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211.
212.
重组毕赤酵母产木聚糖酶条件的优化 总被引:10,自引:0,他引:10
对基因工程菌Pichia pastoris GS115-ATx在摇瓶发酵水平产木聚糖酶条件进行了优化.结果表明,该基因工程菌产木聚糖酶的最佳碳源为麸皮,最佳氮源为牛肉膏,有机氮源促进产酶的效果优于无机氮源.GS115-ATx产木聚糖的最佳甲醇诱导浓度为0.5%,在甲醇诱导的同时补加0.5%甘油能显著提高木聚糖酶的活性.研究发现,吐温20、吐温80、甜菜碱等表面活性剂均具有促进基因工程菌GS115-ATx产木聚糖酶的作用,其中甜菜碱的作用效果较佳.经SDS-PAGE电泳分析,GS115-ATx产生木聚糖酶的分子量约为19.0 kDa.发酵液上清中的木聚糖酶活性在甲醇诱导培养96 h后达到最大值. 相似文献
213.
采用基因克隆方法获得酸性蛋白酶基因,在毕赤酵母KM71表达系统中进行表达,并将重组酵母酸性蛋白酶rPrA经过浓缩后研究其酶学性质,初步探究了rPrA对大豆蛋白和酪蛋白的水解情况.结果表明:经过异源表达后的重组毕赤酵母酸性蛋白酶分子量约为44 ku,在pH3.0的发酵条件下酶活最高,可达46.92U/mL.该酸性蛋白酶的最适pH值为3.0,最适温度为35℃.Mn2+对该酶活性有激活作用,多种金属离子对该酶有抑制作用;0.1 mmol/L的Pepstain A即可完全抑制酶活,说明此重组酶的活性中心有天冬氨酸残基.对大豆蛋白和酪蛋白的初步水解试验可知,当E/S为4 000 U/g时,此重组酶对大豆分离蛋白和酪蛋白的水解度分别为9.0%和8.34%.优化发酵条件以及与多种蛋白酶进行复配,该重组蛋白酶将在蛋白水解中有很好的应用前景,有望应用到畜禽饲料加工行业. 相似文献
214.
白斑综合征病毒囊膜蛋白vp28基因在毕赤酵母中的表达 总被引:3,自引:1,他引:3
白斑综合征病毒(whitespotsyndromevirus,WSSV)是危害东南亚及北美洲沿岸养殖对虾的重要病原。近十年来,国内外对该病毒的形态结构、基因组全序列、宿主范围、传播途径、致病性和组织细胞特异性等作了大量的研究[1-7],并已确定该病毒的侵染与其囊膜蛋白vp28有关[8]。实验根据已发表的白斑综合征病毒囊膜蛋白vp28基因序列[9]设计一对引物,通过PCR扩增出该囊膜蛋白的基因片段。将该片段连接到毕赤酵母表达载体pPICZ上,在大肠杆菌中筛选到含目的基因的重组质粒pPICZVP28,用电穿孔法将重组质粒转化到毕赤酵母菌株X33中,获得了转化子X33 … 相似文献
215.
216.
217.
根据兔防御素NP2基因序列和Pichia酵母密码偏爱性,设计兔防御素NP2基因序列片段,构建pGAPZαA酵母表达重组子,转化E.coli JM109,扩增重组子,经限制性内切酶BlnI线性化,转Pichia酵母。PCR扩增挑选阳性转化子,SDS-PAGE电泳分析兔防御素NP2酵母表达、Bradford法蛋白质定量和抗菌试验。结果表明:兔防御素NP2可在Pichia酵母中表达,且对大肠杆菌具有显著的抗菌作用,为兔防御素NP2深入研究和开发利用奠定了一定的物质和理论基础。 相似文献
218.
毕赤酵母Mut+和Muts重组子表达美洲商陆抗病毒蛋白基因的比较 总被引:2,自引:0,他引:2
将N末端信号肽和C末端毒性区域缺失突变的美洲商陆抗病毒蛋白(pokeweed antiviral protein,PAP)基因表达载体pPIC9KP酶切线性化后,通过电击转化整合到巴氏毕赤酵母(Pichia pastoris) GS115菌株细胞中,PCR筛选出表型为利用甲醇快速型(Mut+)的重组子。在相同培养条件下比较Mut+重组子和利用甲醇缓慢型(Muts)重组子在表达缺失突变型PAP方面的异同。结果表明,诱导培养48 h后,Mut+重组子表达产物在SDS-PAGE胶上可见清晰目的带,而Muts重组子培养72 h才能见到微弱的目的带。抗病毒活性实验表明Mut+重组子和Muts重组子的表达产物均对TMV病毒侵染有明显的抑制作用,它们的抗病毒活性没有显著的差异。 相似文献
219.
Effects of calcium on biocontrol activity of yeast antagonists against the postharvest fungal pathogen Rhizopus stolonifer 总被引:5,自引:0,他引:5
Calcium chloride (2% w/v) significantly inhibited the growth of the pathogen Rhizopus stolonifer , but did not affect the colony-forming units (CFU) of yeasts Candida guilliermondii and Pichia membranefaciens in potato dextrose broth. The concentration of yeast suspension influenced spore germination and germ tube growth of R. stolonifer in vitro, as well as disease incidence and lesion development in fruits. There were significant negative relationships between the suspension concentrations of the yeasts and the growth as well as infectivity of the pathogen. The addition of calcium resulted in lower spore germination rates and slower growth of germ tubes in vitro , as well as in lower disease incidences and smaller lesion diameters compared with treatments with yeast antagonists alone. When yeast cell suspensions reached a concentration of 5 × 108 CFU mL−1 , growth of the pathogen was completely limited in vitro , and no infection was found in peach and nectarine fruits treated with or without calcium. 相似文献
220.
YU Jian-feng HE Sai JIN Ze-kai ZHOU Huan-qing DONG Xiao-min GONG Dao-qing GU Zhi-liang 《中国畜牧兽医》2016,43(11):2970-2975
The growth hormone(GH)regulated diverse functions of the target cells through binding its receptor and played important roles in the process of metabolism of the body's growth and development.In order to obtain high purity chicken growth hormone(cGH)with biological activity,the gene segment of the mature cGH with six histidine at the C terminus was cloned into the expression vector pPIC9K.The recombinant plasmid(pPIC9K-cGH)was transformed to Pichia pastoris(GS115)by electroporation to construct the recombinant Pichia pastoris(GS115-pPIC9K-cGH).The GS115-pPIC9K-cGH secreted the recombinant protein(cGH)whose molecular weight was about 25 ku induced by 1% methanol induction for 96 h.The purity of cGH attained at least 95% through using Ni affinity chromatography and polyacrylamide glucan gel chromatography to purify the recombinant protein.The results of Real-time quantitative-PCR showed that the purified cGH recombinant proteins could up-regulate its target gene insulin-like growth factor Ⅰ(IGF-Ⅰ)mRNA in chicken liver cancer cell(LMH).It certified that the recombinant cGH protein had biological activity.This study laid a foundation for research of the structure,function and application of cGH. 相似文献