山羊痘病例的病理学诊断及病毒鉴定

菏泽市某养羊场从散户购买青山羊50余只,购进后1周左右陆续发病,发病羊体温41~42℃,2周内死亡率超过60%,部分羊体表有痘疹样病变,疑似羊痘。对该病例进行了现场调查、尸体剖检、病理组织学检查及病毒分离鉴定。结果显示:病羊眼睑、口、鼻部有痘疹结节,皮肤有大量红色丘疹。剖检病死羊可见肺、胃肠黏膜、肾及肝表面有数量不等的灰白色丘疹。皮肤及黏膜痘疹部的上皮细胞增生、水泡变性,并见胞浆红染包涵体;肺、肝、肾丘疹完全符合痘疹的病变特征,通过Macehiavello包涵体染色在皮肤、黏膜增生的上皮细胞及肝、肾痘细胞的胞浆内有紫红染包涵体。将获得p32基因序列与GenBank上登录的相应序列进行同源性分析表明该分离株与山羊痘病毒分离株的同源性为99.4%~99.8%,但与绵羊痘病毒的同源性偏低(97.2%~98.1%)。系统进化树分析表明该分离株与山羊痘病毒处于同一分支。将纯化后的p32基因扩增产物用Hinf I酶切位点分析表明,该病毒仅在688bp处存在1个酶切位点,酶切后产生2条目的片段(688和311bp)。对p32基因序列进一步分析表明,在169~171位点上存在3个碱基(GAT)的插入,而山羊痘病毒和其他痘病毒在该位点上有3个碱基缺失,证明此次疫情是由山羊痘病毒引起的。据病理学及病原学诊断结果判定该病例为山羊痘重症感染。按《中华人民共和国动物防疫法》规定,扑杀并无害化处理发病羊群,羊舍、场地、用具严格消毒,粪便堆积发酵处理,受威胁区的羊群实施疫苗紧急接种羊痘疫苗,疫情未发生进一步扩散。     

副猪嗜血杆菌病疫苗新制苗菌株FS0307的毒力和OMP P5基因研究

为了进一步研究副猪嗜血杆菌FS0307株的特性,本研究对该菌株的外膜蛋白P5基因进行测序分析,并进行其对豚鼠的致病力研究。结果显示,Hps FS0307株的序列与相同血清型的国际标准株SW124的同源性为98.3%,与多数国内分离株的同源性在98%以上,与美国分离株2170B的同源性为95.6%,而与3株其他血清型国际标准株的同源性在89.5%~95.1%之间;遗传系统进化树显示与4型国内分离株SC085(HM747106)在同一分支上。且能引起豚鼠100%发病,100%死亡。说明Hps FS0307株与国内流行菌株更相似,是1株优良的副猪嗜血杆菌病疫苗的制苗菌株。     

Study on Effect of Nitrogen and Phosphorous on the Resistance of E.coli to Chloramphenicol and its Mechanism

This study was designed to explore the effect of nitrogen and phosphorous on the resistance of E.coli from environment and the mechanism.Microcosms were established to study the effect of nitrogen and phosphorous on the resistant phenotype of E.coli to chloramphenicol (CHL).cat gene of isolated drug-resistant strains and susceptible strains were detected.The results showed that,different concentration of nitrogen and phosphorous could induce the formation of antibiotics resistance of E.coli to CHL.The rate of cat gene of 46 strains of chloramphenicol resistant E.coli was 89.13%,which was 0 in the 16 strains of chloramphenicol sensitive E.coli.The results indicated that,nitrogen and phosphorous in the microcosms could induce the formation and maintenance of resistance to chloramphenicol in E.coli,which had correlation with cat gene.     

恩施地区三种重楼属植物活性成分与抗氧化活性研究

对比分析恩施地区3种重楼5年生七叶一枝花[Paris polyphylla Smith var. chinensis（Franch）.Hara]、啟良重楼（Paris qiliangiana H.Li,J.Yang&Y.H.Wang）、黑籽重楼（Paris thibetica Franch.）中重楼皂苷Ⅱ活性成分含量,建立气相色谱法（GC）检测方法,检测3种重楼提取物DPPH自由基清除活性,研究其抗氧化能力。乙酸乙酯提取重楼皂苷Ⅱ,采用FID检测器,升温程序为0～3 min,60℃,3℃/min升至280℃,保持20 min;进样口温度310℃;载气为氮气（99.999%）;流速为1.0 mL/min;进样量为5μL,不分流。结果表明,GC检测得到重楼皂苷Ⅱ标准品的标准曲线为Y=0.845X+72.18,在浓度512.5～16 400.0 ng/μL范围内线性良好,R2>0.999 5。方法检出限为40.5 ng/μL,定量限为130.6 ng/μL。加标回收率为96.93%～98.33%,RSD为2.72%。GC检测发现七叶一枝花中重楼皂苷Ⅱ含量为0.104 mg/g,...     

苦蘵P450家族基因鉴定与表达分析

细胞色素P450酶(cytochrome P450)广泛参与植物次生代谢,是当前的研究热点。基于苦蘵转录组数据,分析并鉴定了部分苦蘵P450家族基因。共鉴定得到795个可能为P450家族基因的序列片段,并将它们聚类到25个不同的聚类(cluster)中,其中,有12个聚类具有组织特异性表达。最终拼接得到30个苦蘵P450家族基因的全长序列,它们与其他物种P450基因高度同源。进化分析表明,这30个苦蘵P450基因可归为9个P450亚家族。通过定量PCR技术,分析了多个P450基因在果实不同成熟阶段的表达变化。结果表明,9个P450基因随着果实成熟表达量上升,另外9个P450基因表达量则逐渐降低。以果实为材料,分析了P450家族基因在乙烯(ACC)与乙烯抑制剂(1-甲基环丙烯,1-MCP)处理下的表达变化。研究表明,部分P450家族基因在ACC和1-MCP处理下表现出相反的表达模式,这说明P450可能参与乙烯介导的果实成熟过程。克隆了3个果实特异表达的P450家族基因(comp164210、comp131532、comp152181),它们主要定位于细胞质和细胞膜中。本研究为苦蘵药用性状遗传改良提供了有价值的遗传信息。     

草鱼–鳙–鲫零换水池塘有机碳、氮、磷收支研究

为研究草鱼(Ctenopharyngodon idella)–鳙(Aristichthys nobilis)–鲫(Carassius carassius)零换水池塘营养盐收支状况,阐明其零换水机制,以草鱼–鳙–鲫零换水池塘为实验组,以草鱼–鳙–鲫常规换水池塘为对照组,开展了为期2年的池塘有机碳(TOC)、氮(N)、磷(P)收支的研究。结果显示,2组池塘TOC、N、P的主要来源均为饲料投入,分别为77.06%和81.00%,92.08%和92.77%,94.18%和95.63%;TOC、N、P的主要输出途径均为底泥积累,分别占输入营养盐的43.32%和22.10%,61.40%和52.82%,78.71%和79.58%。2组池塘养殖鱼类收获分别占输入碳(C)、N、P的10.08%和13.05%,21.00%和25.57%,15.41%和18.60%。零换水池塘的C、N、P水体积累量和积累率均显著低于常规池塘(P<0.05),其积累率分别降低92.91%、88.52%和87.12%。零换水池塘的N、P底泥积累量显著高于常规池塘,但C、N底泥积累率显著低于常规池塘(P<0.05),分别降低了48.99%和13.97%。零换水池塘养殖鱼类的C、N、P利用率均显著高于常规池塘(P<0.05),分别提高了29.49%、21.72%和20.65%。研究表明,零换水模式能降低营养盐积累,有效提高系统物质利用率,是一种绿色高效养殖模式,具有较好的推广价值。     

副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5的B细胞抗原表位鉴定

副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5能诱导机体产生免疫保护反应,同时可以用于特异性的血清学诊断,本试验选取P5蛋白进行抗原表位鉴定。首先通过PCR扩增P5F1（1～204aa）,P5F2（170～296aa）及P5F3（280～371aa）3个片段,PCR产物分别定向克隆到表达载体pET32a（＋）中表达纯化。根据ELISA和Western blotting结果确定P5F3片段（280—371aa）是OmpP5的免疫优势决定区。为了进-步对该免疫优势决定区进行抗原表住鉴定,设计了-套11个部分重叠的短肽,这些短肽覆盖全部280～371aa片段。每-个短肽合成1对寡核苷酸链,退火后插入表达载体pGEX-6p-1,与GST进行融合表达。用HPS阳性血清进行ELISA和Western blotting扫描,鉴定出其表位位于”。TGNTCDAVKGRKALIT351。通过序列分析证实该抗原表位在不同的HPS菌株中高度保守。本试验确定了位于HPSOmpP5上的-个抗原表位,为建立-种方便、快捷、适用于现地大规模样品检测的鉴别诊断方法奠定了基础,同时也为HPS新型亚单位疫苗的研制,以及研究病原茵感染和机体免疫过程中P5蛋白与宿主体内相应分子之间的相互作用提供了有用信息。     

AM真菌和施磷量对黄芩光合特性和根系生长的影响

利用盆栽接种试验,探讨不同施磷(P)水平下接种摩西球囊霉(Glomus mosseae)对黄芩(Scuteliaria baiealensis)光合特性、根系生长和营养含量的影响,为黄芩合理施肥和菌根技术应用提供理论依据。结果表明,不同施P水平下,接种AM真菌显著提高根系侵染率、根系干质量、黄芩苷含量、叶片光合速率和气孔导度,降低叶片蒸腾速率;提高黄芩根系K、Ca、Mg、Fe、Zn元素含量,高P水平(0.25g·kg-1土)显著降低根系Cu和Mn元素含量。AM真菌和施P量之间有显著交互效应,施P量为0.15g·kg-1土时AM真菌接种效果最好。     

羊痘病毒P32基因与羊CD58基因共表达载体的构建

为了开发出一种可行的羊痘基因疫苗,尝试用羊P32基因与CD58基因建立共表达载体.试验根据GenBank中收录的羊痘病毒(GPV)P32和羊CD58基因组序列,设计了扩增GPV P32基因和CD58基因的特异性引物,运用PCR技术从GPV中扩增出P32基因,从羊的外周血中扩增出CD58基因,并将其分别克隆到pMD18-T载体,测序正确.将P32基因去掉后端疏水区一段与CD58基因先后克隆至载体pBudCE4.1,并转化大肠埃希菌JM109,提取质粒通过酶切鉴定和测序正确,且读码框正确.说明成功获得了真核共表达质粒pBudCE4.1/CD58/P32.     

温度和营养盐对条斑紫菜体细胞生长发育的影响

文章研究了温度(15℃、20℃、23℃)和营养盐浓度(0mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L)对条斑紫菜体细胞生长发育的影响,结果表明,条斑紫菜体细胞在温度20℃,营养盐浓度50mg/L时生长的最好。