Protective immune responses induced by in ovo immunization with recombinant adenoviruses expressing spike (S1) glycoprotein of infectious bronchitis virus fused/co-administered with granulocyte-macrophage colony stimulating factor

Infectious bronchitis virus (IBV) causes tremendous economic losses associated with production inefficiencies and mortality in poultry industry worldwide. In the present report, the recombinant adenoviruses expressing chicken granulocyte-macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) and S1 gene of nephropathogenic IBV were constructed and characterized. Then, the immunological efficacy and protection against homologous IBV challenge were assessed in specific pathogen free (SPF) chickens. The results showed that the chickens vaccinated in ovo with rAd-S1, rAd-GM-S1 (GM-CSF fused with S1 using glycine linkers) and rAd-GM-CSF plus rAd-S1 (co-administered) developed specific anti-IBV HI antibodies. Moreover, the fusion of the GM-CSF markedly increased spleen cell proliferation and IFN-γ production while mild increased in IL-4 production, which demonstrated the enhancement of cell-mediated immune responses. Following challenge with IBV, the chickens in the group vaccinated with rAd-S1 fused or co-administered with GM-CSF had fewer nephropathic lesions and showed 100% protection as compared to that of rAd-S1 alone which showed 70% protection. It indicated that the single dose in ovo vaccination of the GM-CSF fused or co-administered with S1 of IBV could enhance significantly the humoral, cellular immune responses and provide complete protection against nephropathogenic IBV challenge. This finding may provide basic information for effective in ovo vaccines design against IBV.     

中药治疗羔羊腹泻的疗效观察

羔羊腹泻是新生羊羔所发生的一种急性腹泻,是由于肠道内细菌、病毒等病原微生物或者营养、环境性因素致使新生羔羊免疫力下降,导致羔羊发病率高,死亡率可达20%~30%,该病为养羊业造成巨大的经济损失。     

牛传染性鼻气管炎诊断方法的研究进展

牛传染性鼻气管炎是由牛传染性鼻气管炎病毒引起的一种牛的热性、急性、接触性传染病。该病是世界动物卫生组织(OIE)规定的必须上报的疾病之一,在我国也被列为二类疫病。牛传染性鼻气管炎可降低牛的肥育率、繁殖率和产奶量,给养牛业造成了重大经济损失。从病毒的分离鉴定、血清学以及分子生物学等方面对该病的诊断方法进行综述,以期为牛传染性鼻气管炎的检测和防控提供参考。     

鸡肾变型传染性支气管炎病毒的分离鉴定

从上海地区具有肾变型临床特征的鸡群中分离到３株传染性支气管炎病毒（ＩｎｆｅｔｉｏｕｓＢｒｏｎｃｈｉｔｉｓＶｉｒｕｓ，ＩＢＶ），分别取名为ＳＴ株、ＳＪ株、ＳＣ株。３株病毒通过鸡胚２～５代后，引起半数以上的健康鸡胚发育受阻，蜷缩或死亡，并随传代代次增加而强化；分离株对乙醚敏感，无血凝性，５６℃作用６０ｍｉｎ失去对鸡胚的感染力；１１日龄鸡胚ＣＥＩＤ５０为１０－５．５～１０－６．５；分别用ＳＴ、ＳＪ、和ＳＣ株的第４代培养物攻击１日龄雏鸡，４８～７２ｈ出现肾脏肿大，拉白色稀粪等特征性症状，５～７天全部死亡。ＳＴ株电镜观察病毒有典型的冠状结构，有纤突。     

牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

为制备牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gD蛋白单克隆抗体,并对其免疫学特性进行分析与鉴定。用CHO细胞表达的IBRV-gD蛋白作为免疫原免疫8周龄的Balb/c小鼠,无菌取其脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合,筛选阳性杂交瘤细胞株,经小鼠腹腔注射,待小鼠腹腔膨胀后,收集腹水,纯化后进行单克隆抗体浓度、纯度、类及亚类、抗体效价、相对亲和常数、Western blot和间接免疫荧光测定。结果表明,筛选到2株阳性杂交瘤细胞株,分别命名为4G3D4和9D7A7。4G3D4和9D7A7这2株单抗纯化后的浓度分别为2.6 mg/mL、1.6 mg/mL;亲和常数分别为2.30E+10、1.88E+09;抗体亚类均为IgG1,轻链为kappa链;且均能与IBRV发生特异性反应,与接种IBRV的MDBK细胞发生反应,产生特异性荧光;间接ELISA测定腹水效价分别为1∶204800、1∶12800。利用CHO细胞表达的IBRV-gD蛋白成功制备了2株单克隆抗体,为下一步建立特异性的IBRV检测方法奠定了基础。     

鸡传染性支气管炎分子生物学诊断研究

综述寡核苷酸指纹图谱分析、RT-PCR、RFLP、核酸探针、单克隆抗体技术,及基因表达技术在鸡传染性支气管炎(IB)分子生物学诊断方面的研究与应用。     

传染性支气管炎病毒NP基因在大肠杆菌中的可溶性表达

[目的]生产具有生物活性的、可用于临床检测的NP融合蛋白抗原,建立可用于临床检测IB抗体诊断的试剂盒。[方法]利用RT-PCR技术扩增传染性支气管炎病毒M41株的NP基因,将之克隆并重组于原核表达载体pET-28a,经PCR、酶切鉴定及序列分析构建重组表达载体pET-NP,研究NP基因在大肠杆菌中的可溶性表达。[结果]将重组载体pET-NP转化表达菌BL21,获得阳性重组菌pET-NP-BL。阳性重组子经IPTG诱导后,目的基因NP获得了高效表达。表达产物经过SDS-PAGE与Western blot检测表明,NP分子量约为49 kD,且以可溶性蛋白形式存在;表达产物可与特异性传染性支气管炎病毒抗血清发生免疫反应。表达产物可以用作检测IB抗体的抗原。[结论]该融合蛋白可用于生产检测IB的诊断试剂,生物安全性高,生产方便。但尚需建立适当的检测方法,进一步研究其实际诊断价值。同时也可以研制新型IB重组亚单位疫苗,进一步研究其刺激动物机体产生的细胞与体液免疫,深入研究新功能,筛选新的抗原表位,为生产新型IB基因工程疫苗奠定基础。     

鄂西南山区山羊传染性胸膜肺炎霉形体的药物敏感性试验

[目的]为鄂西南山区山羊传染性胸膜肺炎霉形的临床用药提供参考。[方法]分别测定了盐酸环丙沙星、氧氟沙星、甲磺酸单诺沙星、硫氰酸红霉素、罗红霉素、酒石酸泰乐菌素、富马酸泰妙菌素、盐酸四环素等8种药物对PG3株和Y-eshi-goat株的敏感性及联合用药的敏感作用。[结果]PG3株和Y-eshi-goat株一样对8种药物中的红霉素及泰妙菌素最为敏感,其次是罗红霉素和泰乐菌素,四环素及喹诺酮类药物较不敏感。4种药物的联合药敏试验表明,红霉素与氧氟沙星表现为相加作用,而红霉素与泰乐菌素表现为无关作用。[结论]临床上治疗山羊传染性胸膜肺炎时首选红霉素和泰妙菌素等高敏药物,次选泰乐菌素与罗红霉素等中敏药物。     

鸡人工感染传染性喉气管炎病毒后气管病理组织学观察

[目的]观察鸡人工感染传染性喉气管炎病毒后气管病理组织学变化,为人工制造鸡传染性喉气管炎病例模型方法研究提供参考。[方法]以健康鸡为对照,应用滴鼻、点眼及气管滴入方式同时进行感染,每只鸡接种100 TCID50传染性喉气管炎病毒液0.5 m l,研究感染鸡的病理组织学变化。[结果]结果表明,按上述方法对鸡进行人工感染后,鸡能够产生所报道的病理变化。[结论]该研究的人工感染方式所引起发病的鸡可以作为患传染性喉气管炎鸡的模型。     

IBV抗体的银加强金标免疫技术检测

【研究目的】建立可在临床上检测鸡传染性支气管炎抗体的银加强金标免疫技术（SECGA）;【方法】将胶体金标记纯化的兔抗鸡IgG,然后将IBV纯化抗原包被于NCM上（0.4ug/片）,封闭后在膜片上滴加不同稀释度（10×2X）的血清,作用10分钟,洗涤后浸于1：4金标兔抗鸡IgG液中作用60分钟,再银染10分钟观察结果;【结果】SECGA能检出IB阳性血清的抗体＞10×27,而不与ND、EDS76、IBD阳性血清发生有意义的交叉反应（抗体滴度＜10×22）。对鸡IgG的最小检测量为0.88ng。用SECGA、气管环中和试验、ELISA试验检测IB抗体有明显的相关性;【结论】银加强金标免疫技术（SECGA）可用于IB抗体的检测,具有敏感、特异、简单、快速、适于现场诊断等优点,适宜于广大基层单位使用。