Phenethyl isothiocyanate as an anti-nutritional factor attenuates deoxynivalenol-induced IPEC-J2 cell injury through inhibiting ROSmediated autophagy

Deoxynivalenol(DON)is considered to be the most harmful mycotoxin that affects the intestinal health of animals and humans.Phenethyl isothiocyanate(PEITC)in feedstuff is an anti-nutritional factor and impairs nutrient digestion and absorption in the animal intestinal.In the current study,we aimed to explore the effects of PEITC on DON-induced apoptosis,intestinal tight junction disorder,and its potential molecular mechanism in the porcine jejunum epithelial cell line(IPEC-J2).Our results indicated that PEITC treatment markedly alleviated DON-induced cytotoxicity,decreasing the apoptotic cell percentage and pro-apoptotic mRNA/protein levels,and increasing zonula occludens-1(ZO-1),occludin and claudin-1 mRNA/protein expression.Meanwhile,PEITC treatment ameliorated DON-induced an increase of the inducible nitric oxide synthase(iNOS)and cyclooxygenase 2(COX-2)mRNA levels and intracellular reactive oxygen species(ROS)level,and a decrease of glutathione peroxidase 1(GPx1),superoxide dismutase 2(SOD2),catalase(CAT)and heme oxygenase 1(HO-1)mRNA levels.Additionally,PEITC treatment significantly down-regulated autophagy-related protein 5(ATG5),beclin-1 and microtubuleassociated protein 1 light chain 3B(LC3-II)mRNA/protein levels,decreased the number of green fluorescent protein-microtubule-associated protein 1 light-chain 3(GFP-LC3)puncta and phosphatidylinositol 3 kinase(PI3K)protein expression,and up-regulated phospho-protein kinase B(p-Akt)and phospho-mammalian target of rapamycin(p-mTOR)protein expression against DON.However,the activation of autophagy by rapamycin,an autophagy agonist,abolished the protective effects of PEITC against DON-induced cytotoxicity,apoptosis and intestinal tight junction disorder.Collectively,PEITC could confer protection against DON-induced porcine intestinal epithelial cell injury by suppressing ROSmediated autophagy.     

猪圆环病毒分子生物学研究进展

猪圆环病毒是单链环状DNA病毒,其基因组中包含多个阅读框,其中2个主要的阅读框分别编码复制起始蛋白Rep和Rep'以及病毒衣壳蛋白:Rep和Rep'结合由PCV1的部分复制起点组成的双链DNA片段,但这2种蛋白的结合位点有细微差别;Rep蛋白不能单独启动病毒的复制,只有和Rep'蛋白一起才能启动PCV病毒的复制;PCV1感染PK15细胞后,用实时PCR检测rep和rep'转录子的数量,发现这2种转录子的比率随着时间的推移而不断发生变化;病毒衣壳蛋白基因是PCV基因间唯一变化很大的基因,其编码衣壳蛋白是PCV主要的免疫原性蛋白,其氨基端41个氨基酸与PCV2在细胞核内的定位有关.     

利用电极盘进行猪卵母细胞电激活

[目的]研究不同电激活参数以及电脉冲联合6-DMAP对猪卵母细胞孤雌激活效果的影响。[方法]使用电极盘,测定不同场强（1．1、1．3、1．5、1．7、1．9kV／cm）,不同脉冲时程（30、50、70、90、110ps）,1次脉冲下猪卵母细胞囊胚率的变化。[结果]结果表明,脉冲强度以1．5和1．7kV／cm效果最好,在80胂时其猪卵母细胞囊胚率分别达到（22．35±5．16）％和（20．59±9．41）％;脉冲强度1．5kWcm,1次电脉冲后4h联合6-DMAP激活卵母细胞,当脉冲时程达到70和90μs时,囊胚率分别达到（21．65±9．95）％和（23．10±16．27）％。[结论]在试验条件下,使用电极盘的最适电激活参数为脉冲强度1．5-1．7kV／cm,脉冲时长80μs,1次脉冲电激活。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因的克隆与原核表达

[目的]克隆猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因并在原核表达系统中表达。[方法]根据GenBank上登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）核酸序列设计1对引物,用RT—PCR方法扩增出PRRSV的核衣壳蛋白（N）基因,并将其克隆到原核表达载体pGEX-4T．1上,得到重组质粒pGEX-4T-1-N。将重组质粒转化大肠杆菌BL31（DE3）感受态细胞,经TPTG诱导,SDS-PAGE电泳检测。[结果]PRRSV肺组织所提取的RNA,经RT—PCR扩增,得到一段392bp的片段,与预期结果一致。SDS—PAGE电泳分析,所得重组蛋白的分子量约39．866Da,与预期结果相同。重组菌体超声裂解后,经10％的SDS—PAGE电泳分析,结果显示该重组蛋白为可溶性蛋白。     

有无透明带猪卵母细胞电激活参数的优化及体外培养方式的建立

[目的]摸索无透明带猪体外成熟卵母细胞(ZFOs)电激活的条件和无透明带孤雌激活胚胎(ZFEs)的体外培养方式,为手工克隆法生产广西巴马小型猪体细胞核移植奠定基础。[方法]用不同场强、脉冲时程和脉冲次数激活ZIOs、ZFOs,用不同培养方式(微滴法和微穴法)培养ZIEs和ZFEs,检查第7天的囊胚率及囊胚的总细胞数。[结果]有带猪体外成熟的卵母细胞电激活最佳场强和脉冲时程为125 V/(mm.80μs),微滴法培养的囊胚发育率为(30.54±11.06)%;无带猪体外成熟的卵母细胞电激活最佳场强和脉冲时程为85V/(mm.80μs),微穴法培养,其囊胚发育率为(12.77±6.98)%;单次脉冲的激活效果好于多次脉冲。[结论]对有无透明带胚胎的培养方式,微穴法培养无透明带胚胎,微滴法培养有带胚胎较合适,一次脉冲可以有效激活卵母细胞。     

猪IL-18成熟蛋白基因重组真核表达载体的构建及其抗病毒作用研究

应用RT-PCR方法从三元猪脾脏淋巴细胞中扩增出猪白细胞介素-18成熟蛋白(pmIL-18)基因,经克隆测序表明,pmIL-18基因长474bp,编码157个氨基酸。序列分析发现,与已发表的pmIL-18基因序列同源性很高,均为99%以上。将pmIL-18基因插入表达载体pcDNA3.1,成功构建了pmIL-18基因的重组真核表达载体pcD-NA3/pmIL-18。将重组质粒转染COS7细胞,经SDS-PAGE及Western-blotting分析表明,pmIL-18基因在COS7细胞中获得了瞬时表达。收集转染细胞培养上清,检测pmIL-18抗病毒活性,结果表明,转染上清对猪繁殖与呼吸综合征病毒没有明显的抑制作用。     

猪伪狂犬病毒湖北株gE基因的克隆与序列分析

[目的]通过对从湖北省某猪场分离获得的伪狂犬病毒的gE基因克隆和测序,分析其遗传变化规律。[方法]参考GenBank中猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies Virus,PRV)gE基因的序列设计1对引物,对PRV湖北株gE基因进行PCR扩增和序列分析,PCR产物克隆到pMD 18-T载体。对重组质粒进行限制性内切酶分析和基因测序,与GenBank收录的国内外其他地区的标准参考毒株进行同源性分析和比较。[结果]与标准参考毒株的核苷酸序列同源性为95.0%~98.0%,进化树分析表明,PRVHBXS2014株与河南焦作株EU561349-China同属于一个分支,亲缘关系较近,但存在个别位点的基因突变。[结论]为有效防控该病提供参考。     

猪伪狂犬病毒河南株的分离与鉴定

从疑似猪伪狂犬病的病料中分离到 1株病毒 ,通过电镜观察、免疫荧光检查、PCR方法检查 ,证明该分离株为猪伪狂犬病毒 ;用分离株研制出油乳剂灭活苗预防猪伪狂犬病 ,预防效果良好。     

某规模化猪场猪伪狂犬gE和gB抗体的检测与分析

[目的]了解龙岩市某规模化猪场猪伪狂犬野毒感染状况和免疫抗体水平。[方法]采用ELISA法对2010~2013年该场采集的种猪和育肥猪群的血清样品共1 217份进行猪伪狂犬野毒(gE)抗体和免疫(gB)抗体检测。[结果]种猪与育肥猪猪伪狂犬野毒总样品阳性率分别为13.5%和28.4%,其中60~100日龄的育肥猪总样品阳性率为5.2%,100~210日龄的总样品阳性率为42.1%;种猪伪狂犬免疫抗体总样品阳性率分别为92.2%,60~160日龄的育肥猪猪伪狂犬免疫抗体阳性率呈波动变化,血清样品总阳性率为50%。[结论]该猪场育肥猪群野毒感染率较种猪群高,且100日龄以后的育肥猪群野毒感染率较高,种猪群的免疫抗体水平高于育肥猪群,80~130日龄育肥猪免疫抗体水平较低。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒宁夏地区地方株的分离与鉴定

[目的]弄清宁夏地区部分猪场出现“无名高热”病因及更加有效预防、控制此类疾病的发生.[方法]通过从宁夏某发病猪场采集产生典型病变的猪肺部组织,将病料处理后分别用Marc-145、PK-15、BHK-21等传代细胞系进行病毒的分离与鉴定.[结果]只有Marc-145细胞上有典型病变,连续传代3次后病变稳定,接毒48 ～72 h后病变率达70％左右.RT-PCR及双酶切的结果表明分离培养物为猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株.通过RNA提取、RT-PCR及酶切反应,实现了对分离培养物快速、确切鉴定.[结论]用MARC-145细胞成功分离到1株PRRSV,命名为ZH-w株.