Development of a multiplex loop-mediated isothermal amplification assay to detect shiga toxin-producing Escherichia coli in cattle

A multiplex loop-mediated isothermal amplification (mLAMP) assay was developed for simultaneous detection of the stx1 and stx2 genes and applied for detection of shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) in cattle farm samples. Two target genes were distinguished based on T_m values of 85.03 ± 0.54℃ for stx1 and 87.47 ± 0.35℃ for stx2. The mLAMP assay was specific (100% inclusivity and exclusivity), sensitive (with a detection limit as low as 10 fg/µL), and quantifiable (R² = 0.9313). The efficacy and sensitivity were measured to evaluate applicability of the mLAMP assay to cattle farm samples. A total of 12 (12/253; 4.7%) and 17 (17/253; 6.7%) STEC O157, and 11 (11/236; 4.7%) non-O157 STEC strains were isolated from cattle farm samples by conventional selective culture, immunomagnetic separation, and PCR-based culture methods, respectively. The coinciding multiplex PCR and mLAMP results for the types of shiga toxin revealed the value of the mLAMP assay in terms of accuracy and rapidity for characterizing shiga toxin genes. Furthermore, the high detection rate of specific genes from enrichment broth samples indicates the potential utility of this assay as a screening method for detecting STEC in cattle farm samples.     

中华绒螯蟹副性征的研究

在解剖、测量性成熟和未成熟中华绒螯蟹外部形态和性腺之基础上,试用“双百分率法”和“差异显著性检测法”对中华绒螯蟹的副性征进行了研究。结果表明,性成熟后的雌、雄中华绒螯蟹均具有较明显的副性征。     

用逆转录多聚酶链式反应从凡纳对虾中检出传染性皮下组织和造血器官坏死病毒

传染性皮下组织和造血器官坏死病毒 (ＩＨＨＮＶ) ,是一种细小病毒 ,它能感染所有起源于中胚层和外胚层的对虾组织细胞[1] 。在许多养殖对虾的国家都有ＩＨＨＮＶ ,特别是中美洲国家和地区[2 ] 的对虾养殖业深受其害。随着各国间对虾贸易的急剧增长 ,ＩＨＨＮＶ地理分布范围日益广泛 ,迄今为止 ,已扩散到中国台湾、新加坡、马来西亚、泰国、印度尼西亚、澳大利亚、菲律宾、厄瓜多尔、秘鲁等国家和地区[2 -4] 。红额角对虾 (Ｐｅｎａｅｕｓｓｔｙｌｉｒｏｓｔｒｉｓ)、斑节对虾 (Ｐ .ｍｏｎｏｄｏｎ)、短沟对虾 (Ｐ .ｓｅｍｉｓｕｌｃａｔｕ…     

应用RT-PCR方法从进境南美白对虾亲虾中检出桃拉综合征病毒(Taura syndrome virus)

应用PCR和RT—PCR技术，对一批进境的南美白对虾亲虾进行了多种病毒性病原的检疫。结果检出桃拉综合征病毒。临床观察也表明，该批亲虾体表散布大量黑色病灶，为TSV感染引起的TS典型病变。     

IBDV野毒株主要结构蛋白基因RT─PCR方法的建立

借助计算机软件，在分析比较了９个传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）Ａ片段结构蛋白基因的基础上，设计并合成了２对ＶＰ２和ＶＰ３基因ＰＣＲ引物，经ＲＴ－ＰＣＲ反应条件优化选择，成功地建立了ＲＴ－ＰＣＲ方法，用于扩增ＩＢＤＶＶＰ２和ＶＰ３基因，经琼脂糖凝胶电泳和分子杂交鉴定，获得４个ＩＢＤＶ野毒株ＶＰ２和ＶＰ３基因，为ＩＢＤＶ分子生物学研究奠定了基础     

信阳油茶低产林改造技术

信阳市油茶生产中普遍存在产量低,品质差问题,通过对油茶低产原因的分析,为开发油茶资源,提出了优质高产栽培的重要途径和措施.     

小麦黄花叶病毒的血清学检测

利用间接ELISA对感染WYMV的小麦病叶检测,通过比较分析影响ELISA测定结果的包被缓冲液、抗血清及酶标抗体的浓度和种类,确立了较为稳定的反应体系.利用此ELISA检测体系并结合RT-PCR方法对从四川采集的田间小麦中WYMV进行检测,确定了有较高的检测灵敏度的检测系统,为田间大量小麦病样的检测提供有效、方便的方法.     

肝窦内皮细胞和枯否细胞中bcl-2和GAPDH mRNA半衰期的测定

通过反转录 PCR( RT- PCR)测定了肝窦内皮细胞和枯否细胞中 bcl- 2和 GAPDH m RNA的半衰期。结果表明 ,在窦内皮细胞中 bcl- 2和 GAPDH m RNA的半衰期分别为 6 .13和大于 2 0 h,在枯否细胞中 bcl- 2和GAPDH m RNA的半衰期分别为 5 .86和 13.74h。     

一步法复合RT-PCR鉴别ND强毒与AI病毒的研究

根据新城疫病毒（NDV）融合蛋白和禽流感病毒（AIV）核蛋白的核酸序列设计2对引物,对NDV和AIV的特异扩增片段分别为156bp和219bp,建立了同时检测强毒力NDV和AIV核酸的一步法复合RT—PCR。试验中未能检出弱毒力NDV,IBV,IBDV,REV,REOV及SPF鸡肌肉组织的RNA,从不同年代分离的16个NDV强毒株全为阳性而NDV弱毒株全为阴性。经验证,复合引物与单一引物的扩增效率一致,能够检出NDV和H;亚型AIV的最低病毒量分别为10^3.7EID。和10^3.9EID50。试验结果表明,此次建立的一步法复合RT—PCR特异、敏感,适用于强毒力NDV和AIV．感染的快速鉴别。     

SYBR Green I实时荧光PCR鉴定检测转基因油菜RT73品系

根据转基因油菜RT73品系转入的外源基因质粒图谱,设计品系鉴定的特异性引物,进行SYBR!Green I实时PCR检测,建立转基因油菜品系鉴定的SYBR Green I实时PCR方法。同时针对油菜FatA基因设计出内源基因。结果表明：应用实时PCR技术,利用SYBR Green I染料能选择性结合双链DNA的特点,可检测到RT73品系特异性靶序列扩增所产生的荧光信号,且通过溶解曲线确定其熔点值为80.2（±0.5）。SYBR Green I实时PCR能通过溶解曲线有效地区分特异性产物、非特异性产物以及引物二聚体,是鉴定转基因油菜RT73品系的新方法。