响应面法优化单酶复配酶解辐照玉米秸秆的研究

[目的]优化单酶复配酶解纤维素的条件。[方法]以经1 200 kGy~(60)Coγ-射线辐照处理过的玉米秸秆为原料,采用响应面分析法,对外切葡聚糖酶、内切葡聚糖酶、β-葡萄糖苷酶、木聚糖酶等酶进行优化。[结果]4个因素对酶解产还原糖的影响主次顺序依次为木聚糖酶、外切葡聚糖酶、β-葡萄糖苷酶和内切葡聚糖酶。得到最优酶添加量为外切葡聚糖酶1.07 U/g、内切葡聚糖酶31.53 U/g、β-葡萄糖苷酶20.81 U/g和木聚糖酶81.96 U/g。在上述条件下,试验验证还原糖产量372.624 mg/g与预测值能够很好地吻合。[结论]该中心组合设计响应面优化单酶复配酶解辐照玉米秸秆的方法可靠,可为单酶复配提供参考。     

东北虎γ-干扰素基因的克隆、生物信息学分析及其在毕赤酵母中的表达

本试验旨在通过克隆东北虎γ-干扰素（IFN-γ）基因,研究其分子特征并预测蛋白生物学功能,为后续研究干扰素抗病毒活性做前期准备。通过RT-PCR从ConA诱导过的东北虎血淋巴细胞中扩增东北虎IFN-γ基因并测序,应用生物信息学方法进行序列分析。结果表明：东北虎IFN-γ编码区由504个核苷酸组成,共编码167个氨基酸,蛋白相对分子质量为19.59 ku,等电点为9.03,所编码的蛋白为碱性亲水性蛋白,其中前23个氨基酸可能为信号肽,IFN-γ编码蛋白保守结构域为IFN-γ超家族,且存在跨膜结构,其中1－6位氨基酸为胞内区域,7－28位氨基酸为跨膜区域,29－167位氨基酸为胞外区域;IFN-γ编码蛋白二级结构主要以α-螺旋（58.08%）和无规则卷曲（33.53%）为主,存在5个潜在的B细胞抗原表位,3个潜在的N-糖基化位点;分子进化分析显示,东北虎IFN-γ与GenBank上发表的东北虎、非洲狮、金钱豹、美洲狮、猎豹、家猫、加拿大猞猁、野猪等的核苷酸相似性为80.4%~99.8%,氨基酸相似性为70.5%~100%,东北虎IFN-γ与非洲狮、金钱豹亲缘关系最近,美洲狮、猎豹、家猫、猞猁次之,野猪最远。通过合成改造后的东北虎IFN-γ基因,构建能表达IFN-γ蛋白的重组质粒pPIC9K-IFN-γ,将其导入高效表达系统-毕赤酵母中进行诱导表达,经SDS-PAGE分析,表达蛋白的分子量约17.8 ku,与预期大小相符,表明东北虎IFN-γ成功表达。     

发芽粟谷中谷氨酸脱羧酶的主要酶学性质初探

[目的]探讨发芽粟谷[Setaria italica (L.)Beauv.]中谷氨酸脱羧酶(GAD)的主要酶学性质.[方法]以发芽粟谷为试材,研究发芽粟谷GAD的活性及其主要酶学性质.[结果]发芽粟谷GAD最适温度为40℃, 其耐热性较差,32℃保温1h后其酶活保持率为86.3%;发芽粟谷GAD最适pH值为5.5,在pH值5.0～5.5范围内酶活保持率在80.0%以上;发芽粟GAD对Glu的Km为22.36mmol/L,Vmax为2.28 μmol/min;Ca2+、Mg2+、Li+、PLP和VB6对发芽粟谷GAD活力具有促进作用,而Zn2+、La3+、Cu2+起抑制作用,Mn2+、Na+、F     

黄曲霉毒素B1对雏鸡外周血T淋巴细胞亚群及 血清IL–2和IFN–γ的影响

为探明黄曲霉毒素B1(AFB1)对雏鸡细胞免疫功能的影响,将100只1日龄艾维茵健康公雏鸡随机分为4组,分别喂以基础日粮(玉米–豆粕型基础日粮,对照)和AFB1日粮(基础日粮中AFB1的添加量分别为0.15、0.3、0.6 mg/kg,分别记为AFB1Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组),试验期21 d。以流式细胞术检测雏鸡外周血T淋巴细胞亚群变化;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测雏鸡血清IL–2和IFN–γ含量变化。结果显示,与对照组相比,AFB1Ⅱ和AFB1Ⅲ组7、14和21日龄雏鸡外周血CD3+,CD3+CD4+和CD3+CD8+T淋巴细胞百分比下降明显(P0.05或P0.01),血清中IL–2和IFN–γ含量降低(P0.05或P0.01),AFB1Ⅰ组雏鸡14日龄的血清IL–2和7日龄的IFN–γ含量降低(P0.05),表明摄食含黄曲霉毒素B1的日粮可导致雏鸡细胞免疫功能下降。     

黑麦草属28个引进品种辐射子一代的生长性状比较

本研究利用400、500 Gy的60Co γ射线辐射28个欧洲引进黑麦草（Lolium）干种子,结合大田试验比较了辐射对不同黑麦草品种发芽、分蘖数、株高、鲜质量、抽穗期等生长性状的影响。结果表明,28个品种对γ 射线辐照处理的反应存在明显差异,Gordo、Ligrande、Barmultra对60Co γ射线敏感,低剂量处理即导致死亡,高剂量处理后Remy、Bartissimo死亡。γ 射线辐照处理能够改变黑麦草分蘖数、株高、鲜质量、抽穗期等生长性状,并显著增加Zarastro、Barfort、Tosca、Orlando诱变材料的分蘖数,Lolita诱变后植株高度和鲜质量比未辐照处理材料高20%以上,表明60Co γ射线辐照处理是快速提高牧草分蘖数、株高和鲜质量的有效途径之一,可作为新材料用于进一步的新品种选育。     

梅花鹿γ-干扰素在牛型结核病中的应用研究进展

梅花鹿γ-干扰素是细胞因子超家族中干扰素家族的特殊重要成员之一,具有广泛的生物学功能。其功能的多样性是通过诱导细胞表达多种蛋白质实现的。对梅花鹿γ-干扰素的诱导与产生、结核病特异性基因、梅花鹿γ-干扰素用于牛型结核病的检测原理及γ-干扰素优劣的研究进展进行综述。     

孕穗期冷水胁迫下施用γ-氨基丁酸对寒地粳稻氮光合效率的调控效应

以生育期相近粳稻品种东农428和松粳10为试验材料,研究孕穗期冷水胁迫下施用外源γ-氨基丁酸(GABA)对寒地粳稻功能叶片氮光合效率及产量的调控效应,为制定有效抵御低温冷害化控栽培技术提供理论依据。结果表明,外源GABA主要通过提高松粳10剑叶光保护能力提高其光合效率;通过缓解低温胁迫对东农428剑叶光损伤程度,提高光保护能力进而提高其光合效率。孕穗期冷水胁迫下寒地粳稻剑叶OsGS1;1、OsGS1;2、OsGS1;3及OsGAD2表达量上调,与植物冷应激反应有关。OsNADH-GOGAT、OsGDH1和OsGDH3表达量上调、OsFd-GOGAT表达量显著下调,谷氨酰胺合成酶(GS)活性显著上升,说明孕穗期冷水胁迫抑制剑叶光呼吸过程中谷氨酰胺合成酶/谷氨酸合酶(GS/GOGAT)循环代谢,促进质体中GS/GOGAT循环及谷氨酸脱氢酶(GDH)途径中铵(NH4+)同化代谢。孕穗期冷水胁迫下施用GABA(4.5 mmol·L-1)促使寒地粳稻剑叶OsGS2、OsFd-GOGAT和OsNADH-GOGAT表达量下调;但OsGS1;3、OsGDH3和OsGAD2表达量上调,GS、GDH及谷氨酸脱羧酶(GAD)活性显著升高,使谷氨酸(Glu)家族氨基酸含量显著上升,如抗逆氨基酸GABA、脯氨酸(Pro)、Glu等,避免高NH4+毒害,提高寒地粳稻耐冷性。     

Birth weight and gender determine expression of adipogenic, lipogenic and adipokine genes in perirenal adipose tissue in the young adult sheep

Epidemiological studies have demonstrated that low birth weight is associated with an increased incidence of visceral obesity and metabolic disorders in later life. In the present study, we have determined the impact of birth weight and gender on gene expression in visceral adipose tissue (VAT) in the young adult sheep. Lambs (n=19, birth weight range 2.6-7.55 kg) were born at term and growth monitored for 22.4+/-0.2 weeks, when body composition was determined by Dual X-ray Absorptiometry (DXA) and samples of VAT and subcutaneous (SCAT) adipose tissue collected. Plasma samples were collected at post-mortem for the determination of free fatty acids (FFA), glucose and insulin concentrations. Peroxisome-Proliferator Activated Receptor-gamma (PPARgamma), glycerol-3-phosphate dehydrogenase (G3PDH), lipoprotein lipase (LPL), adiponectin and leptin mRNA expression was determined by qRT-PCR. Fractional growth rate in postnatal weeks 1-3 was inversely related to birth weight in both males and females (R2=0.22, P<0.05, n=19). PPARgamma mRNA expression in VAT, but not SCAT, was inversely related to birth weight (R2=0.60, P<0.01, n=18). In males, but not females, PPARgamma mRNA in VAT was directly related to G3PDH mRNA expression (R2=0.69, P<0.01, n=9). Plasma FFA concentrations were inversely related to birth weight in both males and females (R2=0.22, P<0.05, n=19). These findings demonstrate that low birth weight is associated with an increased expression of a key adipogenic factor in visceral adipose tissue in young adulthood. In males, this is associated with an increased expression of lipogenic genes, and this may contribute to the increased propensity for visceral obesity in low birth weight males compared to females.     

鸡γ-干扰素基因在大肠杆菌中的表达

构建鸡γ-干扰素基因(lFN-γ)的融合表达质粒,并在原核系统表达。根据GenBank发表的鸡γ-干扰素核苷酸序列,使用prim er5设计一对特异性引物,通过RT-PCR技术从ConA诱导培养的鸡脾脏淋巴细胞中克隆出鸡γ-干扰素基因并对其进行测序。测序结果表明,鸡γ-干扰素基因全长495bp,具有一个完整的开放阅读框,编码164个氨基酸,与国外发表的序列同源性为100%。将序列连接到原核表达载体pET28 a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳分析。结果表明鸡γ-干扰素表达蛋白大小为20.8KD,并以包涵体形式表达。为鸡γ-干扰素生物制剂或疫苗佐剂的开发奠定基础。