Effects of dietary L-threonine levels on antioxidant capacity,digestive enzyme activities,and antibody production of Xinyang green-shell laying hens

Xinyang green-shell laying hens (n = 720), 32 wk of age were allocated to 5 dietary treatments groups, each of which included 6 replicates of 24 hens. The control group was given a basal corn-peanut-soybean meal diet containing 0.47% L-threonine (L-Thr). L-Thr levels of the experimental groups were 0.57, 0.67, 0.77, and 0.87%, respectively. The trial lasted 10 wk. Serum concentrations of total superoxide dismutases (T-SOD) and superoxide dismutases (SOD) were maximized at 0.67% L-Thr group. The 0.57% L-Thr group had the highest serum total antioxidative capacity (T-AOC), while the 0.67% L-Thr group had the lowest serum malondialdehyde (MDA) concentration. Hens fed 0.67% L-Thr of the diet resulted in the highest SOD and T-AOC levels in the liver. The activity of amylase and lipase in the jejunum was maximized at 0.77% L-Thr level. Hens fed 0.77% L-Thr in the diet resulted in the highest IgM and IgG levels in the jejunum. In conclusion, we suggest that a L-Thr level above 0.67% may have had an antioxidant capacity and positive effect on digestive enzyme activities and antibody production in the jejunum of Xinyang green-shell laying hens.     

3种ELISA法检测Bt杀虫蛋白的比较研究

运用3种ELISA法对提纯的Bt杀虫蛋白进行检测,结果表明:直接法ELISA和夹心法ELISA的灵敏度相同,都为0.94 ng/孔,但直接法ELISA中Bt蛋白量与OD值间呈极显著的线性关系,夹心法ELISA中Bt蛋白量与OD值间呈显著的线性关系;间接法ELISA的灵敏度较前两者低,使用HRP-IgG的灵敏度为15 ng/孔,Bt蛋白量与OD值间呈显著的线性关系,使用AKP-IgG的灵敏度为3.75ng/孔,Bt蛋白量与OD值间呈极显著的线性关系。     

应用双抗体夹心法ELISA检测IBDV的研究

从抗ＩＢＤＶ高免蛋黄液中提取ＩｇＧ，用作包被抗体和酶标记，建立了检测ＩＢＤＶ的双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ。经抗原阻断，无关病毒对照、取代、验证等项试验，并与常规ＡＧＰ法比较，对来源不同的１００多个样品进行检测，结果表明：该法对患鸡腔上囊、脾脏的检出率均为１００％，比ＡＧＰ法敏感１００倍以上，用肉眼观察阳性与阴性之间颜色差异显著，不存在非特异性反应。试验证明该法具有满意的待异性、敏感性、快速性和稳定性，是ＩＢＤ早期病原学诊断和流行病学调查的有效手段。     

鸡产蛋下降综合症(EDS—76)灭活油乳剂苗的研究 Ⅰ.灭活油乳剂苗的制备

在本试验中,司本-80和硬脂酸铝加入油相,吐温-80加入灭活的EDS-76尿囊毒为水相制备成油乳剂苗。福尔马林灭活病毒制备的疫苗其免疫效果高于热灭活病毒制备的疫苗,免疫后三周,前者的HI抗体水平达9.5log_2,而后者仅为4.0log_2.福尔马林灭活病毒制备的疫苗于腹腔、皮下注射小白鼠、豚鼠、兔子和10倍剂量接种产蛋鸡,结果均无不良反应;该疫苗为完全油包水剂型、不导电,滴于冷水表面不扩散,亲水亲油平衡值(HLB)为6.67;镜下所见疫苗颗粒为0.5μ直径大小。4℃存放6个月稳定,有效期至少6个月。     

H5N1亚型禽流感灭活疫苗免疫鸵鸟后抗体消长规律及免疫程序的研究

为了探讨鸵鸟对H5亚型禽流感灭活疫苗的免疫原性,做好鸵鸟禽流感的防控工作,采用哈尔滨兽医研究所研制的重组H5N1亚型禽流感疫苗,不同剂量免疫鸵鸟,用HI方法检测母源抗体和免疫抗体,根据母源抗体的衰减和免疫抗体的消长规律确定首免和再免日龄.结果表明,雏鸵鸟母源抗体能维持约3周～8周;8周龄时分组首免,C1组产生的免疫反应优于C2组,抗体峰值能达到7.50 log2,维持时间为9周左右;17周龄时C1组以3.0 mL/羽进行二免,2周后抗体达到7.40log2,3周～7周抗体维持在高峰值,最高达8.80log2,以后逐渐下降,有效抗体水平能维持至接种后25周左右.二免后25周进行三免,以5 mL/羽三免后2周抗体可达到9.80log2,2周～4周抗体维持在最高峰,以后缓慢下降,期间抗体时有起伏,但有效抗体水平约可维持1年时间.三免后45周内抗体水平合格率均在70%以上.根据抗体消长规律,初步推荐了鸵鸟的免疫程序.     

肉鸡及其鸡胚中CAV和ALV的PCR检测

应用PCR技术对山东省3个中小型AA肉种鸡场的鸡胚、1日龄雏鸡和子代肉鸡CAV和ALV的感染情况进行了检测。用相同的方法直接采集样品的不同组织提取2种病毒DNA,进行PCR扩增及PCR产物的克隆和序列测定。结果表明:被检的3个肉种鸡场均有这2种病毒的感染,其中CAV的阳性率24.22%,ALV的阳性率17.56%,二者共感染的阳性率8.89%。感染鸡各组织中病毒含量也有差异,CAV以脾脏最多,ALV以肾脏最多。对肝脏进行细菌分离培养,并对40日龄商品肉鸡进行ND血凝抑制(HI)抗体效价检测,发现大肠杆菌等细菌感染阳性率较高,ND-HI抗体效价显著偏低。说明该地区肉种鸡场和商品鸡场均存在严重的CAV和ALV感染以及与细菌性疾病的共感染,并导致鸡只的机体免疫力下降。     

新基因RSTA14-44在大肠杆菌中的表达及抗体制备

RSTA14-44 基因是中国协和医科大分子生物学试验室在研究中获得的一个新基因,全长 1124 bp,可读编码框自 100bp~684 bp,编码 194 个氨基酸,预测其编码蛋白质分子量为 21.8 KDa。构建了包含 RSTA14-44 cDNA 全部编码框的 pET30a(+)-14 表达载体质粒,经过聚丙烯酰氨凝胶电泳纯化,免疫家兔制备了抗 RSTA14-44 抗体。Western免疫印迹分析表明,该抗体具有较高的反应性和特异性,适合用作 RSTA14-44 蛋白的进一步研究。     

双抗体夹心ELISA在转基因生物检测中的应用研究

随着转基因产品种类和数量的不断增加,转基因生物及其产品的安全性也越来越受到关注,各国一直以来也都高度重视转基因生物及产品的管理.作为转基因生物安全评价的第一步,转基因生物的准确检测显得格外重要.该文综述了双抗夹心ELISA方法的原理、技术要点及其在转基因植物及产品检测中的应用,并对该方法在转基因动物检测中的应用前景进行分析,为双抗夹心ELISA方法的合理利用提供依据.     

家蚕组织蛋白酶O（BmCatO）基因鉴定及表达分析

【目的】克隆家蚕（Bombyx mori）蛋白酶O基因Cathepsin O（BmCatO）,分析其mRNA表达特征,通过原核表达、蛋白纯化和多次免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体,为进一步探究组织蛋白酶O在家蚕变态发育中的功能奠定基础。【方法】利用RACE技术克隆获得家蚕组织蛋白酶O的全长cDNA序列,然后采用RT-PCR对其时空表达特征进行研究。从NCBI下载其他物种组织蛋白酶O基因序列,利用Clustalx和MEGA 6.0软件进行同源比对和进化分析。选取特异性较高的片段设计特异性引物,将PCR扩增产物连接至PET32a质粒,转化至E. coil表达菌株Rosetta(DE3),经IPTG诱导获得组织蛋白酶O重组蛋白,然后利用Ni+亲和层析方法对重组蛋白进行纯化,最后多次免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体。【结果】家蚕组织蛋白酶O基因存在于家蚕第14号染色体上,scaffold为nscaf2943,基因编号BGIBMGA009231。该基因有两种剪切形式,剪切体1开放阅读框（ORF）全长为1 071 bp,编码356个氨基酸,预测蛋白分子量36 kD,等电点8.594;剪切体2 ORF全长为942 bp,编码313个氨基酸,预测蛋白分子量40 kD,等电点7.951。两种剪切体均有6个外显子和5个内含子构成,剪切体2的第六外显子出现部分缺失。两种剪切体编码的蛋白结构相似,均含有信号肽、Inhibitor129和Pept-C1结构域。进化分析结果表明,无脊椎动物组织蛋白酶单独聚为一类,且家蚕组织蛋白酶O与同为鳞翅目成员的二化螟（Chilo suppressalis）组织蛋白酶O最为接近。RT-PCR结果显示该基因特异性持续表达于幼虫血细胞,剪切体1的表达水平明显高于剪切体2,但这两种剪切体在幼虫血细胞发育时期表达趋势一致。构建家蚕组织蛋白酶O原核表达系统,利用亲和层析纯化获得高纯度的家蚕组织蛋白酶O重组蛋白,并利用纯蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,ELISA显示其效价高达到1﹕1 280 000。Western印迹结果表明,该抗血清可以特异性识别家蚕组织蛋白酶O重组蛋白。【结论】获得了家蚕组织蛋白酶O基因的完整cDNA序列及表达特征,经原核表达、纯化获得高纯度的融合蛋白,通过多次免疫新西兰大白兔成功获得抗体。     

浙江地区鹅星状病毒分离鉴定及其衣壳蛋白多克隆抗体的制备

鹅星状病毒(GAstV)是当前鹅养殖业的重要病原,易引起雏鹅内脏痛风症状和死亡,造成巨大经济损失。于浙江省内采集30份病料,进行核酸检测、病原分离和测序,并克隆其ORF2序列至pET-28a原核表达载体,转化BL21菌株后经诱导获得衣壳蛋白,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。结果显示,临床死亡雏鹅剖检均发现典型内脏痛风症状,核酸检测鉴定为鹅星状病毒阳性,且出现不同基因型鹅星状病毒混合感染情况。共分离得到ZJC14和ZJLD20两个毒株,其中,ZJLD20在鹅胚和LMH细胞中均稳定增殖,但ZJC14并不能适应LMH细胞。病毒基因组测序显示,ZJC14与ZJLD20亲缘关系较远,ZJC14属于GAstV-Ⅰ基因型,而ZJLD20为GAstV-Ⅱ基因型。重组表达载体pET28a-ORF2诱导后获得纯化目的蛋白,经免疫成功制备兔源多克隆抗体,该抗体可与目的蛋白结合。此外,间接免疫荧光和Western-blot试验结果显示,ZJLD20衣壳蛋白制备的多克隆抗体可与病毒结合反应。研究成果有利于后续对该病原致病能力的研究,同时,试验制备的ORF2衣壳蛋白与多克隆抗体为鹅源星状病毒感染的诊断试剂开发奠定了基础。