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中国美利奴羊(新疆型)皮肤组织GAPDH基因实时荧光定量PCR方法的建立 总被引:1,自引:1,他引:0
【目的】建立GAPDH内参基因实时荧光定量PCR方法,为进一步研究中国美利奴羊(新疆型)相关基因的定量表达奠定基础。【方法】采用中国美利奴羊(新疆型)皮肤组织为试材,根据Genebank中绵羊GAPDH基因序列,设计并合成一对引物,建立基于SYBR Green I染料技术的Real-Time PCR检测体系,绘制出标准曲线并对其熔解曲线分析。【结果】以cDNA为模板建立的标准曲线循环阈值(Ct)与标准cDNA模板在一定浓度范围内呈良好的线性关系,GAPDH基因标准曲线中模板拷贝数(X)与Ct值的关系为Ct=一3.679 51g/X+35.648,相关系数R=0.999 8;试验重复性好,批内和批间变异系数(CV%)分别为0.22%~3.45%和1.30%~4.89%。【结论】所建立的方法具有快速、线性范围广、重复性强等特点,GAPDH可作为内参基因用于绵羊相关基因的定量表达研究。 相似文献
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[目的]建立一种应用C18键合磁珠固相萃取-液质联用检测蜂王浆中磺胺二甲嘧啶残留的方法。[方法]MCX固相萃取小柱联合C18磁珠对蜂王浆进行前处理,用HPLC-串联质谱仪对净化后样本进行检测。[结果]该方法的线性范围是5~80μg/kg,相关系数0.993 1。添加水平为5、10、20μg/kg时各种化合物的平均回收率范围为93%~104%,RSD值均不大于11.3%。[结论]该方法简单、快速,结合自动化设备,可实现蜂王浆样品中磺胺二甲嘧啶测定前处理的自动化。 相似文献
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应用环介导等温扩增技术(LAMP)对猪支原体肺炎进行诊断应用研究,对来自黑龙江不同地区的患猪呼吸道疾病的肺脏病料64份进行检测,54份诊断为阳性,阳性率84.3%。健康猪鼻拭子共176份,经LAMP检测,157份为阳性,阳性率为89.2%。其中健康猪拭子带菌率较高,结果表明,LAMP技术可应用于猪支原体肺炎的临床诊断。 相似文献
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从2009—2011年云南省国民经济和社会发展统计公报和其他资料看,虽然3年连旱对于马铃薯生产有影响,但还有一定程度的发展,但该种旱情有可能常态化,而且云南省水利设施的储水量占降雨量的比例明显偏低,因此对云南省干旱不能掉以轻心。建议加强水利建设、加大抗旱作物马铃薯等的发展,除应对可能会加重的干旱外,也充分地运用云南省的光热条件。 相似文献
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de Waal T 《Veterinary parasitology》2012,189(1):65-74
Microscopy still remains the gold standard procedure for the diagnosis of many protozoan infections in animals, but the specific identification requires skilled and experienced personnel. Immunoassays, detecting antibodies or specific protozoan antigens, have been developed but often lack sensitivity and specificity due to close relationship between many protozoa. Recent research has focussed almost exclusively on molecular based techniques for the identification and quantification of parasite DNA in samples. Opinion differ on most appropriate targets to use and there are very few diagnostic kits available making comparison between laboratories difficult. Future research needs to focus on robust, cheap field diagnostic assays. 相似文献
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Rapid detection of potato late blight using a loop-mediated isothermal amplification assay
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KONG Liang WANG Hui-bin WANG Shuai-shuai XU Ping-ping ZHANG Ruo-fang DONG Suo-meng ZHENG Xiao-bo 《农业科学学报》2020,19(5):1274-1282
Potato late blight caused by Phytophthora infestans is one of the most destructive plant diseases that threaten global food security. Early and effective diagnosis of P. infestans is required before disease management decisions are made. Here, we developed a quick protocol to detect P. infestans based on a loop-mediated isothermal amplification(LAMP) assay. The P. infestans specific multiple copy DNA sequences(PiSMC), a transposon-like element, provides an ideal target for molecular detection of this pathogen. We designed highly specific and sensitive primers allowing effective LAMP detection of the pathogen at 64℃ in 70 min. In the validation assay, all 15 P. infestans isolates collected from China, Europe and South America could be positively detected, but results of the other 9 Phytophthora species infecting different plants, fungal and bacterial plant pathogens tested were negative. The detection limit of this assay is 1 pg P. infestans DNA. Moreover, the LAMP-PiSMC assay is able to detect P. infestans from infected leaves, tubers and soil. Taken together, this study reports the development of a specific and sensitive LAMP-PiSMC assay for early diagnosis of potato late blight. 相似文献