猪瘟病毒E2基因主要抗原区原核表达载体的构建及表达

用RT-PCR技术对猪瘟兔化弱毒C株、石门强毒株(Shimen)、近期地方流行的属于第1群毒株的新疆毒株(XJ)和第2群代表毒株甘肃临洮(LT)株E2基因的主要抗原区进行扩增，均得到约561bp的基因片段；经克隆测序及序列分析，该基因编码187个氨基酸残基，预计蛋白分子质量为21.7ku。将这4个基因分别克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中，经酶切、PCR扩增和测序分析确证其正确插入到表达载体中，阅读框是正确的，从而构建成重组表达载体。重组质粒转化至宿主菌BL21(DE3)中，用异丙基硫代-β-半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达，对表达的蛋白用SDSPAGE电泳、免疫印迹和薄层凝胶扫描分析。结果表明，E2基因的主要抗原区可以在大肠埃希氏菌中表达，表达的蛋白多以包涵体形式存在，表达产物的分子质量约为50．0ku，与理论推测的分子质量一致；薄层凝胶扫描分析表明。表达蛋白约占菌体蛋白总量的20．1％；免疫印迹结果证明，表达的E2蛋白可被猪瘟阳性血清所识别。     

秸秆饲料酶解处理技术应用研究

用正交试验法探讨了以玉米和小麦秸秆为原料进行纤维素酶解处理的工艺条件,正交试验结果表明:影响纤维素降解的因素主次顺序为:处理时间→原料→粗酶→环境pH。纤维素酶降解秸秆的最佳工艺条件是:在玉米秸秆细粉中使用绿色木霉8 m l,无需调整环境pH,处理16 h即可得到最佳酸性洗涤纤维降解率。     

酵母酶解物在断奶仔猪上的应用研究

酵母是人类应用量最大的一种微生物,其活性酵母因作为益生菌在畜禽动物上的应用已很广泛。而酵母菌体本身又含有丰富的蛋白质、糖分和B族维生素等,以及酶、辅酶、核糖核酸、甾醇和一些新陈代谢的中间产物,作为常规蛋白饲料原料在畜禽水产动物饲料中也应用比较广泛。而作为蛋白原料的酵母没有酶解破壁,其营养物质受到外层细胞壁的限制而使其应用效果达不到酵母应有的功效。酵母酶解物是采用特殊的工艺技术,经过酶解破壁,将其营养物质充分释放,各种营养物质得到充分释放而使酵母的作用发挥到极致。酵母酶解物作为功能性添加剂在断奶仔猪上的应用效果试验表明,其具有提高断奶仔猪采食量、补充应激情况下核酸的合成不足、修复因应激反应导致的肠道粘膜损伤、提高仔猪免疫力和促进仔猪日增重等作用。     

夹心酶联免疫吸附试验检测包虫病循环抗原

建立了检测包虫病循环抗原的夹心酶联免疫吸附试验。对１３０份阳性血清（猪６５,羊６５）作了检测,总阳性率为７９．２％,抗原最小检出量为５０μｇ／Ｌ。     

泉州市2010～2012猪繁殖与呼吸综合征的血清学调查

为初步了解该病在泉州市的流行情况,以科学有效地防控猪繁殖于呼吸综合征,本研究采用酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）方法对2010年-2012年泉州市洛江、泉港、台商区等9个县（市、区）来源的199个养殖场（户）的共2116分血清进行PRRSV抗体检测,结果1588份血清样品抗体阳性,阳性率为75.05%,其中免疫猪和非免疫猪血清抗体阳性率分别为81.93%和15.51%,规模场和散养户的阳性率分别为80.51%和47.11%。     

ELISA操作要求及质量控制

酶联免疫吸附试验（ELISA）是医学检验的免疫学检验方法之一,已广泛应用于对病原微生物的免疫学检查试验中。用ELISA法检测是目前最常用的实验室检验方法之一。与任何实验室检查方法一样,ELISA存在少量的假性结果（假阳性、假阴性）,对临床诊断和治疗会有一定影响。目前,ELISA已经普遍使用洗板机、全自动酶标分析仪,使试验数据的准确性和真实性都有明显提高。但试验设备的自动化并不代表试验数据100％可靠,还要求试验人员具备扎实的专业知识和熟练的试验操作技术,并且要对实验室的内外环境进行适时监控,从试验软件、仪器设备、操作程序、人员素质及环境监控等方面确保试验结果的准确性和可靠性。     

应用SPA—ELISA法检测猪血清弓形体抗体的报告

1979年 Madore 开始把葡萄球菌 A 蛋白用于酶联免疫吸附试验(SPA—ELISA),现已广泛应用于血清学诊断,由于 SPA 具有与人及多种哺乳动物血清 IgG 的 Fc 段非特异相结合的特性,在 ELISA 中代替第二抗体,但它与多种哺乳动物各种属的亲和力不同,其中与猪的 IgG 亲和力最强,我们应用 SPA-ELISA 检测猪血清弓形体抗体,并与间接血凝法(IHA)进行比较结果满意,现报道如下。     

鸭坦布苏病毒抗体间接ELISA检测方法的建立和应用

为建立特异性和敏感性较高的鸭坦布苏病毒(DTMUV)抗体检测方法,采用原核表达系统对DTMUV E蛋白的DⅢ结构域进行了双串联融合表达,SDS-PAGE电泳结果显示目的蛋白大小约25 Ku。Western blot结果显示,经亲和层析纯化的重组蛋白能与DTMUV阳性血清发生特异性反应。以纯化的重组DⅢ蛋白作为包被抗原,初步建立了检测DTMUV血清抗体的间接ELISA方法。采用梯度稀释法对ELISA各种反应条件进行优化,确定最适工作条件。重组抗原最适包被浓度为5μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶100,兔抗鸭酶标抗体最适稀释度为1∶1000;抗体临界值S/P≥0.336判定为阳性,S/P≤0.287判定为阴性,介于两者之间为可疑。该方法检测禽流感病毒、鸭源新城疫、鸭甲肝病毒、鸭圆环病毒、鸭细小病毒、经典呼肠孤病毒及新型鸭呼肠孤病毒等血清均为阴性,4个批次批内与批间重复试验的OD值变异系数分别为6.21%~7.27%和3.4%~7.2%,显示该法具有很好的特异性、稳定性和重复性。用建立的间接ELISA与中和试验分别对108份疑似鸭坦布苏病血清样品进行检测,两种方法的阳性符合率为83.3%。     

植物香豆素生物合成途径及关键酶基因的研究现状

香豆素是广泛存在于自然界的有机杂环化合物,具有抗感染等多种生物活性,是我国许多中草药材中的有效成分,如独活等多种常用中草药含有香豆素衍生物,香豆素类化合物是具有显著生物活性的物质,具有作用机制特殊等特点。香豆素对植物生长发育具有重要作用,许多香豆素化合物在植物中含量较低,对天然香豆素类化合物化学合成成为研究热点。综述香豆素合成途径及关键酶基因研究进展,分析总结香豆素研究问题,展望未来研究方向。