RT-PCR检测李坏死环斑病毒的研究

为了从植物组织中快速检测李坏死环斑病毒９ＰＮＲＳＶ）,根据该病毒ＲＮＡ３序列设计引物,对感病和健康组织总ＲＮＡ进行ＲＴ－ＰＣＲ,结果从感病组织中扩增出了大约４５０ｂｐ的目的片段,而健康组织中无此扩增带。将此ＰＣＲ产物连接到ｐＧＥＭ－Ｔ－ｅａｓｙ载体也能转化大肠杆菌ＤＨ５５α菌株,得到了含有目的片段的重组子。并采用双脱氧终止法进行序列配美国报道的李坏死环斑病毒ＲＮＡ３序列对应部分核苷酸基本一致,这表     

新疆渭干河——库车河三角洲绿洲天然植被生态需水研究

新疆渭干河—库车河三角洲绿洲深居内陆,属于典型的大陆性干旱气候区,水资源缺乏,生态与环境脆弱,平原非灌区天然植被主要依靠汲取浅层地下水来满足其对水分的需求。本文利用遥感技术、水文地质调查等手段查明了研究区内的浅层地下水埋深和天然植被分布面积,应用GIS技术划定计算单元,利用典型地下水均衡试验场潜水蒸发和蒸腾试验成果确定各计算单元的潜水蒸发系数和植被系数,进而计算出现状条件下研究区域天然植被生态需水量为5.37×108m3,其中林灌地生态需水量为0.95×108m3,占17.71%,草地生态需水量为4.42×108m3,占82.29%。     

Preliminary investigation and detection based on loop-mediated isothermal amplification (LAMP) of phytoplasmas associated with diseases in B. napus L.

In the last decade, some disease occurred on our experimental farms that had caused serious losses. They were not caused by fungi, bacteria or viruses. By loop-mediated isothermal amplification (LAMP) technique, the detection results pointed to the possible pathogen as phytoplasma. The investigation results implied that phytoplasmas could cause more than 13 kinds of symptoms in almost all parts of plants in B. napus L., including witches’ broom, multi-stems, aggregate main inflorescences, and flat stems. The incidences of these phytoplasma-associated diseases in our experimental farms rose from 1.61% in 2010 to 6.00% in 2021. Some phytoplasma infected plants died without any growing points. These studies would be helpful for detecting phytoplasmas diseases, selecting disease resistant germplasm and improving varieties with disease resistances in B. napus L.     

黄花菜叶斑病菌鉴定、生物学特性分析、防治药剂筛选及LAMP检测体系的建立

为明确浙江省黄花菜叶斑病病原菌的种类，探究其对杀菌剂的敏感性并建立快捷检测方法，采用组织分离法获得黄花菜叶斑病菌，通过形态学特征观察和分子生物学技术对病原菌进行鉴定，测定其致病力及生物学特性，分析6种杀菌剂对病原菌的生长抑制效果，并以ITS和EF-1α序列为靶标设计特异性引物建立环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）检测方法。结果表明，根据形态学特征以及ITS与EF-1α序列分析结果确定黄花菜叶斑病菌为杏黄镰孢Fusarium armeniacum。该病原菌菌丝生长适宜温度为20~30℃，pH 7时菌丝生长最快，以葡萄糖为碳源、硝酸钠为氮源时利用率最高。96%己唑醇对菌丝生长的抑制作用最强，EC₅₀为0.119 μg/mL。本研究所建立的LAMP体系在60℃条件下反应60 min，琼脂糖凝胶电泳和SYBR Green I染料染色均可判断检测结果。该方法可特异性地检测出杏黄镰孢，最低检测灵敏度为 100 pg/μL，是常规PCR检测灵敏度的10倍。表明本研究所建立的LAMP检测体系可快速检测出人工接种和实际发病黄花菜叶片中的病原菌。     

基于cpsA基因的海豚链球菌LAMP检测方法的建立

基于荚膜多糖cpsA基因设计引物,建立海豚链球菌可视化环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,以快速检测鱼类养殖中的海豚链球菌。结果表明,LAMP最佳反应条件为65 ℃反应20 min,镁离子浓度为1.2 mmol/L、dNTPs浓度为0.64 mmol/L、内外引物比例为 16∶1。特异性检测结果表明:该方法能特异性检出海豚链球菌,对无乳链球菌和其他14种菌检测结果均呈阴性;灵敏度检测结果表明,该LAMP方法灵敏度为2.12×10^-5 ng/μL,比PCR检测方法灵敏度高100倍;适用性分析结果表明,该LAMP方法在模板中存在鱼类基因组干扰下也能正确完成检测。研究中建立的LAMP检测方法为海豚链球菌的检测提供一种可视化、灵敏、成本低的快速检测技术。