影响黄牛小腔卵泡卵母细胞体外受精及早期胚胎发育的因素

从屠宰场收集黄牛卵巢,取皮质深层卵母细胞进行体外成熟、体外受精和早期胚胎体外培养,分析了影响其效果的因素。结果表明,在成熟培养液中添加FSH(10IU/mL)、HCG(20IU/mL)和17β-E2(1mg/L)对卵母细胞受精后早期胚胎发育能力有极显著促进作用;等量牛卵泡液(BFF)与新生牛血清(NCS)对体外受精胚胎发育效果影响不显著,以15?F为宜;颗粒细胞与输卵管上皮细胞均能显著提高卵母细胞体外成熟受精后早期胚胎的发育率,颗粒细胞 输卵管上皮细胞对克服胚胎阻滞现象效果显著。     

不同季节水牛卵母细胞体外受精效果的研究

利用屠宰场收集水牛卵巢回收卵母细胞，比较了不同季节的水牛卵母细胞体外受精的效果。试验连续进行了2年，按水牛发情的规律，1年的试验数据分3个阶段统计。结果表明，水牛发情旺季（8~11月）平均每个水牛卵巢回收可用卵母细胞3.66枚，明显高于发情淡季的4~7月和12月~次年3月两个季节（分别为2.76和3.07枚，P＜0.01）；而在不同季节回收的水牛卵母细胞体外受精后分裂率和囊胚率差异不显著（P＞0.05）。     

血管内皮生长因子对绵羊卵母细胞体外受精及胚胎发育的影响

为了研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对绵羊卵母细胞体外成熟和成熟后卵母细胞体外受精卵的早期发育的影响,在细胞培养过程中分别在体外成熟培养液、体外受精液及体外胚胎发育液中添加5、10 ng/mL VEGF.结果显示,添加VEGF组卵母细胞的体外成熟率由对照组的80.68%提高到了86.09%和85.22%(P<0.01),成熟卵母细胞的卵裂率由69.38%提高到了75.18%和73.48%(P>0.05),5 ng/mL添加组的桑葚胚率(45.45%)和囊胚率(30.06%)极显著(P<0.01)高于对照组(37.61%;23.65%);而10 ng/mL添加组的桑葚胚率(40.25%)和囊胚率(27.80%)低于5 ng/mL添加组的,高于对照组,但差异不显著.据此认为5 ng/mL VEGF的添加量比10 ng/mL VEGF添加量能更有效的促进绵羊卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎早期发育.     

由牛体外受精胚胎分离胚胎干细胞

以DMEM＋15％NBS＋0．1mmol/Lβ－巯基乙醇＋0．01μmol/L亚硒酸钠＋10μg/L LIF＋10μg/L IGF－1作为培养液，以原代小鼠胎儿成纤维细胞为饲养层，利用8日龄牛体外受精胚胎获得了传3代的牛类胚胎干细胞（类ES细胞）。通过体外分析试验，对所得类ES细胞的多能性进行了鉴定。结果在培养2d后，牛类ES细胞分化形成了类似于扩张囊胚的结构，悬浮于培养液中。     

血管内皮生长因子对绵羊卵母细胞体外成熟及体外受精卵卵裂率的影响

试验研究了在绵羊体外成熟和体外受精培养系统中分别添加5ng/mL血管内皮生长因子(VEGF)对绵羊卵母细胞体外成熟和体外受精卵的早期发育的影响。结果表明:①与对照组相比,添加5ng/mLVEGF能够显著(P<0.01)提高绵羊卵母细胞的体外成熟率。②在体外受精液中添加5ng/mLVEGF能够显著(P<0.05)提高成熟卵母细胞的卵裂率。研究表明,VEGF对绵羊卵母细胞的体外成熟和受精具有调节作用。     

牛磺酸对牛体外受精早期胚胎发育的影响

研究了牛体外受精后早期胚胎体外发育时向其基础培养液中加入牛磺酸对胚胎桑椹胚率、囊胚率和孵化囊胚率的影响。试验一：以TCM-199＋10％FBS为基础培养液（对照组），再加入7、14mmol／L的牛磺酸（试验组），试验组与对照组的桑椹胚率分别为48．1％、47．4％和43．2％；囊胚率分别为26．4％、22．3％和21．0％；孵化囊胚率分别为21．8％、18．7％和0％。试验二：IVF后2细胞、4～8细胞及8～16细胞期，在基础培养液中分别添加7mmol／L的牛磺酸时，桑椹胚率分别为48．7％、57．1％、52．0％，囊胚率分别为25．1％、30．7％、27．9％，孵化囊胚率分别为25．9％、28．6％、25．0％；而添加14mmol／L牛磺酸组时，桑椹胚率分别为50．4％、56．4％、55．4％，囊胚率分别为26．5％、31．3％、27．7％，孵化囊胚率分别为27．5％、31．1％、29．9％。结果表明，体外发育培养液中添加7mmol／L牛磺酸可显著提高桑椹胚率和囊胚率（P〈O．05），并且在4～8细胞期添加14mmol／L牛磺酸最为合适。     

肉牛IVF胚胎移植应用研究

;1999~2002年,应用肉牛IVF胚胎1000枚在当地7个移植点散养农户中移植受体母牛625头,总体受胎率为33.0%,已产活犊牛164头。其中诱导同期发情处理受体牛399头,发情217头,移植123头,受胎率25.2%;自然发情受体牛852头,移植502头,受胎率34.3%(P>0.05)。初步确定了应用国产氯前列烯醇(CLO)诱导同期发情的程序和剂量,对胚胎解冻方法和黄体功能与受胎率之间的关系进行了探讨,对不同品种、年龄和饲养管理方式的移植效果进行了比较,分析了受体牛移植后的再繁殖能力。     

微流控技术在生殖领域中的应用

微流控技术（microfluidics）是微全分析系统（micro total analysis system,μTAS）和芯片实验室（lab-on-a-chip）的重要支撑技术,其微量化和微尺度的优势得到人们越来越多的关注。辅助生殖技术（assisted reproductive technology,ART）是生殖医学的重要组成部分,已被广泛应用于生产实践中,但由于其低效性,人们在不断寻求新的技术手段。笔者综述了近年来微流控技术在生殖领域中的应用,包括精子筛选、体外受精和配子/胚胎培养等方面的内容,为辅助生殖技术提供了新的平台。     

猪卵母细胞体外成熟及乙醇孤雌激活研究

本试验探讨了不同基础培养液(mTCM-199、NCSU23)和PMSG、HCG浓度、作用时间对猪卵母细胞体外成熟的影响和乙醇及乙醇与各种化学试剂联合处理对猪体外成熟卵母细胞孤雌激活、孤雌生殖胚胎发育的影响,最终找到了最佳的猪卵母细胞体外成熟培养体系,并确定了乙醇孤雌激活的最佳浓度、作用时间和与不同化学试剂联合处理的最佳组合。试验结果得出:最佳的猪卵母细胞培养体系为:NCSU23+20IU/mlPMSG+20IU/mLHCG+10%PFF,激素作用时间为45h,成熟率可达到70.3+3.9%;乙醇的最佳激活浓度为8%,激活率为29.6+2.5%;乙醇激活的最佳处理时间为10min,激活率为32.6+4.1%;乙醇与CB+CHX联合处理的激活率最高,激活率为60.8+3.2%,卵裂率、3～4细胞率、8细胞及8细胞以上率分别为45.1+3.0%、28.6+3.7%、8.7+1.2%;乙醇与CB+6-DMAP联合处理的激活率为51.7+1.9%,卵裂率、3￣4细胞率、8细胞及8细胞以上率分别为41.7+3.6%、30.3+4.3%、9.9+1.8%,虽然激活率、卵裂率低于乙醇与CB+CHX处理组,但3￣4细胞率、8细胞及8细胞以上率均高于乙醇与CB+CHX处理组(30.3+4.3%vs28.6+3.7%,9.9+1.8%vs8.7+1.2%)。因此,乙醇激活的最佳方法为:8%乙醇处理10min,CB+6-DMAP处理7h。