低浓度阿奇霉素对猪链球菌2型蛋白表达、荚膜多糖与药物敏感性的影响

本研究通过探索低浓度阿奇霉素对猪链球菌2型蛋白表达、荚膜多糖与药物敏感性的影响,为进一步研究环境中低浓度抗生素对微生物的影响奠定基础。用低浓度阿奇霉素处理猪链球菌2型,利用蛋白质组学iTRAQ技术,筛选关键差异表达蛋白。同时测定猪链球菌2型的荚膜多糖含量和药物敏感性。结果显示,共鉴定到差异表达蛋白174个,占总鉴定蛋白的11.6%,多数差异表达蛋白参与催化和代谢过程,属于膜蛋白,其中,3个荚膜多糖蛋白、9个ABC转运蛋白、1个50 S核糖体蛋白、1个核糖体RNA甲基转移酶、1个DNA回旋酶上调表达;8个荚膜多糖蛋白、4个50S核糖体蛋白、4个30S核糖体蛋白、1个核糖体RNA甲基转移酶、1个DNA聚合酶IV下调表达。用低浓度阿奇霉素处理猪链球菌2型,发现其对多种抗生素的敏感性降低,存活下来的菌株,恢复正常培养后,药物敏感性恢复。用低浓度阿奇霉素处理猪链球菌2型,荚膜多糖含量也未发生大幅度变化。猪链球菌2型通过改变自身蛋白质组的表达量,以适应低浓度阿奇霉素的选择压力。与低浓度阿奇霉素共存时,猪链球菌2型开启外排泵系统,会增加细菌产生多重耐药的风险。     

基于网络药理学探讨黄芩素治疗猪链球菌脑膜炎的分子机制

为探讨黄芩素治疗猪链球菌脑膜炎的分子机制,应用网络药理学的方法,在Pubchem和SwissTarget Prediction数据库获取黄芩素490个潜在作用靶点,并在NCBI等平台中检索猪链球菌脑膜炎的靶点。运用STRING数据库构建“中药-疾病”共同靶点的PPI网络图;利用DAVID数据库进行GO功能注释和KEGG通路富集分析,并使用Cytoscape3.8.2软件构建“中药-靶点”通路图。结果显示黄芩素和猪链球菌脑膜炎有9个共同靶点(MMP2、SYK、FN1、MAPK14、HSPCB、CASP3、CCL2、APOD、EGFR),其中MMP2、SYK和FN1是脑损伤的核心靶点。GO富集分析发现,黄芩素可能通过影响细胞凋亡的调控过程、细胞外间隙、细胞氧化应激的过程缓解猪链球菌脑膜炎的症状;KEGG通路主要富集在IL-17信号通路、MAPK信号通路等41条相关通路。基于网络药理学的结果,本研究探讨了黄芩素潜在治疗链球菌引起的脑膜炎的作用,推测该中药成分可以作为开发抗猪链球菌疾病的先导化合物,为开发治疗猪链球菌病的药物奠定研究基础。     

暹罗鳄外周血白细胞提取物抗海豚链球菌感染的效果

通过细胞破碎和沉淀的方法从暹罗鳄(Crocodylus siamensis)外周血白细胞中获得提取物,并将此提取物以3种不同的方式注射小鼠,测定其在小鼠体内抗御海豚链球菌感染的效果。实验结果表明,若用海豚链球菌以腹腔注射感染小鼠,小鼠表现出明显病理症状,然后用不同浓度(2.2×103、2.2×102、2.2×101μg/ml)的提取物以腹腔注射小鼠,可使小鼠分别获得77.8％、55.6％、44.4％的相对保护率;若将海豚链球菌与不同浓度(2.2×103、2.2×102、2.2×101μg/ml)的提取物在体外等体积混合,然后将混合物以腹腔注射小鼠,可使小鼠分别获得55.6％、88.9％、77.8％的相对保护率;若将海豚链球菌以肌肉注射小鼠左腿,同时以不同浓度(2.2×103、2.2×102、2.2×101μg/ml)的提取物以肌肉注射小鼠右腿,可使小鼠分别获得77.8％、66.7％、44.4％的相对保护率。本实验的结论是：暹罗鳄外周血白细胞内存在一种或数种高效的抗菌物质,在小鼠体内能有效的防御由某些细菌导致的感染。     

LAMP检测无乳链球菌方法的建立及应用

以无乳链球菌纤连蛋白fbs基因为主要研究对象,采取环介导等温扩增技术(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP),针对fbs基因的6个区域设计4条特异性引物,利用一种链置换DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)在63℃保温1 h,通过荧光显色即可完成对无乳链球菌的检测工作.结果显示,LAMP方法能够特异性检测fbs基因,其检测灵敏度是常规PCR方法的100倍,并与实时荧光定量PCR方法相当.所建立的针对无乳链球菌fbs基因的LAMP检测方法具有高度的特异性及稳定性,结果可靠,非常适合无乳链球菌的快速检测.     

猪链球菌2型纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白 全基因的克隆及融合表达

采用发表的引物对,以猪链球菌2型（Streptococcus suis type 2）江苏分离株HA9801的基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白基因fbps（GenBank登录号为AY565303）克隆于pMD-T18载体构建成载体pMD-T-fbps.经内切酶酶切和测序鉴定后,将由pMD-T-fbps内切酶切下的片段定向克隆于表达载体pET-32a（＋）,得到重组质粒pfbps.将重组质粒pfbps转化大肠杆菌（Escherichia coli）BL21株,经IPTG诱导,可高水平地表达相对分子量为83 kD的融合蛋白.配体印迹结合试验表明,表达的融合蛋白可与人纤连蛋白结合.     

Inhibitory effect of a bioactivity-guided fraction from Rheum undulatum on the acid production of Streptococcus mutans biofilms at sub-MIC levels

Rheum undulatum root has been used traditionally in Korea for the treatment of dental diseases. The purpose of this study was to separate a fraction from R. undulatum showing anti-acid production activity against Streptococcus mutans biofilms and identify the main components in that fraction. Methanol extract of R. undulatum root and its fractions were prepared. To select a fraction exhibiting anti-acid production activity, suspension glycolytic pH-drop assay was performed. Among the fractions tested, dichloromethane fraction exhibited the strongest activity in a dose-dependent manner. To examine the effect of the selected fraction on the anti-acid production of S. mutans biofilms, 74 h old S. mutans biofilms were used. The selected fraction reduced the initial rate of acid production of S. mutans biofilms at sub-minimum inhibitory concentration (MIC) levels. HPLC qualitative analysis of the selected fraction indicated that the presence of anthraquinone derivatives, such as aloe-emodin, emodin, chrysophanol and physcion, as main components.     

外源添加氨基酸对兽疫链球菌产透明质酸的影响

兽疫链球菌(Streptococcus zooepidemicus)是一种营养缺陷型菌株,其生长代谢需要外源添加各类营养因子。通过在兽疫链球菌发酵对数生长初期外源添加氨基酸的方式研究其对透明质酸生产的影响。结果表明,外源添加氨基酸对透明质酸的生产具有显著的促进作用。笔者初步研究了当添加质量浓度为0.5 g/L时,18种常见氨基酸对透明质酸产量的影响。在此基础上,在18种氨基酸中选取苯丙氨酸和丝氨酸对透明质酸合成进行浓度优化实验,结合细胞生长和代谢产物分析,更进一步研究氨基酸对透明质酸合成的影响。结果表明,苯丙氨酸和丝氨酸添加质量浓度分别为0.5 g/L和0.5 g/L时,透明质酸产量提高最大,与对照相比分别提高了18.05%和17.44%,菌体浓度均没有增加,但是乳酸浓度分别降低了9.93%和15.80%,说明氨基酸的添加不是通过增加菌体量来提高透明质酸产量,而是改变了碳源流向,减少了乳酸积累,使得透明质酸产量显著提高。本研究为高产透明质酸的发酵工艺提供了借鉴与依据。     

Antimicrobial activity against <Emphasis Type="Italic">Streptococcus sobrinus</Emphasis> and glucosyltransferase inhibitory activity of taxifolin and some flavanonol rhamnosides from kempas (<Emphasis Type="Italic">Koompassia malaccensis</Emphasis>) extracts

Twenty plant materials collected from the islands of Java and Kalimantan in Indonesia were extracted with 50% aqueous ethanol (crude extract). The crude extracts were assayed for antimicrobial activities against Streptococcus sobrinus and for glucosyltransferase (GTase) inhibition. Fourteen extracts inhibited the growth of S. sobrinus by more than 50% and six extracts inhibited GTase activity by more than 50% at a concentration of 100 μg/ml. Koompassia malaccensis (kempas) extracts showed 90% depression of S. sobrinus growth and 80% inhibition of GTase activity at a concentration of 100 μg/ml. Kempas crude extracts were subjected to column chromatography using Sephadex LH-20 and then preparative high-performance liquid chromatography to isolate four compounds A, B, C, and D. These compounds were identified as taxifolin and the flavanonol rhamnoside isomers neoastilbin, astilbin, and isoastilbin, respectively, from ¹H and ¹³C nuclear magnetic resonance (NMR) spectra and other two-dimensional NMR techniques (COSY, HMBC, and HMQC). Each compound depressed the growth of S. sobrinus over a concentration range of 9.3242.7 μg/ml and showed GTase inhibitory activity with IC₅₀ values in the range 27.4–57.3 μg/ml. Taxifolin and flavanonol rhamnoside isomers isolated for the first time from kempas could be potent compounds for preventing dental caries. Part of this report was presented at the 57th Annual Meeting of the Japan Wood Research Society Conference, Hiroshima, 2007     

环介导等温扩增联合横向流动试纸条可视化检测海豚链球菌方法的建立

海豚链球菌(Streptococcus iniae)是一种革兰氏阳性球菌,呈β溶血,可感染多种淡水和海洋鱼类。本研究利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)进行核酸扩增,通过横向流动试纸条方法 (lateral flow dipstick,LFD)实现检测,建立了一种可应用于海豚链球菌快速检测的LAMP-LFD技术。该技术以海豚链球菌促旋酶B亚单位(gyrase subunit B,gyr B)基因为检测靶标,设计3对引物进行由生物素标记的LAMP扩增反应,产物经异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的探针杂交后,在LFD上完成检测。经优化的核酸扩增最适条件为65℃反应30 min,在此条件下,阳性扩增起始时间与模板浓度之间呈典型的线性相关性。从核酸扩增反应开始到LFD显色,整个检测时程只需40 min左右,比常规PCR技术缩短约2 h。LAMP-LFD能特异性地检出海豚链球菌,针对病原纯培养物的检测灵敏度为8.70×101cfu/m L,是LAMP检测的10倍、常规PCR检测的100倍。以灵敏度浓度(8.70×101cfu/m L)的海豚链球菌基因组DNA为模板进行的LAMP-LFD结果显示该方法具有良好的重复性。针对人工污染花鲈(Lateolabrax japonicus)肝组织的检测灵敏度为4.35×103cfu/m L,同样为常规PCR检测方法的100倍。利用本方法可成功从患病花鲈的组织样品中检测出海豚链球菌,检测结果与常规的细菌分离鉴定方法结果一致。因此,利用LAMP-LFD能特异、准确、高效地检测出海豚链球菌,而且操作简单、费用低、耗时短,有望成为海豚链球菌的常规检测方法。