不同方法提取狗脊蕨叶片总RNA的比较分析

[目的]为构建狗脊蕨叶cDNA文库,保存珍贵基因资源,克隆和研究与有效成分合成相关的基因等提供技术参考。[方法]以狗脊蕨叶片为材料,采用CTAB法、一步法、酚-SDS法和RNA试剂盒提取分离法提取总RNA,通过比较分析确定最优方法。[结果]这4种方法都能提取出182、8 S的RNA,但CTAB法和试剂盒提取分离法的总RNA质量较高,CTAB法还提取出清晰的5S RNA。一步法和SDS法带型模糊,有降解现象。CTAB法提取的狗脊蕨叶片总RNA质量较好,28S1、8S和5S条带清晰,且无明显降解。CTAB提取法OD260/OD280的值在1.93~2.06,试验中其OD260/OD280值为2.012,接近2.0,纯度较高。一步法和SDS法OD260/OD280>2.0,试剂盒法OD260/OD280<2.0。[结论]CTAB法适合提取的狗脊蕨叶片总RNA,质量较好,可用于cDNA合成、文库构建等后续分子生物学试验。     

授粉对度尾文旦柚果皮相关酶活性的影响

研究了利用度柚6号、琯溪蜜柚授粉处理对度尾文旦柚果实发育后期果皮多聚半乳糖醛酸酶(PG)、纤维素酶(CX)及苯丙氨酸裂解酶(PAL)活性的影响。结果表明:授粉处理后,度尾文旦柚果实发育后期PG活性呈上升趋势;CX活性呈下降趋势;PAL活性呈先上升后下降的趋势。     

家稗丙酮酸磷酸双激酶序列分析及三维结构建模

【研究目的】目前已从许多种植物中克隆了其PPDK基因,但是对于其蛋白结构的分析尚未报道,此文通过生物信息学方法对家稗PPDK的序列进行了分析,并对其三维结构进行了建模分析;【研究方法】利用DNASTAR、Vector NTI 9、SignalP等生物信息学平台对[Echinochloa crusgalli var frumentacea(Roxb.)W.F.Wight]丙酮酸磷酸双激酶(Pyruvate orthophosphate dikinase)进行了序列分析和三维结构建模;【研究结果】家稗丙酮酸磷酸双激酶(PPDK)同来自于高等植物的PPDK具有较高的同源性,无信号肽,存在17个跨膜结构区,二级结构是由许多螺旋、转角和少量折叠构成。同时在一二级结构分析的基础上,利用同源建模的方法完成了三维结构的建模。【结论】家稗PPDK蛋白同来自高等植物中的更为相近,无信号肽,有17个跨膜结构区,其三维结构为一同源四聚体。     

入侵植物香丝草化感作用的生物测定

用入侵植物香丝草[Conyza bonariensis(L.)Crong]地上部分的水浸提液对几种作物种子进行发芽试验,通过发芽率、根长以及苗高来研究香丝草的化感作用。结果表明,香丝草的化感作用是存在的,其水浸提液在高浓度下对供试作物种子活力、根长和苗高均有明显的抑制作用,而在低浓度下则对小麦苗高、绿豆和萝卜的根长具有促进生长的作用;香丝草水浸提液含有酚类物质。     

牵牛花粉表面蛋白SDS-PAGE分析

花粉表面蛋白在植物自交亲和反应中起着重要作用。为了探讨植物自交亲和性分子机制,以裂牵牛的花粉和柱头为材料,对其花粉表面蛋白和柱头表面蛋白进行了SDS-PAGE分析,通过对比不同的提取方式获得的花粉表面蛋白的电泳谱带,获得了最佳的样品提取方法。通过分析花粉和柱头表面蛋白的电泳波谱发现,花粉表面蛋白和柱头表面蛋白的电泳谱带中有2条共同的蛋白带,推断这2条谱带可能与花粉的识别反应有关。为了证明SDS-PAGE电泳获得的信息是来自花粉表面的蛋白,而不是来自花粉吸水涨裂后花粉原生质蛋白,对水浸提后的牵牛花粉粒进行显微镜观察,发现很少有破裂的花粉粒,进一步确定了传粉受精过程中是花粉表面蛋白与雌蕊组织间的识别反应。     

ZTC1+1-Ⅱ澄清剂对银杏叶醇提液的絮凝工艺研究

[目的]采用ZTC1＋1-Ⅱ型天然澄清剂对银杏（GinkgobilobaLinn.）叶醇提液进行絮凝提取,优化生产工艺,提高药液的澄清度和药液质量。[方法]ZTC1＋1-Ⅱ型澄清剂组分A、B2种。用蒸馏水和1%醋酸溶液配制成1%的溶液,预溶胀24h,用双层纱布过滤,即得澄清剂组分A或B。之后,以絮凝物重量为衡量指标,研究不同影响因素对絮凝效果的影响。[结果]确定了ZTC1＋1-Ⅱ型天然澄清剂对银杏叶醇提液进行絮凝的最佳工艺条件为：澄清剂组分加入次序为先加组分B后加组分A,银杏叶醇提液pH值为5.5,100ml醇提液中组分B、A的用量分别为1.6、0.8g/L,澄清温度为40℃,澄清时间为40min。[结论]该研究可简化后续工艺程序和降低生产成本。     

一个谷子新抗锈基因的AFLP标记

【目的】研究谷子抗源的抗锈遗传规律,寻找和定位与谷子抗锈基因连锁的分子标记,为谷子抗锈病基因的定位、克隆和抗病育种等研究奠定基础。【方法】用谷子锈菌单胞菌系93-5接种十里香和豫谷1号及杂交后代F1、F2进行抗锈鉴定,并根据鉴定结果构建抗、感基因池;利用AFLP技术筛选128对EcoRⅠ/MseⅠ引物组合,从中寻找和定位与谷子抗锈基因连锁的分子标记;根据AFLP分析结果进行抗锈基因连锁分析并进行SCAR标记转化。【结果】根据十里香×豫谷1号杂交后代F2群体(131株)抗感谷锈病分离比例,确定十里香抗锈性由显性单基因控制。筛选获得3个与谷子抗锈基因Rusi1(暂命名)连锁的AFLP分子标记,经计算标记与该抗锈基因的遗传距离分别为7.4、9.2和27.4cM。将3个标记片段回收、克隆和测序,成功地将AFLP标记E+CTT/M+TAC-256转化为SCAR标记。初步构建了谷子抗锈基因Rusi1的遗传连锁图谱。【结论】谷子十里香抗锈性由显性单基因控制,Rusi1是一个新发现的谷子抗锈基因。     

Sub-Lethal Effects of Fenvalerate on the Development,Fecundity, and Juvenile Hormone Esterase Activity of Diamondback Moth,Plutella xylostella （L.）

The toxicities of fenvalerate （20% EC） to the 3rd instar larvae of diamondback moth （DBM）, Plutella xylostella （L.）, reared on three host plants viz., radish, oilseed rape, and cabbage were tested. The LC50 values of fenvalerate to the 3rd instar larvae of DBM varied with host plants, however, there wasn＇t any significant difference among them （P〉 0.05）. Similarly, DBM fed on three host plants had same pupal weight, pupal period, pupation rate, adult emergence rate, female ratio, and fecundity. The activity of juvenile hormone esterase （JHE, EC 3.1.1.1） in the 3rd instar larvae of DMB did not significantly vary with host plants, either. These suggested that DBM had similar fitness on the three host plant species. When fed on the host plants pretreated with fenvalerate at the concentrations equivalent to LC20, LC50 and LC50, the pupation rate, pupal weight, adult emergence rate, female ratio, fecundity, and JHE activity of the tested insects were declined as compared with insects in control treatments fed on the same host plant species. Furthermore, the pupal period of the tested insects was extended after fenvalerate treatment. The decrease in JHE activity after fenvalerate treatment in the tested insects could partly explain the changes in the mentioned growth parameters. Whether the role of fenvalerate in the inhibition of JHE activity could serve as a new way to control DBM needs further investigation.     

超声协助提取维药芹菜籽蛋白多肽类物质的研究

采用单因素和正交试验,以磷酸盐缓冲溶液提取并用硫酸铵沉淀芹菜籽中的多肽类成分,且以不同条件下硫酸铵沉淀（80％）的多肽量为考察指标,来确定活性多肽的超声波提取最佳条件。结果表明,芹菜籽中多肽的最佳提取条件为：磷酸盐缓;中溶液pH9．0,超声提取30min,液固比5．0：1（ml：g）,提取的多肽具有较好的清除ABTS自由基的能力。关键词芹菜籽;活性多肽;超声波提取;最佳条件;抗氧化活性     

超声波提取紫薯多糖的工艺优化

[目的]优化紫薯多糖的提取工艺。[方法]利用超声波技术提取紫薯粗多糖,用单因素试验和正交试验设计相结合的方法获得最佳提取工艺。[结果]影响紫薯多糖得率的主要因素按重要性排序为：超声频率〉料液比〉提取温度〉提取时间;紫薯粗多糖最佳提取工艺条件为：料液比1∶15,提取时间40 min,提取温度60℃,超声频率80 kHz,此条件下紫薯多糖的提取率为3.63%。[结论]利用超声技术提取紫薯多糖可以提高多糖得率、缩短提取时间、采用较低温度提取、节省提取溶剂,降低提取成本。