人组织型纤溶酶原激活剂原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的初步表达

目的:构建人组织型纤溶酶原激活剂(tissue-type plasminogen activator,tPA)原核表达载体,检测其在大肠杆菌Escherichia coli中的初步表达.方法:以含有人tPA基因的质粒为模板,设计引物扩增出含有RGDS-tPA基因并构建到原核表达载体pET28a中,测序证实为正确的rtPA序列,并将pET28a-tPA转化至菌株E.coli BL21(DE3).用IPTG诱导rtPA在E.coli中表达,并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行验证.结果:琼脂糖凝胶电泳获得目的基因片段tPA的条带约在1 700bp处,鉴定为阳性重组体;聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定获得目的蛋白片段rtPA的条带约53KDa,为非活性的包涵体.结论:人组织型纤溶酶原激活剂原核表达载体构建成功,可在大肠杆菌中有效表达.     

杂色鲍AP-1的克隆及在发育和弧菌感染后的表达分析

激活蛋白1(AP-1)是具有亮氨酸拉链功能域的转录因子,参与了发育和免疫等多个生物学过程。为研究该基因在杂色鲍发育和免疫中的作用,本研究克隆了杂色鲍AP-1基因的全长cDNA(命名为HdAP-1),并分析了HdAP-1在各组织、各发育时期以及副溶血弧菌刺激后的表达特征。结果表明,HdAP-1cDNA全长为1482bp,5′非编码区域(5′UTR)为133bp,3′UTR为401bp,开放阅读框为948bp。该基因编码蛋白预测分子量为34.83ku,等电点为9.43,具有典型AP-1蛋白家族的Jun转录因子功能域和bZIP功能域。HdAP-1在所检测7个组织中均有表达,其中血淋巴表达量最高,鳃、肾、肠和黏液腺的表达量次之,肝胰腺和外套膜表达量最低。自受精卵至囊胚期HdAP-1的表达量显著低于原肠胚(P0.05),由原肠胚到担轮幼虫该基因表达量继续上升,担轮幼虫至匍匐幼虫期均维持较高的表达水平,变态后在稚鲍中的表达量下降。在副溶血弧菌感染24h后,HdAP-1表达量显著上升(P0.05)。其他时段该基因的表达量与对照组相比差异不显著(P0.05)。     

我国南繁基地建设问题的探讨与建议

“南繁”作为我国首创的一种独特育种方式,在农作物品种培育过程中发挥着缩短育种年限,加速世代繁育的特殊作用。目前,在全国推广的5 000多个农作物品种中,约有80%经过了“南繁”的选育或者加代。在总结“南繁”现状的基础上,从充分利用"南繁"这一优势,加快优良农作物新品种的培育,促进粮食生产和农业稳定发展的角度,分析了在“南繁”中存在的规划、管理、基础设施建设和用地矛盾等制约其发展的几个问题,并提出了相应的建议。     

草莓叶盘再生和遗传转化体系的优化

农杆菌介导的叶盘法是目前草莓遗传转化的主要方法,建立高效稳定的叶盘再生体系是获得转基因草莓的必要条件.文章探讨了影响草莓离体叶片不定芽诱导的主要因素,建立了一个稳定的草莓植株再生体系,确定草莓品种弗吉尼亚不定芽诱导的最佳培养基组分为:MS+TDZ 2 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1+2,4-D 0.2 mg·L-1,pH 5.8.发现叶盘近轴面向下放置能显著提高再生频率,且叶片幼嫩程度与草莓不定芽分化率呈正相关.并以此体系对草莓叶盘遗传转化进行优化,发现草莓品种弗吉尼亚遗传转化最佳预培养时间为2 d,最佳侵染时间为7 min.同时,利用该体系,将由不同启动子诱导的组织型纤溶酶原激活剂(Tissue-type plasminogen activator, t-PA)基因对草莓进行遗传转化.     

土壤磷钾激活剂在花卉栽培中的应用

以东北地区广泛栽植的露地花卉作为样材,选择北京圣吉奥生物肥料公司出品的土壤磷钾激活剂进行栽培试验。结果证明:土壤磷钾激活剂能够增加土壤肥力的利用率,有效激活土壤中的有效磷、有效钾,使其含量高达40%以上,使植株进行合理吸收;同时可以促使开花提前约7d、延长花期约10d;在加大花朵冠幅、增艳花卉色泽等方面也具有一定效果。     

活化剂对黑土有效磷含量及玉米产量影响的研究

本试验研究了活化剂对玉米各生育时期土壤有效磷含量和玉米产量的影响,得出以下结果:施用活化剂能有效减缓土壤有效磷下降的趋势,提高玉米产量,其中以活化剂H2(450 kg/hm2)效果最好,其次为柠檬酸铵(15 kg/hm2)和腐植酸(150 kg/hm2),分别比对照(处理3)增产9.32%、5.99%和4.99%。活化剂主要通过增大千粒重和穗粒数来增加玉米产量。相关分析得出,玉米产量与抽穗期土壤有效磷含量的相关性最大,应掌握好抽穗期合理施肥。     

结肠癌组织中中期因子、尿激酶型纤溶酶原激活物的表达及意义

目的了解结肠癌组织中中期因子（MK）、尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）表达及其与结肠癌临床病理特征的关系。方法收集55例病理学确证的结肠癌组织标本（病例组）和30例结肠癌癌旁的正常组织标本（对照组）,采用免疫组织化学方法（SP法）检测其MK、uPA的表达。结果病例组中MK、uPA表达率分别为56.36%、61.82%,对照组分别为13.33%、16.67%,两组的差异均有统计学意义（P〈0.01）。结肠癌组织中MK、uPA表达与癌组织的分化程度、浸润深度、淋巴结转移有相关性,而与性别和年龄无相关性。MK与uPA表达呈正相关（r=0.44,P〈0.05）。结论 MK、uPA表达与结肠癌侵袭、转移密切相关,二者联合检测可作为判断结肠癌发展及预后的指标。     

大豆应用土壤磷素活化剂显效性的研究

根据土壤磷素活化剂对大豆显效性的试验结果表明，施用土壤磷素活化剂，可提高土壤无机磷总量，减少磷肥用量，促进作物生长发育，提高作物产量、增加经济效益，是目前开发活化土壤固定磷素资源的途径之一。     

水稻应用土壤磷素活化剂效果分析

针对土壤中磷素利用率低的问题,进行了2a的磷素活化试验。结果显示:在水稻本田中施用二铵150kg/hm2(常规用量),配施7.5kg/hm2土壤磷素活化剂,可增稻谷13%左右。分析了土壤磷素活化剂的应用条件,指出了土壤磷素活化剂只有在配施一定量二铵的情况下才能发挥活化土壤磷的作用。