A prospective,randomized, double-blind,placebo-controlled multisite,parallel-group field study in dogs with osteoarthritis conducted in the United States of America evaluating bedinvetmab,a canine anti-nerve growth factor monoclonal antibody

ObjectiveBedinvetmab, a fully canine anti-nerve growth factor monoclonal antibody, was evaluated in dogs for control of osteoarthritis-related pain in a study conducted to support registration in the USA.Study designRandomized, double-blind, placebo-controlled, multicenter, parallel-group study.AnimalsGeneral practice client-owned dogs with osteoarthritis (n = 272).MethodsDogs were block randomized 1:1 to placebo (saline, n = 137) or bedinvetmab (n = 135; 0.5–1.0 mg kg^–1) administered subcutaneously, once monthly. The primary end point, day 28 Canine Brief Pain Inventory (CBPI) treatment success (TS), required pain severity score (PSS; 0–10) decrease ≥1 and pain interference score (PIS; 0–10) decrease ≥ 2. CBPI TS rates [and number needed to treat (NNT)], change in scores [and standardized effect size (ES)], change in quality of life (QoL) and bedinvetmab half-life were calculated.ResultsSignificant (p < 0.05) improvement with bedinvetmab over placebo occurred (days 28, 42, 56, 84) for CBPI TS. Of cases evaluable for day 28 CBPI TS (placebo, n = 131; bedinvetmab, n = 128), success rates were 36.6% and 47.4%, respectively (p = 0.0410) (NNT, 9.3; PSS and PIS ES, 0.3). CBPI TS increased after the second dose in both groups, plateaued for bedinvetmab at day 42 and decreased for placebo beginning day 84. Day 84 NNT (4.3), PSS (0.4) and PIS (0.5) showed continued improvement with monthly dosing. After the first dose, mean (± standard deviation) bedinvetmab half-life was 19.1 (8.3) days. Adverse events were similar between groups and not considered treatment-related. There was a significant effect of bedinvetmab versus placebo on all CBPI components (PIS, PSS, QoL).Conclusions and clinical relevanceThese results corroborated those previously reported and provide further support of safety and effectiveness of bedinvetmab (0.5–1.0 mg kg^–1) administered subcutaneously at monthly intervals to dogs for control of osteoarthritis-related pain.     

上海地区多种动物戊型肝炎血清学调查

在上海地区收集血液样品(猪、牛、山羊、马、鸡、鸭、鸽、犬和部分珍禽等)964份,应用双抗原夹心酶联免疫法(DS-ELISA)检测抗HEV抗体。结果表明,猪抗HEV抗体的阳性率为72.18%(301/417),其中母猪阳性率最高,为82.53%(222/269),育成猪阳性率为52.54%(62/118),保育猪阳性率为50.00%(15/30);22个猪场均检测到抗HEV抗体阳性猪,阳性率高于60%的猪场有16个,占阳性猪场的72.72%。在牛、山羊、马、鸡、鸭、鸽等血清中也检测到了抗HEV抗体,阳性率分别为6.00%,24.00%,16.00%,1.90%,12.77%和4.44%,明显低于猪群的阳性率。在宠物犬中检测到了抗体阳性犬,阳性率为17.82%(18/101),说明犬对HEV易感。珍禽中野鸭、火烈鸟对HEV也有一定的敏感性,阳性率分别为6.60%(1/15)和10%(1/10),在孔雀和鸵鸟的血清标本中未检测到HEV抗体。猪群中戊型肝炎病毒存在较普遍,其他与人类密切相关的多种动物也对HEV敏感。     

抗苯巴比妥单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其免疫学特性鉴定

苯巴比妥(PB)经化学修饰在其苯环上引入活性基团氨基,合成半抗原对氨基苯巴比妥(pAPB),用重氮化法将pAPB偶联于BSA,合成人工抗原BSA-pAPB,并用红外(IR)、紫外(UV)、SDS-PAGE鉴定;用BSA-pAPB免疫Balb/C小鼠,细胞融合技术建立抗PB的单克隆抗体mAb(PB mAb)杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备PB mAb,并鉴定其免疫学特性。结果表明,BSA-pAPB偶联成功,偶联率为1∶19;筛选出1B9、3C4、3F6、4E6共4株杂交瘤细胞,其中最好的4E6株间接ELISA效价细胞培养上清为1∶8.1×102,腹水为1∶6.4×105,同种型为IgG1/κ,亲和常数(Ka)为2.08×1010L/mol,对PB的半数抑制浓度(IC50)为11.35μg/L,与巴比妥的交叉反应率(CR%)为12.4%,与其他化合物无CR。本试验研制出高效价、敏感、特异的PB mAb,可用于PB残留检测的免疫学实验。     

分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

采用单克隆抗体制备技术,建立了分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株,液氮保存4年后复苏,细胞在HAT选择培养基中生长旺盛,分泌抗体稳定,分别命名为YNF1,YNF2,YNF3,YNF4,杂交瘤细胞染色体数介于96~115条。细胞培养上清和腹水的单抗间接ELISA效价分别为1∶80~1∶160和1∶5 000~1∶10 000。在间接ELISA和夹心ELISA检测中单抗与猪瘟病毒呈特异性反应,与正常的猪、兔肾组织提取液及其血清Ig无交叉。抗体蛋白属IgG类,亚类及轻链分别为IgG1/λ,IgG2a/κ,IgG2a/λ,IgG1/λ。结果表明,4株杂交瘤是分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体的细胞株,可长期传代无限分泌单抗,是进一步研究猪瘟病毒和开发敏感、特异、快速诊断猪瘟试剂盒和试纸探针的免疫学特异性试剂来源。     

基于单克隆抗体的南方菜豆花叶病毒血清学检测技术

为建立南方菜豆花叶病毒(southern bean mosaic virus,SBMV)的快速、简便、高通量检测技术,加强该病毒的口岸检验检疫,以提纯的SBMV粒子为免疫原免疫BALB/C小鼠,利用杂交瘤技术获得3株杂交瘤细胞株19C3、19H9和20G4,其分泌的SBMV腹水单抗效价均达到10-7,且3个单抗与感染SBMV大豆叶片组织粗提液有强烈的特异性免疫反应,而不与感染南方豇豆花叶病毒(southern cowpea mosaic virus,SCPMV)的豇豆、健康的大豆、毛豆、豌豆、蚕豆和菜豆叶片组织粗提液发生免疫反应。以制备的单抗为核心,建立了检测植物中SBMV的ACP-ELISA和dotELISA两种血清学方法。3个单抗中19H9单抗的检测灵敏度最高,以其建立的ACP-ELISA和dot-ELISA方法检测大豆病叶粗提液的灵敏度分别达到1∶163 840和1∶10 240稀释浓度。利用建立的dot-ELISA方法可从上海口岸截获的大豆种子中检测出SBMV,且该检测结果得到RT-PCR方法验证。表明制备的SBMV单抗及建立的SBMV血清学检测技术可有效用于我国SBMV的口岸检验检疫。     

抗体检测技术在基层畜牧业生产中的指导作用

本文主要根据作者自身工作经验,从抗体检测技术原理,基层常用的抗原抗体反应实验,以及抗体检测技术在指导畜牧业生产中的重要作用等方面进行阐述,说明了抗体检测技术在制定免疫程序、疾病诊断、疫苗评估及免疫效果评价等领域发挥着积极的作用。     

拟南芥乙烯应答基因HLS1的原核表达及多克隆抗体制备

【目的】制备乙烯应答基因HLS1多克隆抗体,在过表达植物中检测HLS1的积累,为深入研究HLS1响应乙烯信号通路的分子机制奠定基础。【方法】构建pET28a-HLS1c原核表达载体,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导获得重组蛋白HLS1c-His;镍柱亲和纯化重组蛋白后免疫家兔获得抗HLS1血清,利用抗原亲和纯化抗血清获得高纯度的HLS1多克隆抗体;用HLS1抗体和GFP抗体,检测原生质体瞬时转化体系中GFP-HLS1c融合蛋白的表达;用农杆菌蘸花法获得过表达GFP-HLS1g的转基因植物,用HLS1抗体和GFP抗体检测GFP-HLS1g融合蛋白的表达。【结果】成功构建了原核表达载体pET28a-HLS1c,并在大肠杆菌系统中诱导获得重组蛋白HLS1c-His,且多以包涵体形式存在。纯化的HLS1c-His多克隆抗体,能清晰检测到约80 ng原核表达的HLS1抗原。纯化的HLS1抗体不仅能检测到原生质体中瞬时表达的GFP-HLS1c融合蛋白,也能检测到过表达转基因植物株系中的GFP-HLS1g融合蛋白,并且与标签蛋白GFP对应抗体所检测到的特异性条带大小一致。【结论】成功制备了拟南芥HLS1蛋白多克隆抗体,为HLS1蛋白在植物发育中的功能研究奠定了基础。     

草鱼TAB1蛋白的原核重组表达及其抗体制备

为了制备草鱼重组TAB1蛋白(rCiTAB1)及其特异性抗体,首先以草鱼头肾组织c DNA为模板,PCR扩增Ci TAB1基因全长序列,并依次构建重组克隆质粒p MD19-T-Ci TAB1与重组表达质粒pET-32a-Ci TAB1。该重组表达质粒经0.5 mmol·L~(-1) IPTG,37℃诱导表达12 h后获得以包涵体形式表达的重组CiTAB1蛋白(rCiTAB1)。然后,采用3种不同方法对包涵体蛋白进行变性,发现与高浓度尿素直接变性法和洗涤后尿素变性法相比,洗涤后梯度尿素变性法处理后的蛋白纯度最好,经透析复性后得到浓度为2 mg·mL~(-1)的r Ci TAB1。最后,将rCiTAB1蛋白与白油佐剂及免疫增强剂混合,室温下混合1.5h乳化成免疫原,3次免疫新西兰大白兔制备兔抗CiTAB1抗体,经间接ELISA方法和免疫琼脂双向扩散试验测得免疫后第33天血清中特异性抗体的效价分别为1∶1 048 576和1∶16。Western blot检测到一条分子量约为72 kDa的特异性条带,表明该抗体能特异性识别r Ci TAB1蛋白。研究结果为后续深入研究CiTAB1蛋白功能提供了物质基础。     

狐传染性脑炎活疫苗抗体消长规律的研究

应用血清中和试验和血凝抑制试验对狐传染性脑炎活疫苗免疫狐进行抗体水平动态监测,结果表明,疫苗接种14 d抗体达到保护,21~30 d抗体水平达到高峰;免疫240 d抗体仍在保护值以上。对SN抗体和HI抗体进行动态分析表明,两者呈正相关,均可用于狐传染性脑炎活疫苗免疫效力监测。     

A型肉毒毒素单克隆抗体的制备及初步鉴定

制备了A型肉毒毒素(BoNT/A)单克隆抗体(mAb),并对其免疫学特性进行了初步鉴定.用BoNT/A重组抗原(BoNT/A Hc)免疫Balb/c小鼠后,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0融合,经3次亚克隆建立了3个稳定分泌抗BoNT/A抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2A8、4F7和2F2,3株抗体均属IgG1亚型,效价为10-4～10-5,3株单抗抗相同抗原表位,交叉反应结果表明,3株单抗与BoNT/A的类似物均无交叉反应,具有较高的特异性.