多型FMDV VP1表位嵌入型载体pMG-SLPMultiVP1的构建及其表达产物鉴定

构建出表达载体pMG-SLPMultiVP1,并对其进行双酶切鉴定及PCR鉴定。将阳性重组质粒转入到发酵乳杆菌中进行表达,并对表达产物进行SDS-PAGE、Western blot和IFAT鉴定。多型FMDV VP1表位嵌入的SLPMultiVP1融合基因成功克隆入穿梭质粒pMG36e中,其表达产物大小约为35ku,部分表达产物位于发酵乳杆菌表面。成功构建了一个乳杆菌嵌入型表达载体pMG-SLPMultiVP1,为以发酵乳杆菌为活菌载体的表位疫苗研究奠定了基础。     

影响棕色脂肪组织产热活性因素的研究进展

全球性肥胖流行问题愈发严峻,而脂肪组织本身可能是解决这个问题的关键。人和哺乳动物体内存在两种脂肪组织,发挥着截然相反的作用。与白色脂肪组织存储机体过剩的能量不同,棕色脂肪组织中存在独特的解偶联蛋白,能将脂肪酸氧化磷酸化,释放热能,增加能量消耗。因此,通过激活棕色脂肪组织产热,加速体内储存的脂质氧化磷酸化,成为了一种新的预防和治疗肥胖的手段。论文阐述影响棕色脂肪产热活性的因素以及相关机制,旨在为肥胖的治疗提供新的思路和方向。     

成都麻羊乳上皮黏蛋白MUC1的遗传多态性研究

采用SDS-PAGE研究成都麻羊乳上皮黏蛋白MUC1的遗传多态性,并以金堂黑山羊、乐至黑山羊、自贡黑山羊、藏山羊作对照进行比较分析。结果表明:成都麻羊与对照山羊乳MUC1的多态性丰富,成都麻羊有7种基因型、5个等位基因优势基因为C、D、E,金堂黑山羊7种基因型、6个等位基因优势基因为B、C、D,乐至黑山羊6种基因型、6个等位基因优势基因为B、C、D,自贡黑山羊5种基因型、5个等位基因优势基因为A、C、D,藏山羊3种基因型、3个等位基因优势基因为C、D。乳MUC1的基因型、等位基因的分布品种间有差异;根据乳MUC1等位基因频率对供试山羊品种进行聚类分析,成都麻羊与金堂黑山羊的遗传距离最小(D=0.2507)先聚为一类,再依次与乐至黑山羊(D=0.2831)、自贡黑山羊(D=0.3721)、藏山羊(D=0.4752)聚为一大类,结果较好的反映了成都麻羊与对照山羊品种间的亲缘关系。     

副溶血性弧菌PCR检测方法的建立

为了建立适于基层单位应用的针对副溶血性弧菌检测的特异PCR方法,检测副溶血性弧菌的基因序列.针对该菌的属特异性基因t1基因进行引物设计,扩增片段大小为449 bp.运用该PCR法可特异性的从副溶血性弧菌ATCC17802标准株中扩增出目的基因片段,与GenBank上发表的序列同源性为100%.而经常污染海产品的溶藻弧菌,嗜水气单胞茵标准株J-1,铜绿假单胞茵标准株ATCC27853结果均为阴性.该PCR法最低检出菌体DNA量为10-2ng以及最低检出菌数为5.7 × 103 CFU/mL.对临床上送检的35份样品进行菌体DNA PCR方法检测并同时与国标GB/T4789.7-2003中使用的检测方法进行比对,两种检测方法的结果完全符合,与国标中使用的检测方法相比可大大缩短鉴定时间.因此该PCR法能快速鉴定当前副溶血性弧菌流行群,有利于流行病学溯源等研究.     

IGF-1 receptor signaling pathways and effects of AMPK activation on IGF-1-induced progesterone secretion in hen granulosa cells

IGF-1 plays a key role in the proliferation and differentiation of granulosa cells. However, the molecular mechanism of IGF-1 action in avian granulosa cells during follicle maturation is unclear. Here, we first studied IGF-1 receptor (IGF-1R) expression, IGF-1-induced progesterone production and some IGF-1R signaling pathways in granulosa cells from different follicles. IGF-1R (mRNA and protein) was higher in fresh or cultured granulosa cells from the largest follicles (F1 or F2) than in those from smaller follicles (F3 or F4). In vitro, IGF-1 treatment (10(-8)M, 36h) increased progesterone secretion by four-fold in mixed F3 and F4 (F3/4) granulosa cells and by 1.5-fold in F1 granulosa cells. IGF-1 (10(-8)M, 30min)-induced increases in tyrosine phosphorylation of IGF-1R beta subunit and phosphorylation of ERK were higher in F1 than in F3/4 granulosa cells. Interestingly, IGF-1 stimulation (10(-8)M, 10min) decreased the level of AMPK Thr172 phosphorylation in F1 and F3/4 granulosa cells. We have recently showed that AMPK (AMP-activated protein kinase) is a protein kinase involved in the steroidogenesis in chicken granulosa cells. We then studied the effects of AMPK activation by AICAR (5-aminoimidazole-4-carboxamide ribonucleoside), an activator of AMPK, on IGF-1-induced progesterone secretion by F3/4 and F1 granulosa cells. AICAR treatment (1mM, 36h) increased IGF-1-induced progesterone secretion, StAR protein levels and decreased ERK phosphorylation in F1 granulosa cells. Opposite data were observed in F3/4 granulosa cells. Adenovirus-mediated expression of dominant negative AMPK totally reversed the effects of AICAR on IGF-1-induced progesterone secretion, StAR protein production and ERK phosphorylation in both F3/4 and F1 granulosa cells. Thus, a variation of energy metabolism through AMPK activation could modulate differently IGF-1-induced progesterone production in F1 and F3/4 granulosa cells.     

２，４-二叔丁基苯酚对啤酒花幼苗生长与光合特性的影响

前期对不同植龄啤酒花根系分泌物及根际土壤的化学物质进行了分离鉴定,结果发现有酚类物质的存在且２,４-二叔丁基苯酚含量较高,为了进一步证实啤酒花是否存在自毒作用,采用田间小区栽培试验,研究了不同用量［０（ＣＫ,Ａ０）,７．５（Ａ１）,１５．０（Ａ２）和２２．５ｍｍｏｌ／ｍ２（Ａ３）］２,４-二叔丁基苯酚处理对啤酒花幼苗生长及光合特性的影响。结果表明,２,４-二叔丁基苯酚用量Ａ１ 和Ａ２ 处理,啤酒花生长好,地上部、地下部、总生物量及日均光合速率均比对照高,且达到显著差异（犘＜０．０５）;２,４-二叔丁基苯酚用量Ａ３ 处理,啤酒花地上部、地下部和总生物量及光合特性均较对照降低,差异达到显著水平（犘＜０．０５）。啤酒花幼苗叶片光合速率日变化呈双峰型,最高峰出现在上午９：００左右,次高峰出现在中午１５：００左右,午间有明显的“午休“现象,与对照（Ａ０）相比,Ａ１、Ａ２、Ａ３ 三个处理的次高峰出现的时间均有推迟,且Ａ１ 和Ａ２ 处理的幼苗午休”现象不太明显,气孔因素是导致其“午休”的主要原因。     

FP1株番鸭源禽Ⅰ型副粘病毒抗原性分析

为明确FP1株番鸭源禽Ⅰ型副粘病毒强毒与鸡新城疫强毒标准株F48E9之间的抗原性差异,本研究通过交互血凝抑制试验、血清交叉中和试验及雏番鸭免疫攻毒保护试验比较了FP1株番鸭源禽I型副粘病毒强毒与鸡新城疫强毒标准株F48E9之间的抗原性.结果显示同源阳性血清对病毒的血凝抑制效价比异源阳性血清对病毒的血凝抑制效价高2.66～4个滴度;两者之间的抗原相关值R为0.35;对于5日龄经肌注途径免疫接种1羽份量La Sota弱毒疫苗14d后的雏番鸭,以FP1株番鸭源禽Ⅰ型副粘病毒强毒、鸡新城疫强毒标准株F48E9分别攻击后,其保护指数分别为54.5、92.9.以上结果表明,FP1株番鸭源禽Ⅰ型副粘病毒与鸡新城疫强毒标准株F48E9存在较明显的抗原性差异,为鸭副粘病毒病疫苗的研制和该病的防控提供了依据.     

青海省藏羊感染皮蝇蛆调查及其虫种鉴定

为了解青海省藏羊感染皮蝇蛆状况及感染种类,本研究在3个地区调查了476只藏羊,对2株感染藏羊皮蝇蛆和4株感染牦牛皮蝇蛆的线粒体CO1基因种属特异性序列进行比较研究。结果表明:14只羊感染了皮蝇蛆,感染率为2.9%,总瘤胞数为27个,平均感染强度为1.9个;并扩增其长度为688 bp的序列,克隆后测序,将其序列与GenBank中的牛皮蝇、纹皮蝇蛆和中华皮蝇蛆序列进行聚类分析,结果显示青海省感染藏羊的皮蝇蛆与感染牦牛的果洛株、民和和黄南株在线粒体CO1基因片段聚类分析进化树和同源性比较中,与牛皮蝇位于同一个进化树分支上,基因片段同源性大于99%,为牛皮蝇;感染牦牛的海晏株和贵南株在线粒体CO1基因片段聚类分析进化树和同源性比较中,与中华皮蝇位于同一个进化分支上,基因片段同源性大于99%,为中华皮蝇。几个皮蝇蛆分离株种内变异率小于1%,种间变异率大于8%。     

mRNA差异显示技术、PCR技术及其在动物营养研究中的运用

21世纪将是生命科学的世纪。当前,世界各国都将分子生物学纳入本国科技发展的重点。分子生物学技术的迅速发展为营养科学探索必需营养缺陷的分子基础提供了强有力的实验工具。本文旨在对mRNA差异显示技术、PCR技术等两种最常用的生物技术手段的原理、特点及其在动物营养研究中的应用作一综述。     

山羊Ets-1基因cDNA的克隆与序列分析

根据GenBank已收录的牛(Bos taurus)、人(Homo sapiens)和小鼠(Mus musculus)等物种Ets-1基因序列的同源保守区域,设计特异性引物,采用RT-PCR和RACE技术,分离并克隆了西农萨能奶山羊(Capra hircus)Ets-1基因的cDNA序列。该序列全长2 263 bp(GenBank登录号HQ589338),包括5’UTR 331 bp,CDS 1 326bp和3’UTR 606 bp,编码441个氨基酸组成的蛋白质。核苷酸序列分析发现,山羊编码序列与牛、猪、人、小鼠等的相应序列同源性分别为98%、94%、92%和90%,3’UTR相应序列为96%、83%、81%和77%,5’UTR相应序列为98%、85%、82%和71%。氨基酸序列分析发现,山羊与牛、猪、人和小鼠的Ets-1的相似性较高,均在95%以上。蛋白质结构分析发现,其蛋白质分子量为50 340.8 D,等电点为5.08,具有典型的螺旋-转角-螺旋结构域,不存在跨膜结构,并且整个序列不含信号肽。