全文获取类型
收费全文 | 537篇 |
免费 | 45篇 |
国内免费 | 34篇 |
专业分类
林业 | 12篇 |
农学 | 18篇 |
基础科学 | 5篇 |
42篇 | |
综合类 | 199篇 |
农作物 | 28篇 |
水产渔业 | 55篇 |
畜牧兽医 | 171篇 |
园艺 | 11篇 |
植物保护 | 75篇 |
出版年
2023年 | 6篇 |
2022年 | 10篇 |
2021年 | 8篇 |
2020年 | 15篇 |
2019年 | 22篇 |
2018年 | 18篇 |
2017年 | 23篇 |
2016年 | 23篇 |
2015年 | 33篇 |
2014年 | 40篇 |
2013年 | 47篇 |
2012年 | 63篇 |
2011年 | 42篇 |
2010年 | 43篇 |
2009年 | 25篇 |
2008年 | 12篇 |
2007年 | 11篇 |
2006年 | 8篇 |
2005年 | 8篇 |
2004年 | 11篇 |
2003年 | 14篇 |
2002年 | 17篇 |
2001年 | 16篇 |
2000年 | 11篇 |
1999年 | 13篇 |
1998年 | 5篇 |
1997年 | 5篇 |
1996年 | 4篇 |
1995年 | 1篇 |
1993年 | 18篇 |
1992年 | 18篇 |
1991年 | 9篇 |
1990年 | 8篇 |
1989年 | 4篇 |
1988年 | 1篇 |
1986年 | 1篇 |
1984年 | 2篇 |
1983年 | 1篇 |
排序方式: 共有616条查询结果,搜索用时 312 毫秒
601.
传染性法氏囊病病毒VP2基因的克隆和鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
以鸡胚成纤维细胞培养IBDV弱毒疫苗株D78,经蔗糖密度梯度离心纯化,电镜下见典型IBDV粒子。用SDS-蛋白酶K法提取病毒基因组,低熔点胶回收,琼脂糖凝胶电泳,可见IBDV典型双节段基因组。根据已发表的IBDV基因组序列,设计并合成了1对特异扩增IBDVVP2基因的引物。以IBDV基因组为模板,利用RT-PCR技术扩增出了1.5kb的cDNA产物,将PCR产物适当处理后与经SmaⅠ酶切的pUC19质粒平端连接,转化大肠杆菌DH5α,在含Amp、Χ-gal和IPTG的琼脂平板上培养,产生大量白色菌落。挑取白色菌落,经质粒大小比较分析初步筛选到一重组质粒。以重组质粒DNA为模板作PCR检测和部分酶切分析证实,该质粒为含D78IBDVVP2基因的重组pUC19 相似文献
602.
603.
采用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立了一种快速、灵敏、高度特异的副猪嗜血杆菌(Hps)检测方法。针对Hps16S rRNA基因保守区域设计6条引物,在Bst大片段聚合酶的作用下,对模板DNA进行梯状等温扩增,并且优化LAMP的反应体系,检验其灵敏性与特异性。结果表明:该方法对Hps的最小检测限为0.2pg/μL,灵敏性高于常规PCR方法103倍;完成反应仅需65min。该方法灵敏度高、特异性好,能够作为Hps的快速诊断方法,对于基层和实验室应用均具有良好前景。 相似文献
604.
猪繁殖—呼吸道综合征病毒(PRRSV)CH—1a株基因型鉴定 总被引:25,自引:4,他引:25
根据猪繁殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)美洲型毒株和欧洲型毒株的基因组序列设计合成了2对引物,即1008PS/1009PR和1010PLS/1011PLR。我国分离的CH-1a株用这2对引物均能扩增出与预期大小相符的RT-PCR产物,分别与美洲型代表株(VR-2332)的RT-PCR产物大小相当。特异性试验表明,这2对引物均不能扩增其他常见的繁殖障碍相关病毒的RNA或DNA以及未感染的MARC-145细胞RNA。间接免疫荧光试验也证明,CH-1a株与PRRSV核衣壳蛋白特异性单克隆抗体以及美洲型毒株抗血清均呈阳性反应。因此初步证实CH-1a株为美洲型PRRSV。 相似文献
605.
非洲猪瘟病毒环介导等温扩增快速检测方法的建立 总被引:6,自引:1,他引:6
本试验利用环介导等温扩增技术(LAMP)建立了一种快速高效检测非洲猪瘟病毒的方法。整个反应在水浴锅中恒温进行,不需要其他昂贵仪器,30 min即可得到阳性结果,灵敏度是OIE标准PCR方法的100倍,并且与其他常见猪DNA病毒无交叉反应。该方法非常适合在野外现场或缺乏试验条件的边远地区检测非洲猪瘟病毒。 相似文献
606.
607.
新城疫病毒昌黎株与国外毒株HN蛋白基因核苷酸及氨基酸差异性分析 总被引:1,自引:1,他引:1
参考国外发表的新城疫病毒 ( NDV)的 HN基因序列设计了 1对特异性引物 ,应用 RT-PCR对 NDV昌黎株 (野毒 )的 HN基因进行了扩增 ,扩增产物克隆后测序。扩增出的 HN基因核苷酸长度为 1 74 2 bp,编码 571个氨基酸 ,序列中有 6个糖基化位点 ,1 3个半胱氨酸残基 ,与国外发表的强毒株序列相符。核苷酸同源性在 88.5%~ 92 .9%,推导的氨基酸序列同源性在 90 .0 %~ 94 .2 %之间。 相似文献
608.
从疑似猪瘟病料中检出牛病毒性腹泻病毒 总被引:22,自引:1,他引:22
根据牛病毒性腹泻病毒(BVDV)NADL株和猪瘟病毒(HCV)Alfort株的核苷酸序列,设计合成了1对BVDV引物和3对HCV引物。以从吉林、长春、哲盟3个地区经临床及病理学诊断为猪瘟的病料中提取的RNA为模板,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR),分别以BVDV和HCV引物进行扩增。结果,用BVDV引物从哲盟地区的疑似猪瘟病料中扩增出大小约400bp的片段,而用3对HCV引物在不同的条件下均未从该病料中扩增出相应大小的HCV基因片段。此外,用HCV的PE0/PE4引物从吉林、长春的病料中扩增出了HCV的基因片段,但用BVDV引物从这两个地区的病料中均未扩增出BVDV的基因片段。从哲盟疑似猪瘟病料中扩增出的片段经克隆、序列测定及计算机分析证实,该片段的核苷酸序列和氨基酸序列与BVDV的同源性明显高于与HCV的同源性。将哲盟病料接种于MDBK传代细胞,出现典型而规律的BVDV样细胞病变。由此证明,从哲盟疑似猪瘟病料中检测出的是BVDV而不是HCV 相似文献
609.
为建立一种快速、灵敏的检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,本研究针对PEDV的NP基因设计LAMP引物,对反应体系优化并进行特异性及敏感性等试验.结果表明,该方法在65℃下恒温扩增60 min,经SYBR Green Ⅰ染色后仅肉眼观察即可判定结果.该方法特异性好,与传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪瘟病毒及大肠杆菌等无交叉反应,对重组质粒最低检测限度为16拷贝/μL,灵敏度高于普通PCR.该LAMP检测方法特异性强,灵敏度高,操作方便,适于临床检测PEDV. 相似文献
610.
实时荧光RT-PCR一步法检测番茄环斑病毒 总被引:16,自引:1,他引:16
根据番茄环斑病毒(ToRSV)各株系RNA1聚合酶基因的保守序列,设计并合成1对引物和1条TaqMan荧光探针,建立了对ToRSV的实时荧光RT-PCR检测方法。该方法利用TaqMan荧光探针实时监测目的基因的扩增,实现RT-PCR扩增与探针检测同时进行,不需PCR后处理,消除了PCR产物的污染,不需电泳和EB染色,减少了检测步骤,节省了时间。这个方法具有"灵敏、准确、简便、快速"的特点适合于种传病害的快速诊断和口岸检验检疫运用。 相似文献