大肠杆菌(O157)酶联免疫检测及注意事项

1材料与方法 1.1材料 抗原为Eae-Stx1/2B纯化蛋白;EHEC O157标准菌株(EDL933).抗体为单抗2H9纯化腹水,蛋白浓度为4.16毫克/毫升. 1.2方法 EHEC O157检测方法的建立.抗原包被浓度和抗体工作浓度的初步选择,用PBS调整Eae-Stx1/2B纯化蛋白浓度为8、4、3、2、1、0.5、0.25、0.125、0.06微克/毫升,纵向包被1小时,封闭,洗涤,单抗从1:1000开始进行倍比稀释,横向加入各孔内,37℃反应1小时,加酶标二抗,洗涤,加底物液显色后终止,测定OD值.以OD值接近1.0,且前后稀释度出现较大变化时,该孔的包被浓度初步确定为最佳包被浓度,该孔抗体的稀释倍数为单抗的初步工作浓度.抗原的最佳包被温度和包被时间的确定.取5块酶标板,用初步确定的Eae-Stx 1/2B纯化蛋白的最佳包被浓度包被酶标板,分别于37℃0.5小时、37℃1小时、37℃2小时、37℃3小时、37℃4小时温育和4℃过夜;以初步确定的单抗工作浓度进行间接ELISA检测,测定其OD值.OD值最大最稳定的为最佳包被温度和时间.     

蓝舌病病毒实时荧光定量PCR检测技术的建立及初步应用

<正>蓝舌病最早于1905年发现于南非,主要存在于南纬40°至北纬53°之间的地区,包括美洲、非洲、澳洲以及亚洲。我国自1979年在云南分离到蓝舌病病毒以来,湖北(1983)、安徽(1985)、四川(1988)、山西(1993)、广西(1985)等省份分别报道发现了蓝舌病,此后蓝舌病普查中有29个省(市、地区)发现该病〔1〕。2006~2008年蓝舌病相继出现在荷兰、卢森堡、丹麦、瑞士、捷克以及英国,同年受到感染的     

猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型基因重组质粒实时荧光定量PCR标准曲线的构建

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7和猪圆环病毒2型(PCV2)ORF1的核苷酸序列设计特异性引物,经RT-PCR/PCR扩增,分别扩增出大小为308 bp和417 bp的部分基因片段。用T4连接酶将目的片段与pGEM-Teasy载体系统连接,并转化到大肠杆菌DH-5α株感受态细胞。提取的质粒经PCR、酶切和测序鉴定,证实为PRRSV和PCV2的阳性重组质粒。将重组标准质粒10倍系列稀释后作为模板,通过实时荧光定量PCR方法(Real-time PCR),建立了PRRSV、PCV2的标准曲线及其直线回归方程,并确定其最佳读板温度。该方法具有线性关系好、特异性强、敏感性高、重复性好等特点,为分析PRRSV和PCV2共感染猪体内病毒的绝对含量提供了必要的技术平台。     

略阳乌鸡生长规律及继代选育效果分析

为掌握略阳乌鸡生长发育特点,检验选育成效,在P_1～P_3代大群略阳乌鸡中分别随机选择36、95、200只,在1～10周龄,每周龄称量体重,作为小群样本。并选用Gompertz模型、Johnsonschumacher模型及三项式拟合生长曲线进行生长曲线模型模拟。结果表明,在3个世代的生长曲线模型中,Gompertz模型拟合效果最好(P_1代R~2=0.9997,P_2代R~2=0.9986,P_3代R~2=0.9958),最契合略阳乌鸡实际生长曲线。Gompertz模型分析表明,第三代略阳乌鸡拐点周龄较前两代有所提前(P_1代7.09周,P_2代8.08周,P_3代7.03周),拐点体重有所提高(P_1代650.41g,P_2代752.28g,P_3代755.63g)。试验表明,略阳乌鸡生长指标明显提升,继代选育效果良好。     

智慧老太的有机人生

<正>一个人的成功绝非偶然,王连梅也是如此。作为山东省博兴县龙升食品有限公司董事长兼总经理,60岁的她只有小学文化程度,10年间她克服种种困难,走出了一条不断挑战与超越的上升曲线     

基于Matlab平台的瑞雷波频散曲线提取

拉东变换算法是目前从瑞雷波中提取频散曲线的较常用和较好的方法。由于拉东变换算法复杂,给提取频散曲线带来不便;为了提高提取效率和优化提取效果,本文利用Matlab软件平台对该算法进行可视化的实现,为利用频散曲线进行相关研究提供便捷。     

第三代普锐斯

第三代普锐斯的外观依然保持了原有的风格,不过拥有了更流畅的空气动力学性能曲线以及造型。此外,低前鼻和流线型车身更是将空阻系数降到了0.25,不仅比老款车型降低了0．01。     

荧光实时定量PCR方法检测猪链球菌2型

以猪链球菌2型的荚膜多糖抗原编码基因cps2J为靶基因设计引物,利用SYBR GreenⅠ能特异地与双链DNA结合发出荧光的特性,以ABI7000为平台,建立荧光实时定量PCR检测猪链球菌2型的方法。该方法检测猪链球菌2型参考株和猪链球菌2型国内分离株都呈阳性,具有良好的特异性。整个检测过程于2h内完成,检测限度为24CFU,标准曲线的相关系数为0.997。对5份采集于猪链球菌2型病猪的病料进行检测,结果表明肝脏和脾脏最适于检测。