猪外周血单个核细胞增殖反应影响条件的探讨

应用 Ｌ１６ （４５） 正交试验, 对影响猪 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 增殖反应的几个因素, 包括培养时间、 Ｐ Ｈ Ａ 浓度、细胞浓度等三个因素四个水平进行了比较和探索。试验表明几个因素对 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 的增殖反应均有显著的影响（ Ｐ＜ ００５） , Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 增殖反应的 Ｍ Ｔ Ｔ 比色法的最佳反应条件组合为 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 浓度为１ ×１０６／ｍｌ, 植物血凝素 Ｐ Ｈ Ａ 的浓度为１２５μｇ／ ｍｌ, 细胞培养时间为２４ 小时; 影响增殖反应的先后顺序为 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 浓度、 Ｐ Ｈ Ａｐ 浓度及细胞培养时间。同时确定了最有利于 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 增殖的犊牛血清浓度为１０ ％ 。     

水杨酸比色法测定水中硝酸盐氮的含量

应用水杨酸比色法替经典酚二磺酸比色法直接测定水中硝酸盐氮的含量,最大吸收波长４１０ｎｍ,硝酸盐氮含量在０－５０ｍｇ／Ｌ的浓度范围内符合朗伯－比耳定律,回归方程为Ａ＝０．５１３Ｃ＋０．０３３,线性相关系数ｒ＝０．９９９５,表观摩尔吸光系数ε＝７．８＊１０＾３Ｌ／ｍｏｌ．ｃｍ精密度较高,回收率为９７％－１０４％。     

国槐花与刺槐花中黄酮的质量差异比较

国槐(Sophora japonica L.)花和刺槐(Robinia pseudoacacia L.)花为近缘品种,均有药食两用价值,并富含黄酮类物质.采用药典中槐花的标准来探讨两者黄酮差异,以利于经销和临床上区分.试验以芦丁为对照,对2种槐花进行薄层色谱定性比较、比色法测定总黄酮含量及高效液相色谱法测定芦丁含量.国...     

赭曲霉毒素A诱导Caco-2细胞的细胞毒性及DNA损伤

【目的】研究不同浓度和时间处理下,赭曲霉毒素A(OTA)对人结肠癌细胞(Caco-2)的细胞生长抑制、氧化损伤以及DNA损伤的影响.【方法】采用0.32、1.6、8、40、200μmol/L OTA处理Caco-2细胞24、48、72h后,利用甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率,利用活性氧(ROS)试剂盒检测细胞内的自由基水平,利用彗星试验检测细胞的DNA损伤.【结果】在各个处理时间段内,OTA浓度大于0.32μmol/L时,OTA对细胞存活率都有显著的抑制作用(P0.05);细胞内ROS以及DNA损伤都随OTA浓度的增加而显著升高(P0.05),尤其在0~8μmol/L低浓度范围内,OTA显示了强烈的毒性.【结论】OTA可导致Caco-2细胞存活率降低,引起细胞氧化应激以及DNA损伤,其中ROS水平升高可能是OTA导致Caco-2细胞DNA损伤的原因.     

哲罗鱼胰岛素样生长因子-II的原核表达与活性分析

在鱼类胚胎发育过程中,胰岛素样生长因子-II(insulin-like growth factors-II,IGF-II)起着关键的作用。本研究根据Gen Bank收录的鲑鳟鱼IGF-II基因序列设计引物,以哲罗鱼(Hucho taimen)肝RNA提取物为模板,利用RT-PCR方法扩增出哲罗鱼IGF-II基因开放阅读框。将目的基因IGF-II与原核表达载体p SUMO连接构建出重组表达载体p SUMO-IGF。将该重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta中进行目的蛋白的诱导表达。SDS-PAGE电泳分析显示,约在40 k D处含有清晰的条带,与预期结果相符;目的蛋白以包涵体形式存在。对包涵体进行变性/复性后获得较纯的目的蛋白,利用ELISA和MTT方法对目的蛋白进行免疫学活性及生物学活性分析。ELISA结果显示该目的蛋白能够与商品化的抗鲑鳟鱼IGF-II的抗体发生特异性反应,并且呈现抗原浓度依赖性,该结果说明本研究获得了具有良好免疫原性的IGF-II蛋白;MTT方法测定IGF-II蛋白对鲤(Cyprinus carpio)上皮细胞(epitheliaoma papulosum cyprini,EPC)和虹鳟(Oncorhynchus mykiss)性腺细胞(rainbow trout gonad,RTG-2)的增殖效果来鉴定IGF-II蛋白的生物学活性,结果显示所表达的哲罗鱼IGF-II蛋白能够有效的刺激EPC细胞和RTG-2细胞增殖。该结果表明利用原核表达系统获得的哲罗鱼IGF-II蛋白具有良好的生物学活性。本研究为哲罗鱼的生长模式和生长繁殖的研究奠定了基础。     

玉屏风散对鸡脾脏淋巴细胞体外增殖的影响

将不同浓度的玉屏风散加入到鸡脾脏淋巴细胞中,培养24、48、72 h,采用MTT法观察其对鸡脾脏淋巴细胞增殖的影响.结果表明,不同浓度的玉屏风散均能协同ConA促进鸡脾脏淋巴细胞增殖的作用,并以500 mg/mL的玉屏风散培养48 h增殖作用最强.     

4种蛙皮肤活性肽的提取及生物活性比较

利用80%甲醇和乙醚刺激方法,分别提取了4种两栖类动物皮肤粗提物和分泌物,并进行了生物学活性的测定.结果表明,4种蛙皮肤粗提物具有广谱抗菌活性,其中中国林蛙有轻微的溶血性,牛蛙与美国青蛙粗提物具有胰蛋白酶抑制剂活性;而4种蛙皮肤粗提物均无胰蛋白酶活性,牛蛙、美国青蛙与东北林蛙具有很强的凝集素活性.利用MTT法检测到4种蛙皮粗提物具有抗肿瘤细胞与抗病毒活性.     

MTT法检测鸡脾脏和外周血NK细胞杀伤活性的条件优化

选取不同日龄的SPF鸡和肉鸡,用贴壁法从血液和脾脏分离出NK细胞作为效应细胞,选择瘤细胞MDCC-MSB1和MDCC-MSBCU147分别作为靶细胞,二者按比例混合,孵育,利用MTT法检测靶细胞的活力反映效应细胞对靶细胞的杀伤活性,并对效靶比、作用时间进行比较.结果显示,MSB-1和CU147均可作为NK细胞良好的靶细胞,但CU147更稳定;效靶比为20:1～50:1,作用时间8～16 h杀伤效果稳定;50%DMF-20%SDS混合物作为裂解液能够对结晶彻底溶解,优于其他溶解试剂.     

人参中人参多糖检测方法研究

目的测定人参中人参多糖的含量,并建立人参多糖的含量测定方法。方法采用紫外分光光度法,苯酚-浓硫酸比色法于波长486nm处测定吸光度。结果人参多糖含量为13.31g/100g,标准曲线的线性范围为0.9991~0.9998,平均加样回收率为98.2%,RSD=2.23%。结论苯酚-浓硫酸比色法测定人参中多糖含量,方法简便、准确、稳定性好。     

4-氨基安替比林比色法的局限性

以9种酚类物质和酚酸类物质为材料,探讨4-氨基安替比林比色法测定酚酸类物质的局限性。结果表明,这9种物质在所测定浓度范围内的线性关系良好,相关系数为0.9848～0.9999。实验表明,除了单羟基的苯酚和邻甲苯酚的回收率为100%,双羟基的酚(邻苯二酚、间苯二酚),以及含有羧基的酚酸类化合物的回收率均低于22%,说明该方法不适合于对二酚和酚酸类化合物的测定。