组织蛋白酶抑制剂E-64对猪卵母细胞体外发育能力的影响

为探明外源性组织蛋白酶抑制剂(E-64)对猪卵母细胞体外发育能力的影响,通过向成熟液中添加1、5、10μmol/L的外源性组织蛋白酶抑制剂,对猪卵丘-卵母细胞复合体(COCs)进行体外成熟培养46 h,统计第一极体率,随后分别进行体外受精和孤雌激活,统计第2天的卵裂率和第7天的囊胚率。结果表明,成熟液中加入1μmol/L E-64的第一极体排出率显著高于未添加的对照组以及5、10μmol/L E-64的添加组。将体外成熟的卵母细胞进行体外受精及孤雌激活,体外受精后胚胎的卵裂率与囊胚率结果均为成熟液中加入1μmol/L E-64的添加组显著高于对照组以及5、10μmol/L E-64的添加组;孤雌激活后,4组间胚胎的卵裂率差异不显著,囊胚率为10μmol/L E-64的添加组显著低于其他3组。因此1μmol/L E-64能促进猪卵母细胞的核成熟,并能进一步提高其体外受精后的卵裂率和体外培养的囊胚率。     

小檗碱对猪卵巢卵母细胞体外成熟及其脂滴含量和分布的影响

[目的]探明不同形态的猪卵巢中卵母细胞体外成熟效果与脂滴的相关性,以及小檗碱对其的影响.[方法]将卵泡型卵巢GV期和黄体型卵巢GV期卵母细胞分别用添加小檗碱的成熟液体外成熟,观察体外成熟效果;用尼罗红染色的方法测定成熟前后的卵母细胞的脂滴含量,并观察成熟后各组卵母细胞脂滴的分布.[结果]卵泡型卵母细胞的颗粒细胞扩散率和第一极体排出率均显著高于黄体型卵母细胞(P＜0.05),小檗碱(Berberine,Ber)组卵母细胞的颗粒细胞扩散率显著高于对照组(P＜0.05),第一极体排出率极显著高于对照组(P＜0.01);体外成熟后,对照组卵母细胞中脂滴含量显著降低(P＜0.05),小檗碱组极显著降低(P＜0.01),且极显著低于对照组(P＜0.01).黄体型卵母细胞的脂滴含量则显著低于卵泡型(P＜0.05).猪卵母细胞成熟后的脂滴分布为分散型、外围型和不规则型,卵泡型卵母细胞脂滴主要呈分散分布,黄体型卵母细胞脂滴主要呈外围分布,并且黄体型卵母细胞脂滴呈不规则分布多于卵泡型.[结论]小檗碱能明显促进猪卵母细胞体外成熟,且卵泡型成熟效果显著好于黄体型;体外成熟后,卵母细胞脂滴逐渐减少,小檗碱组脂滴含量极显著减少,且黄体型卵母细胞脂滴含量明显减少;猪卵母细胞内脂滴的分布与卵巢所处的时期有关.     

影响山羊体外胚胎生产的主要因素

研究了不同成熟培养时间（21、242、7 h）、FSH剂量（0、0.02、0.04、0.06 AU/mL）和激素组合（FSH＋LH＋E2、FSH＋LH、LH＋E2、FSH＋E2）、氨基酸以及负压低氧条件（-300 mmHg2、%CO28、%～10%O2）对山羊卵母细胞体外成熟/体外受精（IVM/IVF）的影响。结果表明：山羊卵母细胞成熟培养以24～27 h较为适宜;添加FSH组的受精卵裂率显著高于未添加组（P〈0.01）,添加剂量以0.02～0.04 AU/mL效果为最佳;LH对山羊的IVM/IVF无显著影响;E2添加对山羊IVM/IVF有负面影响,使囊胚发育率显著降低（P〈0.05）。在成熟液中添加必需氨基酸（EAA）和非必需氨基酸（NEAA）均能显著提高受精卵裂率（P〈0.05）。负压低氧环境对山羊卵母细胞的体外成熟无显著影响,但是不利于山羊的体外受精,使受精卵裂率极显著降低（P〈0.01）;负压低氧环境对提高胚胎发育率的作用不明显。     

套皿法在猪卵母细胞体外成熟培养中的应用

试验表明,套皿无矿物油组卵母细胞成熟率与套皿矿物油组、单皿矿物油组差异不显著,单皿无矿物油组没有卵母细胞成熟;将各组成熟的卵母细胞分别进行体外受精,结果套皿无矿物油组卵母细胞的穿卵率、单精入卵率与套皿矿物油组、单皿矿物油组差异不显著,但雄原核形成率和卵裂率显著高于套皿矿物油组和单皿矿物油组(P<0.05)。套皿法有利于卵母细胞胞质成熟,促进胚胎生长发育,能够替代传统的单皿矿物油覆盖培养法。     

卵巢质量及培养条件对郏县红牛卵泡卵母细胞体外成熟的影响

利用屠宰场采集的郏县红牛卵巢,研究卵巢质量及培养条件对卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:A类卵巢平均获得的卵母细胞数(2.0枚)明显低于B类卵巢获得的卵母细胞数(5.4枚),从A类卵巢上获得的卵母细胞成熟率(55.00%)、卵裂率(37.50%)显著或极显著低于B类卵巢上获得的卵母细胞成熟率(80.00%)(p<0.05)、卵裂率(60.17%)(p<0.01);将随机分成三组的卵母细胞分别培养20h(Ⅰ组)、24h(Ⅱ组)、28h(Ⅲ组),三组成熟率(77.77%、78.57%、74.43%)之间无显著差异(p>0.05),但卵裂率Ⅰ组、Ⅱ组(51.79%、58.16%)明显高于Ⅲ组(36.98%)(p<0.05),Ⅰ组、Ⅱ组差异不显著(p>0.05);以M-199为基础液,比较单独添加ECS和FCS与激素配合的情况下,两种血清种类对卵母细胞成熟的影响,结果表明卵母细胞成熟率(73.33%、75.00%)、卵裂率(52.21%、54.35%)均无显著差异(p>0.05)。     

PMSG和hCG对猪卵母细胞体外成熟的影响

对猪卵母细胞不同发育阶段的激素需要进行了初步探讨。结果表明 :猪卵母细胞体外培养 48h ,前 2 4h在培养液中加入激素 ,后 2 4h不加激素 ,卵母细胞的A级成熟率 (51 73% )和总成熟率 (83 2 5 % )最高 ,极显著高于前 2 4h不加激素 ,后 2 4h添加激素培养的成熟率 (P <0 0 1 ) ;也显著高于不含激素的培养液连续培养 48h的成熟率 (P <0 0 5) ;但与添加激素连续培养 48h组成熟率差异不显著 (P >0 0 5)。     

犬卵母细胞体外成熟培养液组成成分的研究进展

胚胎移植技术已广泛涉及各种哺乳动物,未成熟卵母细胞的体外成熟培养已成为辅助生殖技术的研究热点。因此,如何获得一个稳定的具有较高成功率的体外成熟培养系统是迫切需要解决的问题,犬由于其特殊的生理等方面的特点,卵成熟率不是很高。现就犬卵母细胞的体外成熟培养液的成分,是否需加激素、蛋白因子、生长因子等物质的研究进展作一综述。     

影响牛卵母细胞体外发育能力的因素

本文重点从三个方面探讨了影响卵母细胞成熟发育能力的制约因素：（1）通过分析卵母细胞核成熟和胞质成熟的过程及成熟时各细胞器的状态，指出在体外培养系统中卵母细胞的核成熟，并不代表胞质的成熟，推迟卵母细胞减数分裂的恢复能够有效促使胞质成熟；（2）针对母牛卵巢的功能结构和形态变化，卵泡发育程度及母牛发情周期的不同阶段等有关内容的实验材料，分析了卵泡发育过程中的几种关键因素对卵母细胞发育能力的影响，为了获得较多具有发育潜力的卵母细胞，提出了采集母牛卵巢的适宜情期阶段；（3）根据卵母细胞发育的不同的阶段，提出改善培养体系能提高卵母细胞的发育力。     

卵母细胞生发泡破裂(GVBD)发生前后脱卵丘细胞对猪卵母细胞体外成熟的影响

成熟卵母细胞的细胞质对供体细胞的重编程有作用,卵母细胞的成熟状态成为核移植过程的关键因素。为了研究卵母细胞体外成熟过程中卵母细胞生发泡破裂(germinal vesicle breakdown,GVBD)发生前后脱卵丘细胞对卵母细胞的影响,本研究采用猪(Sus scrofa)卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes,COCs)于体外培养,每隔5 h取卵母细胞采样,置于地衣红染液中染色,根据卵母细胞染色体构型的变化确定卵母细胞的分期,然后在21、27和42 h的卵母细胞进行脱卵丘细胞处理,观察极体数。体外培养不同时间压片观察结果表明,直径2~6 mm卵泡卵母细胞在体外培养时,2~17 h大部分卵母细胞处于GV期(88.30%~52.38%);22 h有63.25%的卵母细胞处于生发泡破裂至前中期(germinal vesical breakdown~premetaphaseⅠ,GVBD~pre-MⅠ);27 h处于中期Ⅰ(metaphaseⅠ,MⅠ)的卵母细胞最多(42.25%);32 h处于后期Ⅰ(anaphaseⅠ,AⅠ)的卵母细胞比例最多(29.90%);37 h处于末期Ⅰ(telophaseⅠ,TⅠ)的卵母细胞比例最多(40%);42 h绝大部分卵母细胞达到了中期Ⅱ(metaphaseⅡ,MⅡ)(72.81%)。分别采取21、27和44 h的卵母细胞进行脱卵丘细胞处理,发现21 h脱卵丘细胞后卵母细胞成熟率为25.56%,低于27 h处理卵的成熟率(34.33%),42 h脱卵丘细胞的卵母细胞的成熟率最高达到84.33%。结果说明,体外卵母细胞成熟过程中,卵丘细胞对卵母细胞的成熟具有重要意义,为进一步探讨和分析猪卵母细胞体外成熟培养的方法,改良体外培养体系,提高猪卵母细胞体外培养成熟率,进而提高胚胎体外培养质量提高奠定基础。     

不同培养条件、培养时问和温度对山羊卵母细胞体外成熟的影响

通过使用不同的培养液、培养时间和温度对山羊卵母细胞体外成熟的影响进行了研究。结果表明：添加同种动物血清对山羊卵母细胞的体外成熟率总体效果要优于添加非同种血清；培养于37℃下的卵母细胞成熟率显著低于38．5℃、39．℃下的成熟率（P〈0．05）；卵母细胞培养18h和培养20h的成熟率极显著低于培养24h和培养26h的成熟率（P〈0．01）。