软刺裸鲤和齐口裂腹鱼肌肉和骨骼中的元素分析

软刺裸鲤(Gymnocypris doubula)和齐口裂腹鱼(Schizothorax prenanti)分别是生长在高海拔(4 500 m)低氧的青藏高原水体和低海拔(1 000 m)长江上游水体的两种裂腹鱼亚科鱼类。为探究不同海拔裂腹鱼体内微量元素的差异,采用微波消解电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定软刺裸鲤(GD)和齐口裂腹鱼(SP)肌肉、脊椎骨和头盖骨中Na、Mg、Al、K、Ca、Fe、Zn等常量元素和V、Cr、Mn、As、Se、Sr、Sb、Ba等微量元素含量,并对两种裂腹鱼的元素含量进行差异比较和分析。结果表明,GD和SP肌肉中仅有Se和Sb含量呈现显著性差异,仅有As含量在两种裂腹鱼的脊椎骨中存在显著差异。GD肌肉中极高含量的Se和Sb元素、以及GD脊椎骨中极高含量的As元素可能与高原低氧适应相关。该研究在国内首次使用微波消解法对两种不同海拔高度的裂腹鱼肌肉和骨骼中的常量元素和微量元素进行测定分析,有效探究了两种裂腹鱼体内元素的差异,为后续通过体内组织的元素分析来解析裂腹鱼适应低氧环境的生理机制提供依据。     

我国齐口裂腹鱼的研究现状

齐口裂腹鱼（Schizothorax prenanti）是我国特有的重要冷水性经济鱼类,主要分布于我国长江上游。随着长江上游干支流梯级电站开发和大量水利工程修建,其野生种群数量急剧减少。介绍了齐口裂腹鱼的生物学特性、肌肉营养学、生理生化、种群遗传多态性和人工养殖等,以期为齐口裂腹鱼进一步的研究及其资源保护与利用提供理论依据。     

齐口裂腹鱼肌肉营养成分的分析

对齐口裂腹鱼Schizothoraxprenanti小规格幼鱼 (体重 ( 1 9±0 2 ) g)、大规格幼鱼 (体重(72 4±7 3) g) 和成鱼 (体重 (371 8±20 5) g) 肌肉中的水分、蛋白质、脂肪含量及脂肪酸、氨基酸组成进行了分析, 结果表明: 齐口裂腹鱼肌肉中的蛋白质含量高达 16 72%, 脂肪含量却较低;多不饱和脂肪酸含量占脂肪酸总量的 19 88%, 必需氨基酸的含量占氨基酸总量的 47 93%, 谷氨酸的含量很高, 占氨基酸总量的 14 56%。     

齐口裂腹鱼无乳链球菌的分离鉴定及其感染的病理损伤

2012–2013年四川齐口裂腹鱼(Schizothorax prenanti)养殖场流行一种临床特征为突眼、体表出血和神经症状的传染病, 在肝、肾涂片检查中发现链状G⁺球菌。从自然发病齐口裂腹鱼分离到2株形态与涂片检查一致的G⁺球菌(DML120817, YZH130830), 其在脑心浸液培养基(BHI)平板上28℃培养48 h, 形成白色圆形、表面光滑、边缘整齐的针尖大小菌落。经人工感染实验证实分离菌株为该病的病原菌。根据分离菌株的形态学和生理生化检测结果初步判定其为无乳链球菌(Streptococcus agalactiae); 16S rRNA基因序列分析表明, 2分离株 (GenBank登录号分别为KF773744和KF761304) 与GenBank中无乳链球菌(S. agalactiae)16S rDNA序列同源性达96.5%以上。在以分离菌16S rDNA序列 (GenBank登录号分别为KF773744和KF761304) 及其GenBank中同源性较高的链球菌16S rDNA序列构建的系统发育树上, 分离菌与无乳链球菌聚为一族; 同时在基于无乳链球菌cfb基因进行的特异性PCR检测中, 分离菌均为阳性, 进而鉴定2株分离菌为无乳链球菌。2株无乳链球菌对强力霉素、阿莫西林、先锋霉素V、氧氟沙星和左氧氟沙星等均敏感, 但在新霉素与丁胺卡拉霉素上存在差异。病理学观察发现, 无乳链球菌感染齐口裂腹鱼对多组织器官都造成明显的病理损伤, 尤其是肝、肾、脑的损伤较为严重, 表现为明显的变性、坏死以及炎症细胞浸润, 且细菌侵入肝、肾、脾以及神经元细胞内, 导致线粒体、内质网等细胞器损伤。     

饲料中胆汁酸添加水平对齐口裂腹鱼幼鱼生长性能、形体指标及体成分的影响

本试验旨在探索饲料中胆汁酸添加水平对齐口裂腹鱼幼鱼生长性能、形体指标及体成分的影响。以360尾健康、平均体重为(12.74±0.14)g的齐口裂腹鱼幼鱼为试验对象,随机分为4组,每组3个重复,每个重复30尾。4组试验鱼分别投喂添加0(对照组)、75、150、300 mg/kg胆汁酸的试验饲料,养殖时间为70 d。结果表明:随着胆汁酸添加水平的增加,齐口裂腹鱼幼鱼的增重率(WGR)、特定生长率(SGR)、饲料蛋白质效率(PER)均呈先升高后趋于稳定的变化趋势,饲料系数(FCR)则呈先降低后趋于稳定的变化趋势。各胆汁酸添加组的WGR、SGR、PER均显著高于对照组(P0.05),而FCR则显著低于对照组(P0.05)。当胆汁酸添加水平为150 mg/kg时,WGR、SGR均达到最大值,分别为226.63%和1.69%/d;当胆汁酸添加水平为300 mg/kg时,PER达到最大值,为1.64%;FCR则在胆汁酸添加水平为75 mg/kg时有最小值,为1.56。通过二次回归分析可知,WGR、SGR、PER和FCR最佳时的胆汁酸添加水平分别为186.83、192.86、166.67和183.33 mg/kg。随着胆汁酸添加水平的增加,齐口裂腹鱼幼鱼的肥满度(CF)呈先升高后趋于稳定的变化趋势,脏体比(VSI)、肝体比(HSI)则呈先降低后趋于稳定的变化趋势。各胆汁酸添加组的CF显著高于对照组(P0.05),而VSI、HSI则显著低于对照组(P0.05)。随着胆汁酸添加水平的增加,齐口裂腹鱼全鱼及肌肉粗蛋白质含量呈先升高后趋于稳定的变化趋势,全鱼、肌肉及肝胰脏中粗脂肪含量则呈先降低后趋于稳定的变化趋势,但全鱼及肌肉中水分、粗灰分含量则无显著变化(P0.05)。由此得出,饲料中添加胆汁酸能有效地提高齐口裂腹鱼幼鱼的饲料利用率,促进其生长,改善其形体指标,减少其肌肉及肝脏中脂肪的沉积。综合考虑,齐口裂腹鱼饲料中胆汁酸适宜的添加水平为166.67~192.86mg/kg。     

大宁河齐口裂腹鱼人工繁育技术研究

为保护和开发利用大宁河的齐口裂腹鱼(Schizothorax prenanti Tchang)资源,从2005年开始,在大宁河中上游收集齐口裂腹鱼进行人工驯养,并于2009-2016年进行人工繁育试验。结果表明,在人工驯养条件下,亲鱼性腺可发育成熟,共催产雌鱼953尾,采卵731万粒,培育出规格鱼苗(17~26 mm)324万尾,规模化人工繁育的催产率、受精率、孵化率和鱼苗成活率分别为79.7%、83.3%、79.7%和67.2%。试验发现,齐口裂腹鱼性腺发育对低温期的适温范围较广,在11.1~13.5℃较高水温环境下,性腺发育不受影响;提高培育最低水温,可使亲鱼繁殖期提前;越冬期间是否需要处于停食状态,也不是影响亲鱼性腺发育的因素;齐口裂腹鱼通过长期驯养后能够适应人工环境条件而自然产卵繁殖。     

免疫增强剂对齐口裂腹鱼生长性能和免疫功能的影响

为探究饲料中添加免疫增强剂对齐口裂腹鱼(Schizothorax prenanti)生长性能及免疫功能的影响,在基础饲料中分别添加0.1%、0.2%和0.3%的枯草芽孢杆菌、酵母细胞壁多糖和酵母水解物,养殖初始体重(61.12±1.37) g的健康齐口裂腹鱼90 d。结果显示,相比对照组,枯草芽孢杆菌组和酵母细胞壁多糖实验组的齐口裂腹鱼增重率(WGR)和特定生长率(SGR)显著升高(P0.05),饵料系数(FCR)降低,且以酵母细胞壁多糖对提高齐口裂腹鱼生长性能效果最为明显。当添加剂量增加到0.3%时,酵母细胞壁多糖组增重率和特定生长率相比于其他两个梯度有显著性提高,而其他两个实验组差异不显著,酵母细胞水解物则能显著降低饵料系数;在免疫功能方面,3种免疫增强剂的3种浓度下,齐口裂腹鱼溶菌酶(LSZ)和超氧化物歧化酶(SOD)活性均显著高于对照组(P0.05),且以芽孢杆菌组效果最为显著,分别为(3.93±0.35)μg/mL和(153.34±1.50)μg/mg;而3个实验组碱性磷酸酶(ALP)活性与对照组相比差异不显著,且不同剂量组间不存在显著差异(P0.05)。当添加量为0.1%时,酵母细胞壁多糖组和酵母提取物组酸性磷酸酶(ACP)活性均显著低于对照组,当添加量为0.3%时,3个实验组酸性磷酸酶(ACP)活性均显著高于对照组(P0.05)。研究表明,酵母细胞壁多糖对促进齐口裂腹鱼生长效果最好,而枯草芽孢杆菌对提高鱼类的免疫功能最好。     

齐口裂腹鱼Hsp60 cDNA克隆及其在无乳链球菌感染中的mRNA表达

齐口裂腹鱼是我国特有的亚冷水性经济鱼类,也是长江上游增殖放流的重要品种。为探究齐口裂腹鱼热休克蛋白60(Schizothorax prenanti Heat shock protein 60, SpHsp60) cDNA基因序列的分子特征和在细菌感染中的响应情况。本研究利用RACE技术克隆获得了2277 bp的SpHsp60 cDNA序列,预测编码575个氨基酸,其与脊椎动物具有较高的保守性;齐口裂腹鱼的组织表达模式分析显示,SpHsp60在肝胰脏表达量最高,血液次之,而在皮肤、肌肉和肠道中表达量低;无乳链球菌感染过程中,血液、肝胰脏、中肾和脾脏的SpHsp60 mRNA表达量在感染后6 h发生显著性变化(P<0.05),提示组织中SpHsp60能快速响应感染;且肝胰脏和中肾在感染后6 h-72 h表达量变化均显著高于对照组,而脾脏则显著低于对照组(P<0.05)。研究表明SpHsp60可能通过快速响应参与齐口裂腹鱼对抗细菌感染的过程,研究为肝胰脏和中肾组织中Hsp60 mRNA表达量作为齐口裂腹鱼感染无乳链球菌的危险信号分子提供基础数据。     

神农架齐口裂腹鱼繁殖生物学特征与人工繁殖技术

2010—2013年,对神农架林区玉泉河、长坊河的齐口裂腹鱼(Schizothorax prenanti)的生物学进行了调查,并对其人工繁殖技术进行了多次尝试。对166尾野生齐口裂腹鱼样本的生物学研究表明:神农架齐口裂腹鱼在自然环境中生长缓慢;雌雄性比为1.79∶1;卵径在2.05~3.13 mm之间,平均值为(2.68±0.448)mm;Ⅳ期卵巢成熟系数4.90%~19.44%,平均(11.12±5.07)%;绝对繁殖力在1 316~11 070粒之间,平均(4 259±2886)粒,相对繁殖力为(12.83±5.67)粒/g。流水池塘培育齐口裂腹鱼,运用雌鱼尾柄粗糙程度判断雌鱼成熟度,选择成熟度好的雌雄亲鱼,用LHRH-A2和鲤脑垂体人工催产,有效催产剂量为LHRH-A2(30~40)μg/kg+鲤鱼脑垂体(2.5~3.0)mg/kg;单用LHRH-A2为60μg/kg。适时人工授精,受精卵在孵化箱内孵化。2010~2013年,共计催产18批次,结果为:催产率89.12%,受精率90.11%,孵化率88.32%。     

Glu细胞与5-HT细胞在两种裂腹鱼肠道的免疫组织化学研究

目的:研究齐口裂腹鱼和重口裂腹鱼肠道Glu和5-HT细胞的形态、位置与分布情况。方法:使用Glu和5-HT抗哺乳动物血清,应用免疫组织化学技术SABC法对齐口裂腹鱼和重口裂腹鱼肠道内分泌细胞进行了研究。结果:Glu细胞在齐口裂腹鱼肠道中以中肠分布最密集,前肠和后肠分布密度较低;重口裂腹鱼肠道中,前肠和中肠分布密度较高,后肠极低。5-HT细胞在齐口裂腹鱼肠道中的分布密度前肠最高,中肠次之,后肠最低;重口裂腹鱼则在前肠和后肠分布密度较高,中肠较低。Glu和5-HT细胞主要呈梭形和锥形。结论:Glu和5-HT细胞的分布和形态特点与两种裂腹鱼食性和肠道结构密切相关。