Screening of lentiviral vectors carrying effective siRNA targeting S1P2 gene

AIM:To screen the lentiviral vector carrying siRNA with higher efficiency of suppressing the sphingosine-1-phosphate receptor 2(S1P2) gene expression in the primarily cultured corpus cavernosum smooth muscle cells of spontaneously hypertensive rats (SHR).METHODS:SHR and SD rats (n=5 each) were used for primarily culturing corpus cavernosum smooth muscle cells.The cells were randomly divided into 6 groups:SHR siRNA-1,SHR siRNA-2,SHR siRNA-3,SHR GFP,SHR control (SHR non-transfection group),and SD control (SD rat control group).Each group had 5 samples with 1.0×10⁵ cells of each sample.At 72 h after transfection (MOI=60) with lentiviral vectors carrying S1P2 siRNA into the SHR corpus cavernosum smooth muscle cells,the expression of GFP was observed under fluorescence microscope.The protein expression of S1P2,ROCK1,ROCK2 and eNOS in the corpus cavernosum smooth muscle cells,and the mRNA expression of S1P2,ROCK1 and ROCK2 were determined by by Western blot and RT-PCR.RESULTS:The transfection efficiency of the corpus cavernosum smooth muscle cells in SHR siRNA-1,SHR siRNA-2,SHR siRNA-3 and SHR GFP groups were>80%.Compared with SHR control group,the mRNA levels and the protein expression of S1P2,ROCK1 and ROCK2 in SHR GFP group showed no remarkable changes,while those in SHR siRNA-1,SHR siRNA-2,SHR siRNA-3 and SD control groups were significantly lower than those in SHR control group (P<0.05).The protein expression of eNOS in SHR siRNA-1,SHR siRNA-2,SHR siRNA-3 and SHR GFP groups were not significantly changed as compared with SHR control group,but that in SD control group was significantly higher than that in SHR control group.CONCLUSION:Three groups of siRNA lentiviral vectors targeting S1P2 inhibit the expression of S1P2 in the corpus cavernosum smooth muscle cells of SHR,and by silencing the S1P2 expression,the expression of ROCK1 and ROCK2 is inhibited.Among them,siRNA-1 has the highest inhibitory efficiency.     

用绵羊小肠液冻干粉测定饲料过瘤胃淀粉小肠消化率方法的研究

本试验旨在以玉米为样本筛选用绵羊小肠液冻干粉测定精饲料瘤胃非降解残渣淀粉小肠消化率的最佳培养条件。分别研究了小肠液冻干粉用量(0.2、0.3、0.4、0.5和0.6g)对16h玉米瘤胃非降解残渣干物质和淀粉小肠消化率的影响;离体培养时间(4、8、12、16、20和24h)对16h玉米瘤胃非降解残渣干物质和淀粉小肠消化率的影响。结果表明,在本试验条件下,绵羊小肠液冻干粉测定玉米瘤胃非降解残渣淀粉小肠消化率的最佳用量为0.45g小肠液冻干粉/0.56g玉米瘤胃非降解残渣,最佳培养时间为12h。利用绵羊小肠液冻干粉测定常用饲料过瘤胃残渣淀粉小肠消化率的方法是可行的。     

以谷蛋白GluA-2信号肽增强外源蛋白在转基因水稻胚乳中的表达与积累

提高外源蛋白在特定目标组织器官中的表达量是转基因植物研究与开发的核心技术之一。谷蛋白是水稻种子中最主要的贮藏蛋白,其表达具有严格的时空特异性。为进一步研究谷蛋白信号肽序列在指导基因表达中的作用,本研究克隆了水稻谷蛋白Glu A-2基因的启动子及其信号肽编码序列,并与GUS报告基因编码区融合,构建了分别含有和不含有信号肽的表达载体p13GG和p13GSG;经农杆菌介导法分别转入同一水稻品种中,获得了20多个独立转化子,PCR证明外源基因都已整合进了水稻基因组中。Northern杂交结果表明,融合Glu A-2信号肽编码序列可显著提高GUS基因在水稻胚乳中的转录;利用GUS特异的抗体进行Western杂交分析,显示该信号肽序列可显著提高外源蛋白在转基因水稻胚乳中的积累,但是其所指导表达的GUS蛋白在水稻胚乳中并没有表现出相应的活性,其机制有待进一步深入解析。相关结果对于水稻品质改良基因工程研究以及以水稻种子作为生物反应器高效表达外源蛋白具有重要的指导作用。     

降雨类型和水土保持对黄土区小流域水土流失的影响

对黄土区桥子东沟流域的143场次洪水事件水文泥沙数据进行统计分析,并利用K均值分类法划分降雨类型,比较不同降雨类型条件下流域水土流失特征,探讨水土保持治理对不同降雨类型下流域产流输沙的影响。结果表明,次降雨量和最大30 min雨强是影响流域产流输沙的主要降雨特征。降雨事件划分为4种类型:Ⅰ型(小雨量、小雨强)、Ⅱ型(大雨量、大雨强)、Ⅲ型(大雨量、小雨强)和Ⅳ型(小雨量、大雨强)。4种降雨类型下次洪水事件的产流能力和洪峰流量由大到小依次为Ⅱ型、Ⅳ型、Ⅲ型和Ⅰ型。频次最少的Ⅱ型降雨次洪水事件的输沙量最多,Ⅰ型、Ⅲ型和Ⅳ型降雨条件下次洪水事件输沙量的差异不显著,输沙量均较少。水土保持综合治理显著减少了流域径流量和输沙量,其中Ⅱ型降雨次洪水事件减水量和减沙量最多,Ⅰ型最少。     

山区局地气候的小网格研究方法

山区局地气侯除受宏观地形因子影响外，还要受复杂的小环境的影响。为了进一步分析山区局地气侯的差异，更好地对山区自然资源进行开发，应用小网格方法，引入地形因子，修定气候学方程，采用数学方法建立１ｋｍ热量、降水方程；对北京山区进行分析计算的结果表明，它较好地反映了地形对气候资源的影响，基本符合实际情况，月平均温度误差不超过０．６℃，年降水量绝对误差不超过４０ｍｍ，有一定的实用价值。     

枯草芽孢杆菌SO113分泌蛋白的抑菌作用及抗菌蛋白的分离纯化

枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)SO113对水稻白叶枯病菌（Xanthomonas oryzaepv.oryzae）有强烈的抑菌作用（表现出一透明抑菌圈）。培养液上清中加入60％饱和度的硫酸铵沉淀所得的蛋白粗提液对热稳定，对链霉蛋白酶E不敏感，对蛋白酶K部分敏感，对中国各稻区白叶枯病菌的7种致病型都有强烈的抑杀作用，蛋白粗提液100℃加热15min后脱盐，经DEAE0－Sepharose Fast Flow柱层析得3个未分开的抗菌活性峰，示吸附部分经CM－Sepharose Fast Flow柱层析，得到1个主活性峰，由于B.subtilis SO113的分泌蛋白对水稻白叶枯病菌表现出良好的广谱抗性以及丰富的抗菌活性峰，因此对其进一步的研究和设法隆编码抗菌蛋白的基因都具有重要意义。     

奥利亚罗非鱼促性腺激素释放激素cDNA的克隆及原核表达

促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)是下丘脑分泌产生的神经激素,对脊椎动物生殖的调控起重要作用。本研究通过RT-PCR方法从奥利亚罗非鱼丘脑中扩增出长约400 bp的目的序列GnRH,并将其克隆到T载体中,经酶切鉴定、序列测定分析后表明其与尼罗罗非鱼和乌颊海鲷具有较高的同源性,处于同一个进化分支上;而与日本青、金鱼、拟鲤、壁虎等的同源性较低。将此cDNA片段定向克隆到表达载体pMAL-c2x中构建重组表达质粒pMAL-GnRH,转化到大肠杆菌TB1中,0.3M IPTG诱导4 h后成功表达出与预期大小相符的约56 kD的融合蛋白。表明大肠杆菌表达系统可以成功地体外表达奥利亚罗非鱼GnRH,为进一步制备抗体了解其免疫调节作用奠定基础。     

宁南黄土丘陵区新型集流造林工程的规划设计与应用

为了探索在小流域土壤侵蚀治理基础上的雨水集蓄利用技术和模式,以半干旱黄土丘陵区国家重点治理小流域为研究对象,遵循坡地水量平衡原理和雨水叠加利用理论,提出了一种新型小流域坡地集雨蓄水工程整地造林技术—“88542”集流水平沟。研究这类工程的内涵、集流潜力及其断面参数。并对工程集蓄的径流通过典型工程应用,分析研究了集流水平沟对土壤水分的恢复调控和土壤的改良效果。结果表明,在半干旱黄土丘陵地区适宜修建“88542”集流水平沟,在0~100 cm土层,与自然坡面相比土壤平均含水量提高5.26%;粉砂粒和粘粒含量提高0.67%和1.53%;有机质提高80%;容重降低11.59%;土壤饱和持水量、田间持水量、毛管持水量、总孔隙度、透气度分别增加了0.63%、2.03%、1.92%、2.71%、5.29%,而且林木的生长量也大幅度提高。     

北京地区春大棚小型西瓜基质栽培优质高效栽培技术

介绍了北京地区春大棚小型西瓜基质栽培优质高效栽培技术,包括品种选择、整枝方式、定植密度、种植模式、水肥管理、病虫害防治等方面.     

固态发酵大豆制备的抗氧化肽的活性分析

综合评价用固态发酵法制备的大豆抗氧化肽的抗氧化活性.通过T-AOC方法测定总抗氧化能力、通过水杨酸法测定·OH、通过邻苯三酚法测定O2ˉ、通过卵磷脂法测定脂质体过氧化、通过POV值法测定抗油脂自氧化.大豆抗氧化肽的总抗氧化能力为50.07 U、对羟基自由基的清除率达到85.68%、抑制邻苯三酚自氧化能力达到23.61 U/mL、抑制脂质体过氧化率为34.58%、对油脂过氧化抑制抑制率为30%.用固态发酵法制备出的大豆抗氧化肽具有较强的还原能力、能清除羟基自由基、抑制邻苯三酚自氧化,并能够对脂质体过氧化和油脂过氧化具有一定的清除作用能力.