酪氨酸蛋白激酶受体c-Met及靶点药物研究进展

酪氨酸激酶受体c-Met在细胞的代谢、分化以及死亡细胞的信号传导过程中起着重要的作用,其与配体结合,可活化其信号通路,参与胚胎发育、组织损伤修复以及肿瘤的发生和发展。因而,以酪氨酸激酶受体c-Met为靶点的抗肿瘤药物已经成为肿瘤研究中十分活跃的领域,为抗肿瘤治疗提供了新方法。     

花生中促丝裂原蛋白活化激酶6a(AhMAPK6a)的克隆与表达分析

促丝裂原蛋白活化激酶(MAPK)是一类保守的丝氨酸/苏氨酸(Ser/Thr)蛋白激酶,是一类植物对逆境胁迫反应途径中的关键家族基因。本研究利用已经构建的花生种子全长cDNA文库,以拟南芥MAPK序列为模板,结合大规模EST测序和RACE克隆等方法,从花生中克隆得到了一个MAPK基因,命名为AhMAPK6a,并在GenBank上注册,注册号为KP329549。其cDNA序列全长1492bp,开放阅读框(ORF)含有1191bp,编码一条含有397个氨基酸的蛋白序列。不同物种中MAPK基因的氨基酸序列比对发现,该基因含有典型的Ser/Thr保守基序,与拟南芥、大豆、本生烟的同源性分别为86%、94%和90%。不同组织部位的荧光定量(qPCR)分析表明,该基因在叶片中的表达量最高,其次在根中,在茎、花、子叶和下胚轴中的表达量极低,表明该基因可能在花生的根和叶的生长发育中发挥较大作用。在脱落酸(ABA)和聚乙二醇(PEG)胁迫下,表达量发生明显变化,可以推测该基因在干旱胁迫反应中发挥重要作用。     

纳豆激酶的亲和吸附工艺研究

采用静态吸附方法验证了大豆颗粒对纳豆激酶的亲和吸附特性,测定了其静态吸附动力学特性和吸附等温线以及一些吸附条件。结果表明:该亲和吸附等温线符合Langmiur方程,吸附动力学符合扩散方程;吸附的最佳缓冲液选择pH6.0、0.01 mol.L-1的PBS,在静态时选用大豆颗粒的最大吸附量为6351.58 IU.g-1,洗脱后收率达到81.30%,纯化倍数约30.23倍。初步推断大豆蛋白中含有与纳豆激酶特异性吸附的的配体结构。     

纳豆激酶的分离纯化及体外溶栓特性研究

通过硫酸铵分步沉淀和Sephadex G-100凝胶过滤层析,分离纯化纳豆激酶,并用SDS-PAGE和PAGE电泳检测纯化效果,体外溶栓试验检测纳豆激酶的溶栓特性。SDS-PAGE显示纳豆激酶为单一条带,分子量为33kDa,而PAGE至少有3个具有纤溶活性的区域,表明纳豆激酶可能由几种同工酶组成,体外溶栓结果表明:与蚓激酶相比,纳豆激酶具有较强的的体外溶栓和抗凝作用,并有一定的溶血作用。     

不同SO2保鲜剂对先锋甜樱桃采后保鲜效果的研究

以采后先锋甜樱桃果实为试材,研究不同SO2保鲜剂(1/2或1/4张SO2速释保鲜纸,6包SO2缓释保鲜片,1/4张SO2速释保鲜纸+3包缓释保鲜片)的保鲜效果。结果表明,在0℃结合MAP包装(装量5 kg)条件下,采用1/4张SO2速释保鲜纸+3包缓释保鲜剂处理的先锋甜樱桃贮藏60 d,果实色泽良好,果梗鲜绿,药害轻微,腐烂率显著低于对照(P<0.05),好果率可达90%以上。     

泡桐丛枝植原体胸苷酸激酶的原核表达、纯化及酶活性测定

胸苷酸激酶是d TTP从头合成和补救途径的关键酶,催化d TMP形成d TDP,在DNA复制和生物的生存中发挥着必不可少的作用。本文在前期研究的基础上,对从泡桐丛枝(Pa WB)植原体中获得的的3个同源蛋白TMK-a-1、TMK-a-2及TMK-b与已报道的小麦蓝矮(WBD)、洋葱黄化(OY-W)植原体的TMK-a、TMK-b的氨基酸序列进行了比对和相似性分析,结果显示Pa WBPS TMK-b与WBD TMK-2和OY-W TMK-b之间的相似性分别为95.65%和99.03%;Pa WBPS TMK-a-1与Pa WBPS TMK-a-2的相似性为90.57%,且二者与WBD TMK-1和OY-W TMK-a之间的相似性为87.32%-94.26%;而Pa WBPS、WBD、OY-W三种植原体的TMK-a与TMK-b之间的相似性仅为22.22%-25.95%。构建了Pa WBPS TMK-b、TMK-a-1、TMK-a-2的p ET28a原核表达载体,对Pa WBPS TMK-b、TMK-a-1、TMK-a-2 3种蛋白进行了原核表达,经Ni-NTA柱纯化后,利用双酶法进行了胸苷酸激酶催化活性测定,结果表明,Pa WBPS TMK-b具有较高的胸苷酸激酶活性,为85.96±0.74 U·mg-1,而Pa WBPS TMK-a-1和TMK-a-2几乎没有胸苷酸激酶活性。本文为进一步研究胸苷酸激酶在植原体繁殖过程中的作用机理奠定了基础。     

反刍月形单胞菌乙酸生成缺陷株的构建及相关酶活性分析

[目的]构建反刍月形单胞菌乙酸生成的缺陷株并分析其发酵特性。[方法]应用转座子标签法,通过转座子供体菌E.coliS17-1/pZJ25∷Tn5对受体菌反刍月形单胞菌进行转座子诱变,采用含卡那霉素和氟乙酸纳的选择性培养基筛选接合子。[结果]共筛选出稳定的对卡那霉素和氟乙酸具有抗性的转座工程菌7株。对反刍月形单胞菌的突变株进行16S rRNA鉴定和Tn5的PCR鉴定,及乙酸激酶（AK）和磷酸乙酰转移酶（PTA）酶比活力分析,确定突变株属于pta基因缺失型氟乙酸抗性菌株。[结论]该研究为进一步研究反刍兽瘤胃微生物乙酸的细胞代谢网络和调控奠定基础。     

精氨酸激酶过敏原的研究进展

精氨酸激酶是一类具有重要功能的酶,在生命体的能量代谢中起着较大的作用,其广 泛存在于多种昆虫和高等生物中。近年来,随着对精氨酸激酶研究的不断深入,发现其在多种 可食用生物中的食物过敏作用。本文介绍了精氨酸激酶的性质、重组表达和鉴定以及不同方法 对其过敏原性的影响等。     

自发气调包装和乙烯吸收剂对水蜜桃贮藏品质的影响

为寻找既有效又适合在广大果农中推广,而且符合食品安全的水蜜桃保鲜方法,以江苏省张家港市凤凰镇的凤凰水蜜桃(Prunus persica)为材料,研究了在冷藏和室温条件下用自发气调包装(MAP)和乙烯吸收剂处理果实的保鲜效果.结果表明:无论是在冷藏还是在常温条件下,经过MAP包装和乙烯吸收剂处理的水蜜桃各项指标均优于对照组,表明MAP包装和乙烯吸收剂处理有较好的保鲜作用,保持了果实硬度、可溶性固形物和可溶性糖含量,降低了细胞膜透性,特别在抑制呼吸强度和PPO活性方面,保鲜效果显著好于对照组,但对MDA含量无明显影响.MAP 包装和乙烯吸收剂处理成本低廉,方法简便易行,没有环境污染.利用MAP包装和乙烯吸收剂进行水蜜桃保鲜处理是经济有效,可操作性强,适合在广大果农中推广的保鲜方法.     

湖北乌羊血液生化指标测定及其相关性分析

湖北乌羊是分布在我国湖北特有的地方山羊新种质,表现为"乌骨乌肉"的特点,受到学术和产业界的重视。本研究测定了湖北乌羊12项血液生化指标,旨在从生化特性方面研究该品种的种质特征。结果表明:湖北乌羊育成羊的磷酸肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)极显著高于成年羊(P<0.01),而低密度胆固醇(LDL-C)极显著低于成年羊(P<0.01);与猪、鸡、牛等畜禽相比,湖北乌羊球蛋白(GLOB)含量较高。这些差异可能与湖北乌羊较强的抗病性有关。LDH与谷草转氨酶(AST)、GLOB与总蛋白(TP)、HDL-C与总胆固醇(TC)之间存在显著正相关(P<0.01),而白蛋白(ALB)与GLOB间存在极显著负相关(P<0.01)。