诸葛菜与芸薹属属间杂交亲和性研究

诸葛菜与芸薹属属间杂交存在高度的不亲和,很难得到杂种。芸薹属植物的不同种、同一种不同品种与 诸葛菜亲和力不同。F1 种子的产生不仅与亲本的基因型有关,而且与杂交的组配方式有关。以芸薹属做母本的杂 交亲和性高于以诸葛菜做母本的组合的杂交亲和性。授粉子房离体培养能够提高属间杂交种产生的频率。F1 植 株的形态大多数偏向母本。     

诸葛菜OvCYP86MF基因的克隆及其特性分析

为进一步阐明细胞色素P450基因CYP86MF在诸葛菜发育中的分子机理,本文根据已知同源基因保守序列设计特异引物,利用RT-PCR和RACE技术从诸葛菜中获得一个细胞色素P450基因(OvCYP86MF)全长cDNA序列,该序列全长为1876bp,含有1605bp的完整开放阅读框,可编码534个氨基酸,分子量和等电点分别为61.4kDa和6.90,具有细胞色素P450蛋白的典型特征,即保守结构域FNAGPRLCIG;原核表达显示该基因的融合蛋白在体外可以诱导表达;DANSTAR和Clustal W软件分析表明该基因的全长cDNA序列及其编码氨基酸序列与十字花科物种拟南芥相似性很高,达到80%以上,亲缘关系最近;与CYP86C亚家族成员在氨基酸水平上的相似性均高于50%,因此推断该基因属于CYP86C这个亚家族。Northern杂交分析表明该基因在花蕾中特异表达。     

二月兰种带真菌致病性研究

二月兰是重要的地被、景观和绿肥作物。通过种子、离体叶片和温室盆栽试验，对分离自二月兰种子的链格孢菌，芸薹生链格孢，细极链格孢，黑附球菌，变红镰刀菌，顶孢哈氏霉，细基格孢属等5属7种可培养真菌进行了致病性测定。结果表明，7种真菌可致二月兰种子萌发后烂种烂芽率16.50%~68.50%，其中芸薹生链格孢、顶孢哈氏霉可引致种子发芽率降低18.18%~27.27%。7种种带真菌分别引致二月兰离体叶片出现褪绿和坏死腐烂等症状，发病率100%，病斑面积8.84%~99.38%，病情指数22.50~95.00。盆栽条件下，种带真菌均可致植物出现萎蔫褪绿和坏死叶斑等症状，病株率100%，叶片发病率41.56%~79.88%，病情指数16.22~56.93。与对照（不接种带真菌）相比，种带真菌侵染二月兰植株后第9天植物丙二醛（MDA）含量增加30.40%~204.15%，过氧化物酶（POD）活性变幅为-1.81%~82.87%，超氧化物歧化酶（SOD）活性升高18.78%~86.14%，叶绿素含量（SPAD值）降低13.24%~37.85%。致病性试验表明，芸薹生链格孢致病性最强，顶孢哈氏霉致病性最弱。     

甘蓝型油菜与诸葛菜属间五倍体后代非整倍体的细胞遗传学研究

甘蓝型油菜与诸葛菜属间五倍体后代的细胞学观察结果表明,非整倍体中体细胞或花粉母细胞(PMCs)出现47、44和41条染色体的频率均高于其他类型的细胞.除了2n=38的植株外,其余均为混倍体.在2n>38的花粉母细胞中,附加的异源染色体经常落后于后期核外而呈现染色体消除现象.在减数分裂的第一次分裂时期,多数PMCs趋向于均衡分离.另外也观察到后期Ⅰ细胞一极出现17或18条染色体的特殊分离方式.对PMC后期Ⅰ细胞核以及雌雄配子的组成及比例的研究也发现,在2n=44和41的植株中存在染色体的消减现象,雄配子染色体消减的速率快于其余两种情况.而且低染色体数目配子(n=22～19)具有更高频率传递给后代.根尖的体细胞中存在染色体消除现象.     

诸葛菜花粉的保存研究

诸葛菜新鲜花粉在室温下寿命较短，７天时全部失去生活力．在４℃低温下，花粉寿命延长至１５天；在－２０℃以下，均失去生活力，干燥花粉在－２０℃保存４０天时，萌发率降至２５％；在液氮（ＬＮ）中，花粉生活力基本不变、经ＤＭＳＯ溶液预处理的冰冻花粉生活力很低，在－２０℃，花粉游离脯氨酸含量随储存时间延长略有下降，在ＬＮ中，花粉游离Ｐｒｏ不随时间变化而变化，冰冻保存２０天的花粉均能正常授粉结实．     

油菜与诸葛菜属间远缘杂交的初步研究

为了克服甘蓝型油菜与诸葛菜远缘杂交双受精前雌雄不亲和性,本实验采用60ppm的赤霉素、100ppm的甘氨酸涂抹油菜柱头、10ppm的H_3BO_3 5％的蔗糖涂抹去掉柱头的油菜花柱和蒙导法。赤霉素效果最好,获10粒种子,甘氨酸有一定效果得到3粒种子。而截去柱头和蒙导法均未见效果。在获得的13粒发育不全种子中,7粒种子萌发成苗。幼苗形态介于油菜与诸葛菜之间。     

Genomic in situ hybridization analysis of Brassica napus × Orychophragmus violaceus hybrids and production of B. napus aneuploids

To further utilize the valuable germplasm Orychophragmus violaceus for Brassica genetics and breeding, a B. napus × O. violaceus cross was repeated with embryo rescue. All F₁ plants except one B. napus haploid were mixoploids (2n = 17–39 in ovaries) with 2n = 31, 37, 38 and 39 as the maximal chromosome numbers in individuals, but the higher numbers mostly appeared in pollen mother cells (PMCs) with a preponderance of 2n = 30, 37 and 38. Only one chromosome and one chromosome segment of O. violaceus were detected at a low frequency in some ovary cells and PMCs with 2n = 37, 38 and 39 as determined by genomic in situ hybridization analysis. The fatty acid profiles of seeds from the majority of the F₁ and F₂ plants were similar to those of female B. napus cv. ‘Oro’, but some were obviously different in the percentages of oleic, linoleic and erucic acids, and some F₂ plants (2n = 38) with good seed set had high percentages of oleic (>70.0%) or linoleic (to 38.3%) acids and low erucic acid (<1%). Subsequently, many kinds of B. napus aneuploids (2n = 28, 30, 34, 36, 37, 39 and 42), without O. violaceus chromosomes, were derived from F₂ progeny and microspores of partial F₁ plants. Finally, the cytological mechanisms behind the variations in chromosome numbers were discussed together with the implications of these aneuploids for Brassica genome research and of the plants with altered fatty acid profiles for improving the oil quality of B. napus.     

二月兰花瓣花色苷组成分析

为了研究二月兰花色苷成分组成特点,本试验以3份二月兰为试材,利用特征颜色反应确定二月兰花瓣的色素类型,并通过高效液相色谱-质谱联用技术(HPLC-Q-TOF-MS)分析花色苷种类及其含量。研究结果表明,3份二月兰花瓣中均不含类胡萝卜素,除白色花瓣以外,其余均含花色苷。蓝紫色花瓣的花色苷含量最高,粉色次之。在二月兰花瓣中共检测到了7种花色苷成分,通过与已有文献比对,推定其成分为矢车菊素3-芸香糖苷、锦葵素3,5-二葡萄糖苷、矢车菊素3-香豆酰葡萄糖苷-5-葡萄糖苷、矢车菊素3-p-香豆酰二葡萄糖苷-5-葡萄糖苷、矢车菊素3-阿魏酰槐糖苷-5-丙二酰葡萄糖苷、矢车菊素3-香豆酰槐糖苷-5-丙二酰葡萄糖苷、矢车菊素3-(6′-丙二酰葡糖苷-2′-(6′′-香豆酰-2′′-羟基苯甲酰葡糖苷))-5-丙二酰葡糖苷。粉色花瓣中仅含矢车菊素的花色苷衍生物,而蓝紫色花瓣中则含矢车菊素和锦葵素的花色苷衍生物。本研究为二月兰花色苷成分的进一步分离和鉴定工作提供了参考,同时也为二月兰花色的分子育种提供理论依据。     

二月兰SSR-PCR反应体系的优化及引物筛选

为建立适合二月兰的SSR-PCR反应体系,采用正交试验设计方法对影响二月兰SSR反应体系的5个因素(DNA模板、Mg~(2+)、d NTPs、引物和Taq聚合酶)进行优化试验,筛选出每个因素的最佳水平。结果表明,10μL反应体系中,Mg~(2+)浓度2.0 mmol/L,d NTPs浓度0.4 mmol/L,引物浓度0.6μmol/L,DNA模板量20 ng,Taq聚合酶量0.6 U。以3份二月兰基因组DNA为模板,利用优化后的SSR-PCR反应体系进行引物筛选,从50对SSR引物中成功筛选出扩增条带清晰、具有多态性的引物有12对,证明该反应体系具有较好的稳定性和通用性。研究建立和优化的二月兰SSR-PCR反应体系,为进一步利用SSR标记技术开展二月兰分子生物学研究提供了理论依据和技术参考。     

二月兰种子中甘蓝链格孢带菌率检测及6种杀菌剂对病菌的毒力测定

测定了二月兰叶斑病病原菌甘蓝链格孢种子带菌率及6种杀菌剂对其的毒力.结果显示,二月兰种子上存在叶斑病病原菌甘蓝链格孢,其带菌率为31.3％.98％咯菌腈对甘蓝链格孢具有良好的杀菌效果,EC50值为0.0912μg/mL;97％异菌脲、95％戊唑醇和95％吡唑醚菌酯杀菌效果较好,EC50值分别为0.1974μg/mL、0...