大丽轮枝菌菌体对链霉菌胞外蛋白酶活性及抑菌效果的影响

 为研究拮抗链霉菌对棉花黄萎病原大丽轮枝菌（Verticillium dahliae Kleb.）的抑菌机理,以大丽轮枝菌菌体为唯一碳氮能源,采用液体培养法及生长速率法研究供试病原菌菌体对4株拮抗链霉菌胞外蛋白酶合成的诱导作用及抑菌活性物质产生的影响。结果表明：大丽轮枝菌菌体可以诱导供试链霉菌合成蛋白酶;诱导粗酶液对病原真菌菌丝有溶解作用;当菌体添加量为10 g·L^-1,28℃培养7 d时菌株Z13蛋白酶活性高达4.24 U;以大丽轮枝菌菌体为碳氮能源时供试链霉菌能产生活性较强的抑菌物质;当菌体添加量为20 g·L^-1,发酵液稀释5倍时菌株B49所产抑菌活性物质的最大抑菌率达95.7%。     

Solid-Phase Extraction Embedded Dialysis (SPEED), an Innovative Procedure for the Investigation of Microbial Specialized Metabolites

Solid-phase extraction embedded dialysis (SPEED technology) is an innovative procedure developed to physically separate in-situ, during the cultivation, the mycelium of filament forming microorganisms, such as actinomycetes and fungi, and the XAD-16 resin used to trap the secreted specialized metabolites. SPEED consists of an external nylon cloth and an internal dialysis tube containing the XAD resin. The dialysis barrier selects the molecular weight of the trapped compounds, and prevents the aggregation of biomass or macromolecules on the XAD beads. The external nylon promotes the formation of a microbial biofilm, making SPEED a biofilm supported cultivation process. SPEED technology was applied to the marine Streptomyces albidoflavus 19-S21, isolated from a core of a submerged Kopara sampled at 20 m from the border of a saltwater pond. The chemical space of this strain was investigated effectively using a dereplication strategy based on molecular networking and in-depth chemical analysis. The results highlight the impact of culture support on the molecular profile of Streptomyces albidoflavus 19-S21 secondary metabolites.     

防病促生功能性微生物的筛选及应用研究

从温室番茄根际分离得到具有抗病和促生功能的链霉菌 (Streptomyces sp)S5 0 6菌株。盆栽法测定 ,S5 0 6对番茄苗期立枯病Rhizoctonia sp和枯萎病Fusarium sp的防效分别达到了 86 1 %和 89 4% ,与化学药剂的防效无显著差别 ;与常规处理比较 ,对番茄株高、整株鲜重、地上部干重、叶面积、主根长、毛细根数量和根系干重的促进效果均达极显著水平 (P <0 0 1 )。在连茬 4年冬春茬番茄生产上应用 ,S5 0 6有效预防了苗期立枯病的发生 ,对毛粉 40 2和宝冠都表现出显著的促生长效果 ,单株产量分别比对照提高了 1 5 9%和1 7 6%。     

链霉菌702生物活性物质抑菌的致死浓度和致死时间的测定

通过对链霉菌702所产生物活性物质和纳他霉素及Nisin分别对黑曲霉、青霉、绿色木霉、枯草芽孢杆菌、蜡质芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、产朊假丝酵母、啤酒酵母的抑制作用研究,试验结果得出链霉菌702所产生物活性物质对各种指示菌的半致死浓度和半致死时间,证明链霉菌702所产生物活性物质抑制效果比纳他霉素及Nisin强。试验结果为链霉菌702所产活性物质应用提供了有益的试验数据。     

将透明颤菌血红蛋白基因(vgb)转移到链霉菌染色体整合载体的构建

链霉菌抗生素的生物合成对培养环境中氧的供应相当敏感,为了改善这一溶氧问题,本研究通过将透明颤菌血红蛋白基因(vgb)克隆到含ФC31int,attP基因的诱导型表达载体pU8600上,构建了可接合转移到链霉菌的整合型表达vgb基因的质粒pHZ1276。pHZ1276通过接合转移导入变铅青链霉菌(Streptomyces lividans),所得重组子经Southern杂交验证后,进行诱导表达,菌体经破碎后所得蛋白粗提物经Western杂交和CO结合试验表明vgb基因在该菌中表达出了有活性的VHb蛋白。     

杨树烂皮病生防链霉菌的筛选及鉴定

为明确能有效抑制杨树烂皮病菌的拮抗放线菌F58的生防效果及分类地位,采用平板对峙法、杯碟法和人工接种法分别测定了其活菌及发酵液的抑菌活性;并通过形态学、生理生化特征、16S rRNA及全细胞脂肪酸分析等方法研究了其分类地位。结果表明,拮抗放线菌F58对杨树烂皮病菌、杨树溃疡病菌、苹果斑点落叶病菌等13种供试植物病原菌均有抑制作用,抑菌谱广,其中对杨树烂皮病菌和杨树溃疡病菌抑制作用最强,抑菌带达30.2 mm以上,菌株F58发酵液对这2种病菌也有很强的抑制作用,抑菌圈直径分别为56.4 mm和42.7 mm;发酵液的无菌滤液对杨树烂皮病的保护效果和治疗效果分别达88.7%和73.4%。根据菌株形态、生理生化特性、16S rRNA序列比对及全细胞脂肪酸分析,鉴定拮抗放线菌F58为盐屋链霉菌Streptomyces sioyaensis。     

梨灰霉病拮抗放线菌L-30的筛选、鉴定及作用机制研究

采用平板对峙培养法从果树根际土壤中筛选出对梨灰霉病菌(Botrytis cinerea)及10种常见果实采后病害具有抑制活性的放线菌株L-30,同时利用分子方法结合形态观察对其进行鉴定,并测定其对B.cinerea孢子萌发的抑制作用、对‘皇冠’梨的诱导抗性和果实防御酶系活性的影响。结果表明,菌株L-30对梨灰霉病菌的活体抑制活性达到40%以上,基于16S rDNA核酸一致性和系统发育分析及培养特性证明L-30为链霉菌属(Streptomyces)的多产色链霉菌(S.polychromogenes)。L-30稀释100倍发酵液对梨灰霉病孢子萌发抑制率为52.04%。L-30处理皇冠梨果实能显著降低梨灰霉病菌的扩展,并提高果实的过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性。     

南昌链霉菌(Streptomyces nanchangensis)固体种子培养的研究

本研究进行了南昌链霉菌孢子培养基和培养条件的筛选。筛选到的培养基和培养条件,使南昌链霉菌每支斜面孢子达5亿多,是高氏培养基产孢量的7.5倍,培养时间缩短了7～10天。同时初步探讨了南昌链霉菌在固体培养基上孢子的消长变化及对摇瓶发酵产素的影响,发现该菌在固体培养基上能周期性地产生多代孢子;摇瓶发酵,接种第一代孢子南昌霉素 A 产量最多,接种第二代孢子则高效杀虫组分 B 的效价最高。     

金色链霉菌接合转移体系的构建

以金色链霉菌J13基因组DNA为模板,扩增金霉素C6甲基化酶基因ctcF上下游序列作为两端同源交换臂,在两臂之间添加抗性筛选标记neo基因,并在该基因上游加入组成型强启动子ermE*,以强化筛选标记.将该外源DNA序列插入到质粒pSET152,构建重组质粒pFD106.转化大肠杆菌ET12567后,经接合转移导入金色链...     

链霉菌702发酵液对水稻种传真菌的抑制效果、种子发芽率的影响

对江西省6个水稻主栽品种种传真菌进行了检测,研究了链霉菌702发酵液对水稻种传真菌的抑制效果及对种子发芽率的影响.结果表明,6个水稻主栽品种不同程度带有稻毛锥孢菌、镰刀菌等真菌,种子带菌率在52%以上.3种药剂处理和链霉菌702发酵液处理后均能有效抑制种传真菌,达到极显著水平,说明链霉菌702发酵液可以有效防治因种传真菌引起的幼苗病害.链霉菌702发酵液处理种子后,种子的发芽率受到一定影响,但没有达到显著水平,说明将链霉菌702发酵液用于水稻种子种传真菌防治的药剂是安全的.