB毒株－次免疫的有效保护期可达274天,JD1和HZ毒株为214天。     

不同法氏囊病活疫苗对新城疫免疫效果影响的评估

为了评估不同毒力鸡传染性法氏囊病（Infectious Bursal Disease,IBD）活疫苗是否会对鸡的免疫应答产生影响,本实验选用A、B、C三种商品化IBD活疫苗免疫商品肉鸡,以鸡新城疫（Newcastle Disease,ND）疫苗抗体的消长规律为模型,评估3种I BD疫苗对ND抗体产生的影响.免疫后ND抗体检测结果显示,三种疫苗对ND抗体产生的影响差异不明显。结果提示,临床上选用IBD疫苗不必过于关注其毒力。     

魏氏梭菌毒素疫苗研制及其免疫家兔抗体消长规律

从山东省莱芜、泰安、潍坊等3个养兔场发生疑似梭菌性下痢的病兔体内分离到3株魏氏梭菌，鉴定为A型。利用该分离菌株和A型魏氏梭菌标准株(CVCC37)所产外毒素经甲醛灭活并加入氢氧化铝胶佐荆吸附浓缩后制备了A型魏氏梭菌类毒素疫苗。对该疫苗分别进行了安全性检验、有效免疫剂量试验和接种家兔1～23周血清中抗毒素(Ab)消长规律研究。结果表明，魏氏梭菌外毒素用0．3％甲醛32h能够彻底灭活，并最大可能地保持其抗原性；制备的魏氏梭菌类毒素疫苗无毒副作用，安全可靠；用野毒株和标准株制备的类毒素疫苗对家兔的有效免疫剂量为2mL／只，免疫保护效果可靠；采用野毒株和标准株制备的类毒素疫苗免疫接种家兔后第2周血清抗毒素效价迅速升高，到第4周达最高峰，分别为6．6 log2和7．125 log2，较高抗体滴度维持约17周后缓慢下降，至23周时血清平均抗毒素滴度仍维持在4．0 log2和3．4 log2以上，所以，该类毒素疫苗的免疫保护期可以设定为6个月。     

口蹄疫灭活疫苗研究进展

灭活疫苗仍然是当前口蹄疫免疫控制的主要疫苗,研制口蹄疫灭活疫苗具有重要的现实意义,其研制方法在不断丰富和完善。文章详细描述了口蹄疫灭活疫苗研制的重要步骤及其进展,包括毒株筛选,病毒生产、灭活、抗原浓缩、纯化和配苗及疫苗的质量控制。制苗毒株的选择是研制疫苗的首要问题,直接关系到疫苗的免疫效果;病毒灭活和随后的安全试验是在制备灭活FMD疫苗中最关键的步骤;抗原浓缩纯化和配苗是保证疫苗良好免疫效果的必需。最后阐述了口蹄疫灭活疫苗在口蹄疫防控中的作用。     

兽用冻干疫苗耐热保护剂的研究——鸡传染性支气管炎冻干活疫苗耐热保护剂试验

本试验以水解乳蛋白、乳糖、硫脲、多聚蛋白胨、聚乙烯吡咯烷酮 (PVP K90 )等为主要材料 ,配 A组保护剂 ,并加 B组保护剂 (国内常规的蔗糖脱脂乳 )和 C组保护剂 (国外疫苗保护剂 )分别与鸡传染性支气管炎病毒 (IBV H1 2 0、H52、HK肾型 )弱毒原液 ,按一定比例配苗 ,采取特定的冻干曲线制备的试验疫苗 ,在不同温度下保存后测定效价变化情况。试验证实 ,A组保护剂耐热保护性能最好 ,在 2～ 8℃条件下有效保存期达 2年以上 ,达到国外同类产品水平。     

烟台黑猪与鲁烟白猪哺乳仔猪猪瘟母源抗体变化与比较

采用猪瘟正向间接血凝试验（IHA）检测方法,对7头烟台黑猪和5头鲁烟白猪母猪及其哺乳仔猪进行母猪猪瘟抗体和哺乳仔猪母源抗体效价检测,研究烟台黑猪和鲁烟白猪仔猪母源抗体变化规律,通过试验找到烟台黑猪和鲁烟白猪最佳首免时间。试验表明,烟台黑猪和鲁烟白猪母猪的猪瘟抗体效价,从分娩到产后21 d一直维持较高水平;产后28天鲁烟白猪母猪猪瘟抗体效价下降速度快于烟台黑猪;烟台黑猪和鲁烟白猪仔猪的猪瘟母源抗体水平变化差异显著,产后21～35 d鲁烟白猪仔猪的猪瘟母源抗体水平下降明显快于烟台黑猪。根据猪瘟母源抗体的变化情况,确定烟台黑猪仔猪猪瘟首免时间最好在40日龄,可有效减少猪瘟母源抗体对疫苗免疫的干扰;鲁烟白猪仔猪猪瘟首免时间在30～35日龄为最佳。     

中蜂囊状幼虫病毒多克隆抗体的制备

利用中蜂囊状幼虫病毒（CSBV）灭活疫苗作为抗原制备兔多克隆抗体。利用RT- PCR方法对疑似感染CSBV的中蜂样品进行检测,检测阳性后,经差速离心法纯化CSBV,并用BCA方法检测病毒浓度,将病毒浓度稀释至0.25 mg/mL。按稀释后的CSBV体积的0.3%加入甲醛灭活进行灭活,制备CSBV油乳剂灭活苗,经无菌、安全性和稳定性检验合格后,对新西兰大白兔进行3次免疫,每次间隔2周,对其产生的多克隆抗体进行了SDS- PAGE分析和效价检测,结果表明制备的兔多克隆抗体效价OD值最高可达到1.109。实现了中蜂囊状幼虫病毒高效价多克隆抗体的制备,为深入研究CSBV和综合防治奠定了基础。     

猪瘟淋脾毒耐热保护剂活疫苗的中试生产及区域试验

按照拟定的猪瘟淋脾毒耐热保护剂活疫苗制造工艺在辽宁益康生物药品厂进行了5批该疫苗的中试生产,计15万头份,检验全部合格.在北京、河北等地选择9个猪场进行区域试验,共免疫3个品种约3万余头猪,均安全、未显现任何不良反应,跟踪观察,免疫过的猪未发生猪瘟,表明该疫苗安全有效.