拟南芥热激因子HSF1的表达与纯化

[目的]表达和纯化拟南芥热激因子HSF1。[方法]以构建的能表达热激因子HSF1的大肠杆菌Escherichia coli M15（pQE32／His6-HSF1,pREP4）为材料,用异丙基硫代-β—D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达HSF1,再通过镍亲和层析纯化表达的HSF1,通过变性的聚丙酰胺（SDS．PAGE）电泳分析表达蛋白和纯化蛋白。[结果]试验获得了表达的HSF1,并且进一步获得了纯化的HSF1。[结论]该研究为探讨拟南芥HSF1在基因组的结合位点提供了试验材料,为全面认识HSF1作用机理和生理功能奠定了基础。     

绵羊肌肉IGF-I.基因表达的发育性变化研究

生长激素（GH）在动物体内主要有两种作用方式：（1）GH与肝脏等靶器官上的GHR结合,产生胰岛素样生长因子（IGF）,随后IGF以内分泌方式进入血液,与胰岛素样生长因子结合蛋白（IGFBP）结合后到达靶器官,作用于胰岛素样生长因子受体（IGFR）,从而调节动物生长发育。②GH直接作用于靶器官GHR,通过旁分泌或自分泌IGF直接影响细胞的代谢,从而调节机体的生长发育。GH可作用于骨骼肌GHR,产生旁分泌或自分泌的IGF-I调节肌肉的生长发育,或直接影响细胞的代谢。笔者采用实时定量PCR法,以处于生长发育早期的雄性哈萨克羊和雄性新疆细毛羊为研究对象,检测了IGF-I基因在肌肉中表达情况。     

植原体免疫主导膜蛋白Imp基因在大肠杆菌中表达条件优化(英文)

[目的]为了提高植原体膜蛋白Imp基因在E.coliBL21(DE3)中的表达量,优化Imp基因的原核表达条件。[方法]通过设计正交试验,考察不同的培养条件对工程菌E.coliBL21(DE3)-pET-28a(+)-Imp的影响。在获得最佳培养条件的基础上考察不同诱导条件对Imp蛋白表达量的影响。利用SDS-PAGE和GeneTools凝胶分析软件分析融合蛋白Imp的表达量。[结果]表达条件优化结果表明,最佳培养条件为:温度37℃,pH7.0,装液量20%,振荡速度200r/min。最佳诱导条件为:温度37℃,起始OD600≈1.5,IPTG终浓度0.1mmol/L,诱导培养时间6h。[结论]在最佳条件下Imp表达量达到70.98mg/L,确定了Imp融合蛋白在大肠杆菌的优化表达条件。     

萝芙木异胡豆苷-β-D-葡萄糖苷酶(SGD)基因的克隆与分析

[目的]对萝芙木异胡豆苷-β-D-葡萄糖苷酶(SGD)基因进行克隆与分析。[方法]以萝芙木为材料,采用RACE技术,从萝芙木中克隆SGD的全长cDNA,并对其进行表达谱分析和相关生物信息学分析。[结果]萝芙木SGD基因cDNA全长1 856 bp,包含1 608 bp的开放阅读框,编码536个氨基酸,预测分子量为61 kDa,等电点pI为6.16;生物信息学分析显示,RvSGD与蛇根木SGD及长春花SGD的序列相似性分别高达90.1%和70.9%,RvSGD也具有SGD蛋白的3个保守氨基酸催化位点His-161、Glu-207和Glu-419;荧光定量PCR表明,RvSGD在树皮中表达量最高,其次是老叶、根、嫩叶和茎。[结论]RvSGD基因的克隆和功能分析有助于在分子水平上更好地了解这个基因在TIAs的生物合成中的作用,并为今后调控TIAs的生物合成提供了新的靶点。     

梅花 PmAP2基因的克隆及表达1）

为了解析梅花（Prunus mume Sieb．et Zucc．）花器官发育的分子调控机理,采用RT－PCR的方法从梅花‘三轮玉蝶’中克隆了APETALE2的同源基因PmAP2,并采用荧光定量PCR对PmAP 2的表达模式进行了分析。序列分析表明,PmAP2基因CDS区域全长1647 bp,编码548个氨基酸,含有两个保守的AP2结构域,属于AP2／ERF基因家族。多序列比对和系统进化结果显示,该基因与桃、苹果AP2基因相似性较高,分别为96％和82％。PmAP2在梅花营养器官、四轮花器官和果实中均有表达,花瓣中的表达量最高;台阁花型梅花花中PmAP2表达量最高,重瓣品种次之,单瓣品种表达量最低。 PmAP2的差异表达可能与梅花的花型进化有关。     

印记基因SNRPN、NDN和UBE3A在初生仔猪及胎盘中的表达谱分析

[目的]分析印记基因SNRPN、NDN和UBE3A在初生仔猪中的表达情况,从而探讨它们和猪生长发育的关系。[方法]采用荧光定量PCR方法,检测SNRPN、NDN、UBE3A基因在出生3 d仔猪的13种组织(心、肝、脾、肺、肾、肌肉、大脑、垂体、小肠、胃、膀胱、脂肪、下丘脑)及不同时期的胎盘中的表达水平。[结果]SNRPN、NDN、UBE3A基因在13种组织中都有表达,SNRPN和NDN基因在下丘脑中表达量极显著(P<0.01)高于其他被测组织,UBE3A基因在肺、小肠和下丘脑中的表达量显著(P<0.05)高于其他被测组织,SNRPN基因在下丘脑中的表达量极显著(P<0.01)高于NDN、UBE3A基因,在梅山猪和杜洛克猪不同时期胎盘中稳定表达。[结论]SNRPN、NDN和UBE3A基因都在下丘脑中高表达,对神经系统的生长发育有重要的影响;同时该研究为这3种基因在猪中的功能研究提供了基础。     

Study on the Signal Transduction Pathway of Plant Defense to Pathogens

植物对外来病原体侵害的免疫应答进化出相关的防御机制。形成复杂的抗病信号转导途径。针对不同类型的病原体植物通过水杨酸SA、茉莉酸,乙烯JA／ET及油菜素类脂BR等介导进行免疫应答,从而表现出对病原菌一定程度的抗性水平。笔者对上述3种抗病信号转导途径的研究进行介绍,以期为植物抗病信号转导的研究提供有益的启发。     

辣椒 CaTPS8 基因克隆与表达分析

海藻糖-6-磷酸合酶（Trehalose-6-phosphate synthase, TPS）在植物非生物胁迫响应中起着重要的调控作用。以辣椒品种‘强丰101’为材料,对 CaTPS8 基因进行克隆和表达分析。结果表明,该基因CDS的完整开放阅读框为2 553 bp,编码850个氨基酸。生物信息学分析发现,CaTPS8蛋白的分子质量为96 ku,理论等电点为5.65,不稳定系数为48.09,推测为不稳定蛋白。蛋白结构预测显示CaTPS8蛋白包含Glyco_transf_20和 GT20_TPS两个保守结构域,属于亲水性蛋白,没有跨膜结构和信号肽序列。二级、三级结构预测表明该蛋白的结构主要为α-螺旋和无规则卷曲。系统进化关系分析表明, CaTPS8蛋白与马铃薯和番茄的同源性最高,其相似度分别为87.78%和86.92%,与高粱的同源序列相似度最低,为64.76%。实时荧光定量PCR分析表明, CaTPS8 基因在辣椒花中表达量最高。同时, CaTPS8 基因的表达受到低温的诱导,在处理 3 h时相对表达量最高,约为对照的25倍。此外,IAA、ABA、SA、GA₃和MeJA处理能够抑制 CaTPS8 基因的表达。研究结果为进一步阐明 CaTPS8 基因响应辣椒非生物胁迫的分子机理奠定基础。     

新型短肽LD-1对黄瓜霜霉病的抑制作用及其对黄瓜的促生长研究

短肽LD-1是从牛心朴子草中新分离的具有抗菌活性的多肽.以黄瓜霜霉病菌为供试菌株,系统测定了短肽LD-1对黄瓜霜霉病的抑制作用及其对黄瓜的促生长作用.结果表明:短肽LD-1对黄瓜霜霉病菌孢子囊萌发具有较好的抑制效果,且对孢子囊芽管发育具有一定的致畸效果.短肽LD-1对黄瓜霜霉病菌孢于囊萌发的抑制中浓度为68.3165 mg/L,对黄瓜霜霉病菌的抑菌中浓度为100.6843 mg/L,表现出较好的防效.25 mg/L的短肽LD-1对黄瓜种子萌发、根系发育以及促生长活性较强,经短肽LD-1处理萌发后的黄瓜根毛明显较对照发达.     

氮肥用量和施用方式对“临Ｙ7287”产量品质及HMW－GS表达量的影响

摘要：为了给晋南地区的小麦高产优质栽培提供科学依据,以临Y7287为试材,在玉米秸秆连续还田基础上,于2009和2010年分别研究了施氮量和施用方式对其产量与品质的影响,结果表明,施氮量处理随施氮量递增,小麦产量呈先升高后降的趋势,以施N225kg/hm2时,产量最高。施氮处理小麦的湿面筋、沉降值、形成时间、稳定时间及评价值,随施氮量的增加,呈现先升高后降低,而籽粒蛋白质含量、HMW－GS表达量,随施氮量增加不断提高。不同施用方式处理,随底肥比例增加,小麦产量增加,氮肥全部底施产量最高;随追肥比例增加小麦籽粒蛋白质、湿面筋、沉降值、形成时间、稳定时间、评价值及HMW－GS表达量增加。考虑产量品质两因素,本试验中临Y7287在晋南地区可以选择施氮N225kg/hm2时,采用基肥：拔节肥7：3的施肥方式,实现高产和优质。关键词：小麦;氮肥;产量;品质;HMW－GS表达量