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151.
本文介绍了 Spodoptera frugiperda 病毒多角体及病毒粒子的提纯方法。粗提材料先通过40%蔗糖,在10000r/min 下离心15分钟,随后悬浮于0.01M Tris 缓冲液,25~65%蔗糖的连续梯度中,于40000 r/min 下离心30分钟。取出多角体的条带,洗除游离残存的蔗糖,透析过夜。将多角体在4℃,0.01MNa_2CO_3,0.01MEDTA,0.17M NaCl,pH=1下,作用1小时,随后调节 pH 到8.5~8.9,2000g,离心10分钟。该制剂在4℃下,25~60%蔗糖梯度中,24000r/min,离心2小时。随后取出病毒粒子,重新悬浮于蒸馏水中,于—70℃下贮藏备用。每个 BALB/C 小白鼠免疫4~5次,最后一次注射是在融合前4~7天。将2×10~8脾细胞与2×10~7P_3×63或 SP-2骨髓瘤细胞混合,并用50%PEG(Sigma)融合,用间接酶联免疫法进行筛选阳性杂交瘤细胞,强阳性者进行克隆化。以多角体及病毒粒子为抗原者,均建立了10株能产生特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,该抗体的效价较高,并进行了血清学的分类。 相似文献
152.
Background: Helicobacter pylori, a gram-negative bacterial pathogen that expresses a strong urease activity, is associated with the development of gastroduodenal disease. Urease B subunit, one of the two structural subunits of urease, was expressed in E. coil BL21 (DE3) strain. The objective of this study was to evaluate the effects of He/icobacter py/ori urease B subunit on the immune responses in mice by subcutaneous immunization. Methods: The mice were immunized and boosted with Helicobacter pylori urease B subunit antigen subcutaneously three times with 2-wk intervals between the immunizations and boosters. The mice in the control group were immunized with PBS. The adjuvant group received PBS containing complete/incomplete freund's adjuvant identical to antigen group without Helicobocter pylori urease B subunit antigen. Four weeks after the final booster, all the mice were sacrificed. Blood was collected on d 0, 14, 28 and 56 before immunization, booster and sacrifice, respectively. Immediately after sacrifice, gastric liquid and spleen were collected for antibody and cytokine analyses. Results: Urease B subunit increased the concentrations of serum and gastric anti-urease B antigen specific IgG, and the levels of interteukin-4 and interferon-y in splenocytes of the mice (P 〈 0.05). Conclusions: This study demonstrated that recombinant responses in mice by subcutaneous immunization, which against Helicobocter pylori. urease B subunit can induce systemic and local immune might be used as the effective component of vaccine 相似文献
153.
154.
155.
The anti-chlorpyrifos polyclonal antibodies were obtained by using the artificial immune antigen to immune in New Zealand′s white rabbits. The enzyme-tagged antibodies were prepared by coupling horseradish peroxidase (HRP) to the purified antibody with the modified sodium periodate method. The indirect competitive enzyme linked immuno-sorbent assays (ELISA) and the HRP-taggedantibodydirect ELISA (E-Ab) were established, respectively.The limit of detection (LOD) for the indirect ELISA and E-Ab were 0.0033 and 0.0042 μg mL-1, respectively. The linear detection ranged well from 0.005 to 2.0 μg mL-1. 相似文献
156.
吡虫啉人工抗原的合成与鉴定 总被引:8,自引:2,他引:8
以吡虫啉原药与β-巯基丙酸为起始原料,在碱性条件下反应,合成了半抗原{1-[6-(2-羧基乙硫基)-3-吡啶基甲基]-N-硝基亚咪唑烷-2-叉胺}。利用该半抗原与牛血清蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联得到了人工抗原,经免疫动物后,获得了高效价的特异性多克隆抗体,抗血清效价为2.56×104。经酶联免疫反应(ELISA)测定,吡虫啉对抗体的抑制中浓度(IC50)为 20.7 ?g·L-1,最低检测限(IC20 )为1.1 ?g·L-1,检测范围在1~1 000 ?g·L-1内线性关系较好,吡虫啉结构类似物交叉反应率均小于1.4%。 相似文献
157.
【目的】表达口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV)非结构蛋白VPg1-2、VPg2-3、VPg3,用于FMDV感染与灭活疫苗动物鉴别诊断和其蛋白功能研究。【方法】对O 型口蹄疫病毒太保毒株3ABC 基因片段中的 VPg1-2 (3B1-2)、VPg2-3 (3B2-3)、VPg3 (3B3)基因进行扩增和亚克隆,并将它们分别插入pGEX-4T-1 表达载体构建了重组表达质粒,经IPTG诱导后,进行Western blotting 分析。以纯化的VPg1-2表达蛋白为抗原建立间接ELISA,对背景清楚的实验牛血清进行检测。【结果】表达的VPg1-2、VPg2-3蛋白可与FMDV阳性血清发生特异性反应,表达的VPg3蛋白没有反应。VPg1-2表达蛋白与对照组(C组)和灭活疫苗反复免疫组(CI组)牛血清均不发生反应,与未免疫直接攻毒组(D组)血清均发生反应,与部分免疫后攻毒组(I组)(4/7)血清发生反应,与部分I组(3/7)血清不发生反应;D组和I组VPg1-2表达蛋白抗体持续时间最长可达90 d以上,最早检出相应抗体的时间为攻毒后第10天。【结论】表达的VPg1-2抗原用于健康牛群、免疫后未感染牛群以及未免疫感染牛群的鉴别诊断的特异性、敏感性达到100%,对免疫后感染牛群进行检测时可能有一定的漏检现象。 相似文献
158.
【研究目的】建立可在临床上检测鸡传染性支气管炎抗体的银加强金标免疫技术(SECGA);【方法】将胶体金标记纯化的兔抗鸡IgG,然后将IBV纯化抗原包被于NCM上(0.4ug/片),封闭后在膜片上滴加不同稀释度(10×2X)的血清,作用10分钟,洗涤后浸于1:4金标兔抗鸡IgG液中作用60分钟,再银染10分钟观察结果;【结果】SECGA能检出IB阳性血清的抗体>10×27,而不与ND、EDS76、IBD阳性血清发生有意义的交叉反应(抗体滴度<10×22)。对鸡IgG的最小检测量为0.88ng。用SECGA、气管环中和试验、ELISA试验检测IB抗体有明显的相关性;【结论】银加强金标免疫技术(SECGA)可用于IB抗体的检测,具有敏感、特异、简单、快速、适于现场诊断等优点,适宜于广大基层单位使用。 相似文献
159.
160.
口蹄疫病毒3ABC、3AB、3BC基因克隆、表达及其抗体消长规律的研究 总被引:3,自引:3,他引:3
成功克隆了FMDV太保毒株3ABC全基因片段,并将ABC、3AB、3BC片段插入pGEX-4T-1表达载体构建了重组表达质粒,经Western blotting 分析表明,表达的3ABC、3AB蛋白与FMDV阳性血清有反应性,表达的3BC蛋白反应性差。以纯化的3ABC、3AB表达蛋白为抗原建立间接ELISA方法,对背景清楚的试验牛血清进行检测。结果3ABC、3AB表达蛋白与空白对照组(C组)、灭活疫苗反复免疫组(CI组)和部分免疫后攻毒组(I组)牛血清均不发生反应,与未免疫直接攻毒组(D组)和部分I组血清均 相似文献