全文获取类型
收费全文 | 2487篇 |
免费 | 78篇 |
国内免费 | 329篇 |
专业分类
林业 | 8篇 |
农学 | 64篇 |
基础科学 | 4篇 |
70篇 | |
综合类 | 853篇 |
农作物 | 27篇 |
水产渔业 | 171篇 |
畜牧兽医 | 1623篇 |
园艺 | 22篇 |
植物保护 | 52篇 |
出版年
2024年 | 9篇 |
2023年 | 24篇 |
2022年 | 90篇 |
2021年 | 91篇 |
2020年 | 78篇 |
2019年 | 104篇 |
2018年 | 46篇 |
2017年 | 101篇 |
2016年 | 119篇 |
2015年 | 95篇 |
2014年 | 140篇 |
2013年 | 127篇 |
2012年 | 208篇 |
2011年 | 209篇 |
2010年 | 137篇 |
2009年 | 155篇 |
2008年 | 102篇 |
2007年 | 148篇 |
2006年 | 167篇 |
2005年 | 109篇 |
2004年 | 72篇 |
2003年 | 67篇 |
2002年 | 57篇 |
2001年 | 53篇 |
2000年 | 51篇 |
1999年 | 29篇 |
1998年 | 42篇 |
1997年 | 27篇 |
1996年 | 29篇 |
1995年 | 27篇 |
1994年 | 25篇 |
1993年 | 23篇 |
1992年 | 18篇 |
1991年 | 16篇 |
1990年 | 23篇 |
1989年 | 20篇 |
1988年 | 17篇 |
1987年 | 9篇 |
1986年 | 5篇 |
1984年 | 3篇 |
1983年 | 2篇 |
1982年 | 2篇 |
1981年 | 3篇 |
1980年 | 6篇 |
1979年 | 3篇 |
1974年 | 1篇 |
1956年 | 5篇 |
排序方式: 共有2894条查询结果,搜索用时 15 毫秒
51.
为研制犬副流感特异性诊断试剂,我们以犬副流感病毒(CPIV)免疫8周龄BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术获得4株稳定分泌针对CPIV的单克隆抗体(MAb)细胞株,分别命名为4F386、584C9、4G7F4和4C9D8.4株MAb腹水针对CPIV的间接ELISA抗体效价达1:10~5~1:10~6,与犬瘟热病毒(CDV)和犬细小病毒(CPV)均不发生交叉反应.MAb 4F386和4C9D8为IgG,5B4C9和4G7F4为IgM.Western blot检测表明,4F386与CPIV的F蛋白发生特异性反应,4G7F4与CPW的HN蛋白发生特异性反应,而584C9和4C9D8不与变性的CPIV蛋白发生反应.4株MAb均具有中和病毒活性,间接免疫荧光检测均呈为阳性.本研究为进一步研制CPIV特异性诊断和治疗制剂创造了条件. 相似文献
52.
Takafumi SUZUKI Naohito NISHII Satoshi TAKASHIMA Tatsuya MATSUBARA Atsushi IWASAWA Hirofumi TAKEUCHI Kohei TAHARA Tatsuyuki HACHISU Hitoshi KITAGAWA 《The Journal of veterinary medical science / the Japanese Society of Veterinary Science》2015,77(11):1379-1383
Polyclonal immunoglobulin (Ig) G autoantibodies against insulin have been
identified in sera of healthy cats. We purified and fractionated insulin-binding IgGs from
cat sera by affinity chromatography and analyzed affinity of insulin-binding IgGs for
insulin and their epitopes. Following the passing of fraction A, which did not bind to
insulin, insulin-binding IgGs were eluted into two fractions, B and C, by affinity
chromatography using a column fixed with bovine insulin. Dissociation constant (KD) values
between insulin-binding IgGs and insulin, determined by surface plasmon resonance analysis
(Biacore™system), were 1.64e−4 M for fraction B (low affinity IgGs) and
2e−5 M for fraction C (high affinity IgGs). Epitope analysis was conducted
using 16 peptide fragments synthesized in concord with the amino acid sequence of feline
insulin by an enzyme-linked immunosorbent assay. Fractions B and C showed higher
absorbance (affinity) of the peptide fragment of 10 amino acid residues at the
carboxyl-terminal of the B chain (peptide No. 19), followed by peptide fragments of 6 to
15 amino acid residues of the B chain (peptide No. 8). Fraction C showed a higher
absorbance to 7 to 16 amino acid residues of the B chain (peptide No. 5) compared with the
absorbance of fraction B. Polyclonal insulin-binding IgGs may form a macromolecule complex
with insulin through the multiple affinity sites of IgG molecules. Feline insulin-binding
IgGs are multifocal and may be composed of multiple IgG components and insulin. 相似文献
53.
禽白血病病毒J亚群(ALV-J)的攻毒试验 总被引:1,自引:1,他引:1
将禽白血病病毒 J亚群 (AL V- J)内蒙株 NM876 1和 NM9996人工接种于 1日龄爱维茵肉种鸡 ,通过眼观、病理组织学检查观察了攻毒鸡的病理学特征 ;通过 PCR和 EL ISA技术检测了病毒感染率、抗体变化规律以及病毒和抗体的相关性。结果显示 ,攻毒鸡从第 3周开始即可检出病毒 ,NM876 1株和 NM9996株病毒感染率分别为 71.4 %和6 4 .3% ;从第 5周开始 ,出现较明显的病理学变化 ,病变特征以骨髓、肝脏、心脏、脾、卵巢等组织内髓细胞增生为主 ,而法氏囊、脑、坐骨神经无变化 ;攻毒鸡抗体消长变化有一定的规律 ,一般在 7~ 8周龄和 18~ 2 0周龄时分别出现 1次高峰 ,而在 4~ 6周龄、10周龄和 2 3周龄分别出现 1次低谷 ,提示鸡场进行 EL ISA检测时要避开这一时期 ;攻毒鸡产生耐受性病毒血症 ,即病毒阳性而抗体阴性 (V A- )的比例较高 (7/14 ,9/14 )。通过以上的研究证明 ,AL V- J内蒙株疾病模型复制成功 ,NM876 1、NM9996可作为原型株进行相关研究 相似文献
54.
采用重氮化法合成磺胺二甲嘧啶(SM_2)-人血清白蛋白(HSA)免疫抗原和SM_2~-卵清白蛋白(OVA)包被抗原。经紫外光谱扫描法确认SM_2与载体蛋白偶联成功;经计算SM_2与HSA、OVA的结合比分别为9:1和15:1。利用杂交瘤技术和有限稀释法经过5次亚克隆,得到三株特异性稳定分泌SM_2抗体的杂交瘤细胞,经鉴定该单克隆抗体免疫球蛋白亚类为IgG_1,为入链,分子量为162Ku,染色体数目90条左右,亲和常数为6.1×10~(12)M~(-1)。与其他四种磺胺药和两种载体蛋白HSA、OVA均无交叉反应。 相似文献
55.
卵黄抗体(Ig Y)具有许多其他类型抗体所没有的优点,其分离纯化的方法有有机物抽提法、盐析法、水稀释法等。试验分别用聚乙二醇(PEG)6000和氯仿来提取卵黄抗体,对其收集的抗体量和抗体效价进行比较分析。结果表明:100 g的卵黄用PEG6000法比氯仿法多收集71 m L卵黄抗体溶液,且PEG6000法的成本远远低于氯仿法,有很好的经济效益,而PEG6000法提取的卵黄抗体效价比氯仿法略低一个滴度。 相似文献
56.
为建立南方菜豆花叶病毒(southern bean mosaic virus,SBMV)的快速、简便、高通量检测技术,加强该病毒的口岸检验检疫,以提纯的SBMV粒子为免疫原免疫BALB/C小鼠,利用杂交瘤技术获得3株杂交瘤细胞株19C3、19H9和20G4,其分泌的SBMV腹水单抗效价均达到10-7,且3个单抗与感染SBMV大豆叶片组织粗提液有强烈的特异性免疫反应,而不与感染南方豇豆花叶病毒(southern cowpea mosaic virus,SCPMV)的豇豆、健康的大豆、毛豆、豌豆、蚕豆和菜豆叶片组织粗提液发生免疫反应。以制备的单抗为核心,建立了检测植物中SBMV的ACP-ELISA和dotELISA两种血清学方法。3个单抗中19H9单抗的检测灵敏度最高,以其建立的ACP-ELISA和dot-ELISA方法检测大豆病叶粗提液的灵敏度分别达到1∶163 840和1∶10 240稀释浓度。利用建立的dot-ELISA方法可从上海口岸截获的大豆种子中检测出SBMV,且该检测结果得到RT-PCR方法验证。表明制备的SBMV单抗及建立的SBMV血清学检测技术可有效用于我国SBMV的口岸检验检疫。 相似文献
57.
Jun-Dong Wang 《Pesticide biochemistry and physiology》2010,98(1):68-1597
An indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ic-ELISA) for cyhalofop-butyl was developed with a polyclonal antibody produced against a hapten (cyhalofop acid) conjugated with bovine serum albumin (BSA). The ELISA of cyhalofop-butyl showed an IC50 value of 0.067 ± 0.004 mg/l and the limit of detection (LOD, IC10) of 0.0029 ± 0.0001 mg/l at the optimal conditions. No significant cross-reaction to other structure-related compounds suggested high specificity for cyhalofop-butyl of the method. The average recoveries of cyhalofop-butyl from fortified water and soil were in the range of 83.2-119.7% and 80.1-104.0%, respectively. These data indicate that this method is a convenient analytical technique for monitoring cyhalofop-butyl in water and soil without purification steps. 相似文献
58.
MxIrt1是从苹果属植物小金海棠中克隆出的二价阳离子转运膜蛋白基因。为进一步研究该基
因的功能, 利用MxIrt1基因位于第3和第4跨膜区之间的162 bp片段, 构建了原核表达载体pGEX-MxIrt1,经原核表达、亲和层析、获得GST2MxIRT1融合蛋白, 以融合蛋白为抗原, 制备多克隆抗体, ELISA方法检测抗体效价阳性, 蛋白质印迹检测植物体内总蛋白, 获得与预期大小一致的特异性条带。上述结果表明,表达的目的蛋白可用于免疫组织化学、蛋白质印迹检测。 相似文献
59.
试验旨在筛选并制备鸡PD-1单克隆抗体,对该单克隆抗体的免疫学特性、结合活性及其对鸡PD-1/PD-L1信号通路激活的阻断作用进行初步研究。运用杂交瘤细胞融合技术筛选杂交瘤细胞株,采用ELISA方法、Ig抗体亚型鉴定试剂盒、Western blotting鉴定抗体的免疫学特性,利用间接免疫荧光技术及流式细胞术检测筛选单抗与鸡PBMCs的结合情况,应用该单抗与IBDV感染7 d后的鸡PBMC细胞作用,利用实时荧光定量PCR技术检测IL-2、IL-6和IFN-γ等细胞因子的表达情况。结果显示,试验获得1株特异、稳定分泌鸡PD-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为PD-1-D05。该单克隆抗体的亚型属于IgG1,杂交瘤细胞培养上清和腹水的效价分别为1:211和1:2.048×105。ELISA和Western blotting检测结果表明,PD-1-D05单抗能与免疫原发生特异性反应,与pET-28a (+)、Rosetta菌株蛋白提取液上清及无关蛋白无交叉反应。间接免疫荧光及流式细胞术检测结果显示,PD-1-D05单克隆抗体能与鸡PBMC特异性结合,且IBDV感染7 d后的PBMC经单抗处理后,IL-2表达量显著升高(P<0.05),IFN-γ转录水平显著下降(P<0.05),IL-6表达水平较IBDV攻毒组细胞虽有所下降,但并无统计学差异(P>0.05)。结果表明,试验成功筛选并制备了能够稳定分泌鸡PD-1单克隆抗体的细胞株,所获得的PD-1单克隆抗体具有良好的免疫学特性,该单抗能够特异性识别鸡PD-1分子并与鸡PBMC细胞特异结合,并在一定程度上恢复由于IBDV感染导致的PD-1/PD-L1信号通路激活引发的免疫调节相关细胞因子IL-2、IFN-γ的异常表达。 相似文献
60.
应用1型鸭疫里默氏杆菌(云南株)超声粉碎物作为包被抗原,建立检测鸭疫里默氏杆菌血清抗体的间接ELISA方法。用倍比稀释法确定HRP标记羊抗鸭二抗最佳稀释倍数为1∶3500,并用棋盘测定法确定抗原的最佳包被浓度为2.7mg/mL,血清最佳稀释倍数为1∶300,阴性血清临界值为0.381;阻断试验结果表明,1型鸭疫里默氏杆菌与其抗血清阻断阳性,与鸭大肠杆菌O78、O132菌株和FJ4型鸭疫里默氏杆菌阻断阴性(无交叉反应)。重复性试验结果表明,该ELISA方法批内变异系数≤0.246,批间变易系数≤0.889。结果表明,该ELISA方法特异性强,重复性好,可用于1型鸭疫里默氏杆菌(云南株)血清抗体的检测。 相似文献