DNA分子标记技术

综述了不同类型的DNA分子标记技术，对各技术的优、缺点及其应用进行了详细的介绍，并对发展趋势进行了展望。     

用于PCR分析的水稻DNA简易提取法——CS法

以PCR技术为基础的DNA分子标记是迄今在作物转基因检测、标记辅助选择、农作物品种纯度鉴定等方面最具应用前景的分子标记技术，而快速、简易、低成本的DNA提取方法是其中的关键因素之一。本实验以水稻黄化苗为材料，用NaOH溶液抽提DNA，对其用于PCR技术的DNA标记的效果进行了分析。结果发现，用O．5M．NaOH对黄化苗进行直接处理，并用等量1M Tris—HCI进行稀释、中和，离心所得的上清液即可直接用于各种：PCR扩增和随后的DNA标记鉴别，包括转基因PCR片段检测、微卫星标记多态性分析(琼脂糖电泳法或毛细管电泳法)，这样提取的DNA可以在短期内保存，在PCR分析中其效果与用常规CTAB法提取的DNA相当。     

甜菜SRAP-PCR反应体系的优化

为了建立适宜甜菜的SRAP反应体系,以40个不同类型的甜菜品系为试验材料,研究了PCR反应体系的主要成分对SRAP扩增结果的影响。对SRAP反应体系中的DNA模板浓度、Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度以及dNTP浓度进行了探索,确立了适合甜菜的SRAP反应体系为:在20μL反应体系中,模板DNA为40ng,Taq DNA聚合酶1.0U,引物60ng,dNTP(2.5mmol/L)为1.6μL,扩增程序为94℃预变性3min,反应前5个循环在94℃1min,35℃1min,72℃1min的条件下运行;随后的35个循环复性温度提高到50℃,最后72℃延伸10min。并利用该反应体系对甜菜40个不同品系进行SRAP反应,用6%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,不同品系间DNA谱带多态性丰富,证实该体系稳定可靠,可以用于甜菜的分子标记研究。     

棉花耐盐相关序列扩增多态性(SRAP)分子标记筛选

利用相关序列扩增多态性(SRAP)和群体分离分析法(BSA)对棉花耐盐材料×敏盐材料组合的F2群体及26个耐、敏品种(系)进行分析和鉴定,筛选与棉花耐盐相关的分子标记。在88对正反引物组合中,筛选出在2个亲本间具有多态性的引物6对,经F2群体分析,发现1对引物能够在耐盐单株中扩增出350 bp的特异片段,而在敏盐单株中没有。品种鉴定显示,耐盐材料均能扩增出该片段,而敏盐材料没有该片段扩增。推测该片段是与棉花耐盐性紧密连锁的分子标记。     

41份黄椒种质资源表型及SRAP遗传多样性分析

【目的】对41份黄椒种质资源进行遗传多样性分析,为福建省筛选出抗性好、品质优的特色黄椒种质资源,也为后续优良黄椒品种选育的亲本选配提供参考。【方法】以41份黄椒种质为材料,对12个数量性状和10个描述性性状进行观测分析,并通过SRAP分子标记的扩增结果进行遗传多样性分析。基于表型测定数据和SRAP扩增结果进行聚类分析。【结果】12个数量性状的变异系数为14.20%~39.98%,平均为26.61%,其中,叶柄长、果长、单果重和单株果数的变异系数较大,均大于25.00%,说明这些性状存在丰富的变异,具有较好的遗传改良基础。10个描述性性状的多样性指数为0.1985~1.0791,平均为0.5061,以花青甙显色程度最高,以节间茸毛、生长势和植株形态的多样性指数较低。基于表型测定数据的聚类分析结果显示,可将41份黄椒种质材料分成四大类,第Ⅰ类群包括11份种质材料,第Ⅱ类群包括14份种质材料,第Ⅲ类群包括5份种质材料,第Ⅳ类群包括13份种质材料,整体来说,性状相似的种质资源聚为一类。利用14对SRAP引物组合共扩增出117条条带,其中有90条多态性条带,多态性比率达76.92%。基于SRAP分子标记的聚类分析结果显示,材料间相似系数变化范围在0.80~1.00之间,在遗传相似系数为0.85处,41份黄椒种质材料被分为六大类群,第Ⅰ和Ⅵ群组均仅含1份种质材料,第Ⅱ群组包括4份种质材料,第Ⅲ群组包括29份种质材料,第Ⅳ和Ⅴ群组均有3份种质材料,来源地相同的种质聚为一类。可见,基于SRAP分子标记的聚类结果比基于表型的聚类结果更倾向于亲缘关系的远近。【结论】黄椒种质资源具有丰富的遗传多样性。利用SRAP分子标记辅助黄椒新品种选育,筛选出亲缘关系较远的综合性状优良纯合材料,可有效解决辣椒育种中亲本选择效率低、育种进程慢等问题。     

油菜抗除草剂突变体的筛选及其鉴定

利用60Co-γ射线辐照的湘油15油菜种子,以Basta溶液为筛选压在油菜无性系中筛选出了抗除草剂突变体,随后通过打孔叶片抗性鉴定、除草剂喷洒鉴定等方法确定抗性。最后利用SRAP分子标记方法进行鉴定,从而为突变体的真实性提供了分子水平上的证据。     

利用SRAP标记分析花生属花生区组种质亲缘关系

利用54对SRAP引物分析花生属花生区组11个物种28份材料间的遗传变异,结果表明, 28份材料共扩增出327条多态性DNA带,平均每对引物扩增出5.95条多态性DNA带,扩增变幅为2～25条。聚类分析表明,28份花生材料间的遗传距离变幅为0.12～0.75,平均为0.42,A基因组物种A. duranensis与栽培种花生的亲缘关系最近,可能是栽培种花生的A基因组的供体。28份种质分为两大类,第一大类包含四倍体种质及A基因组的A. villosa和A. duranensis,第二大类包含B基因组、D基因组及其他A基因组。主成分分析结果与聚类分析结果相似,仅将第二大类中的B基因组种质A.batizocoi独立作为第三大类;第一和第二个主成分可以解释81%（57.5%和23.5%）的总变异。     

花生凝集素受体在兔子宫内的分布与激素调节

采用组织化学方法对花生凝集素(peanut aggutinin,PNA)受体在兔发情周期和早期妊娠子宫内的分布以及雌、孕激素对其表达的影响进行了研究.结果显示,PNA受体主要存在于兔子宫内膜腔上皮和腺上皮,其表达量随妊娠阶段的不同而发生变化,PNA受体在休情期、发情期及妊娠第1天的兔子宫内未见表达,在妊娠第2至第4天时表达量逐渐增加,且在妊娠第3至4天时表达量最高,此后,在妊娠第5至7天时表达量逐渐减少,妊娠第7天时,着床区子宫内PNA受体的表达量略高于非着床区.假孕兔子宫内PNA受体的表达与正常妊娠时相似.注射孕酮可促进卵巢切除后兔子宫内膜PNA受体的表达,而注射雌激素对其表达有明显抑制作用.结果表明,PNA受体在兔子宫内的分布与着床前胚胎与子宫内膜之间的黏附有关,PNA受体在兔子宫内的表达受母体分泌的孕酮和雌激素所调节.     

分子标记技术在番茄抗性育种中的应用

介绍了DNA分子标记的各种类型,RFLP、RAPD、SSR、AFLP和SNP标记是植物遗传作图最常用的,介绍了各种类型的使用范围以及优点和缺点。综述了近年来DNA分子标记技术在番茄抗性育种中的应用,包括耐冷性,耐盐性,抗病性,抗虫害等方面的应用,并就今后番茄分子育种主要研究方向进行了讨论。     

芝麻SRAP反应体系的建立与优化

以芝麻幼叶提取的DNA为试验材料,通过对影响SRAP扩增结果的重要反应因素dNTPs、Mg2 + 、Taq酶、随机引物及模板DNA进行优化,建立了芝麻扩增多态性高、稳定性强、带型清晰的SRAP最佳反应体系：dNTPs（10mmol／L）0.30μl,Mg2 +（25mmol／L）1.20μl,Taq酶1.00U,正反引物各50ng,DNA模板80ng,10×Buffer 1.5μl,总体积15μl,为SRAP标记技术在芝麻分子生物学研究方面的应用奠定了基础。