牛型提纯结核菌素国家标准品的研制

根据《中华人民共和国兽用生物制品规程》2000年版制备牛型提纯结核菌素(牛PPD)国家标准品候选物4批。根据多糖、核酸和氮含量测定结果,筛选200804批制备为待检国家标准品,其检验结果为:物理性状为乳白色疏松团块,加生理盐水后在5s内溶解;无菌检验合格。200804批准检国家标准品于稀释前各样品变异系数为1.4%,冻干后各样品变异系数为4.8%。效价测定:待检国家标准品4个稀释度引起的豚鼠皮肤红肿面积与国际标准品相对应的稀释度引起的皮肤红肿面积的差值平均值都在10%以内,2者的剂量反应曲线基本平行,即待检国家标准品效价与国际标准品基本相同。200804批待检国家标准品于50℃保存21d之内效价下降程度平均值小于10%,保存28d效价下降程度平均值大于10%。其特异性和安全性均符合要求。     

TetR/AcrR转录因子Ms3469对耻垢分枝杆菌异烟肼抗药性的调控

以耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)为研究对象,通过在药物平板上筛选转录因子超表达文库,发现MSMEG_4369(Ms3469)影响耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)对抗结核一线药物异烟肼(Isoniazid,INH)的敏感性。进一步研究发现超表达Ms3469能增强耻垢分枝杆菌的INH抗性;基因保守结构域分析表明Ms3469编码一个TetR/AcrR家族的转录调节蛋白;凝胶迁移率阻滞实验和细菌单杂交实验证明Ms3469能够与自身启动子直接特异结合。     

多重PCR对禽分枝杆菌亚种鉴定的初步应用

为了建立禽分枝杆菌多重PCR方法，给禽分枝杆菌亚种鉴定及禽结核病的诊断提供参考。本实验根据国外报道的诊断方法设计4对特异性引物，选用我国禽结核参考菌株（CVCC 68201）基因组DNA为模板，优化了退火温度，测定了DNA最小检测量，并进行了特异性检验。采用优化好的多重PCR体系，对国家兽医微生物菌种保藏中心保存的禽分枝杆菌标准菌株进行检测和分类。实验结果表明，禽结核参考菌株（CVCC 68201）能很好的扩增出577 bp（IS901基因片段）、385 bp（IS1245基因片段）和140 bp（dnaJ基因片段）三条目的条带，基因组DNA的最小检测量为0.38 ng/μL，目的条带在退火温度50 ℃～62 ℃之间均能得到有效扩增。对23株禽分枝杆菌菌株检测，并设立牛分枝杆菌作为阴性对照，最终将禽分枝杆菌菌株分为三大类：禽亚种/森林土壤亚种、副结核亚种、人猪亚种，与国家兽医微生物菌种保藏中心的分类结果相比不仅一致且更加详尽而有临床意义。因此，基于分子生物学方法建立的多重PCR方法可以对禽分枝杆菌亚型进行快速鉴定并对禽结核病的诊断提供参考。     

新疆奎屯地区7 个规模化牧场奶牛副结核病的调查及防控

[目的]调查新疆奎屯地区7 个规模化牧场奶牛副结核病的感染情况,提供科学有效防控措施。[方法]2019—2021年持续对奎屯地区7 个规模化牧场长期、顽固性腹泻牛只采集血液分离血清,使用ELISA检测法进行副结核病的检测。[结果]2019年总阳性率为6.55%（636/9 715）,2020年总阳性率为6.80%（705/10 375）,2021年总阳性率为5.23%（615/11 753）。[结论]检疫加淘汰的方法对降低牧场副结核病的阳性率有较好效果。