Prokaryotic Expression and Polyclonal Antibody Preparation of σC Protein of Novel Duck Reovirus DH13 Strain

The aims of the experiment was to optimize the prokaryotic expression system of σC protein,prepare polyclonal antibody against σC protein of novel duck reovirus (NDRV),and evaluate the titer of the antibody.The σC gene of NDRV-DH13 strain was amplified by RT-PCR,ligated into pET-30a(+) and pET-32a(+) expression vector,constructed prokaryotic expression plasmid,which were transformed into E.coli BL21(DE3) and the expression of the σC protein were induced by IPTG.The proteins expression were analyzed by SDS-PAGE.The recombinant protein without His tag was purified by digestion,and the recombinant protein with His-tagged was purified by Ni-NTA column.Then the polyclonal antibody was obtained from rabbits which had been immunized by the purified protein without His tag.Anti-His-labeled mAb and NDRV-σC positive serum were used as primary antibodies to evaluate antibodies specificity,the antibodies titer was detected by indirect ELISA (iELISA).SDS-PAGE results showed that the molecular weight of the expression on recombinant proteins were 34 and 37 ku respectively,the proteins were highly expression.Western blotting showed that they had the specific reaction and the prepared antibodies had higher affinity with σC protein,the titer were about 1:25 600 by iELISA detection.This study successfully constructed and optimized the prokaryotic expression system of the polyclonal antibody against σC protein,laid a foundation for the further study of σC protein and the research of genetically engineered vaccine.     

天津地区猪流感血清学调查

2002年-2005年期间,采用血凝抑制试验对天津市10个区县44个养猪场进行了猪流感病毒抗体检测,结果75%的被调查猪场抗体检测结果有阳性,检测的648份血清样品中,69.6%为阳性。流感病毒抗体亚型调查结果显示该地区流行的猪流感病毒主要为H1和H3亚型,抗体阳性率分别为55.4%和39.4%。部分猪群中存在抗H9亚型流感病毒抗体,阳性率为5.4%,但未发现H5亚型流感病毒抗体。此外,部分猪群中同时存在2种或3种亚型(H1,H3和H9)流感病毒的抗体,表明这些猪曾经同时被2种或3种不同亚型的流感病毒感染。     

卵黄抗体及其在重大动物疫病防治与诊断中的应用进展

卵黄抗体（Immunoglobulin of yolk,IgY）又称卵黄免疫球蛋白,具有产量高、成本低、利于生产、产生有效免疫反应所需抗原量小、免疫检测时有较高的敏感性、无副作用、性质稳定等优点,近年来对其研究越来越多,认识也越来越深入。本文就卵黄抗体的产生、结构、特点及其在猪瘟、猪蓝耳病、禽流感和口蹄疫等重大动物疫病防治与诊断中的应用进展作以综述。     

恒河猴血清抗体和补体成分测定

采用全自动血液生化分析仪测定了恒河猴血清抗体和补体成分。不同性别比较，除成年组雄性IgM和C3较高、青年组雌性C4较高外(P＜0．05)，其余各组雌雄间抗体和补体值差异均不显著。不同年龄组间比较，IgG和IgA与年龄关系不密切；IgM幼年组高于青年组和成年组(P＜0．01)，也高于老年组(P＜0．05)；老年组C3和C4较低。     

一定免疫程序下猪瘟、猪伪狂犬病抗体水平合格率分析

猪瘟、猪伪狂犬病一直危害着我国的养猪业，为提高猪群对这两病的抵抗力，减少经济损失，浙江加华种猪有限公司通过抗体水平检测及合格率分析，确定了本场猪瘟、猪伪狂犬病科学、合理的免疫接种程序。     

检测南方水稻黑条矮缩病毒胶体金免疫试纸条的建立

由白背飞虱Sogatella furcifera(Horváth)传播的南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice blackstreaked dwarf virus,SRBSDV)是目前我国南方水稻上危害最严重的病毒,为开发简便、快速、准确的SRBSDV病毒检测技术和检测试剂,以感染SRBSDV的植物粗提液为免疫原,利用杂交瘤技术制备了2株抗SRBSDV的单抗(14A8和15G6),并利用制备的单抗建立了可快速、特异、灵敏地检测SRBSDV的胶体金免疫试纸条。结果表明,2株制备单抗的抗体类型及亚类均为Ig G1、kappa链,单抗腹水的间接ELISA效价均达到10~(-7);Western blot分析表明,2株单抗均与SRBSDV的外壳蛋白亚基有特异反应,而不与水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)反应。以制备14A8和15G6单抗分别为捕获抗体和胶体金标记抗体,开发成能在5 min内准确、特异地检测水稻植物和白背飞虱传毒介体体内SRBSDV的胶体金免疫试纸条;灵敏度分析表明,该检测试纸条的检测水稻病叶的灵敏度达到1∶6 400倍(g/m L),检测单头携毒白背飞虱的灵敏度达到1∶51 200倍(单头/μL)。田间样品检测结果表明,该试纸条的检测结果与RT-PCR的符合率达到100%。建立的SRBSDV胶体金免疫试纸条可对南方水稻黑条矮缩病毒进行快速、特异、灵敏的诊断和检测。     

三疣梭子蟹多克隆抗体与4种经济蟹类血细胞交叉反应的研究

采用激光共聚焦扫描显微镜技术、免疫印迹技术和流式细胞术3种方法对鼠抗三疣梭子蟹血细胞多克隆抗体与黄道蟹、日本蟳、中华绒螯蟹、勘察加帝王蟹血细胞的免疫交叉反应进行分析。激光共聚焦扫描显微镜结果表明,该抗体与黄道蟹、日本蟳、勘察加帝王蟹、中华绒螯蟹血细胞均发生了免疫交叉反应,且发生反应的抗原决定簇均位于细胞膜上;流式细胞术测定该抗体与黄道蟹颗粒血细胞和透明血细胞交叉反应阳性率最高,分别为99.45%、98%,与中华绒螯蟹颗粒血细胞和透明血细胞交叉反应阳性率最低,阳性率分别为81.34%、78.56%;免疫印迹结果显示该抗体与日本蟳血细胞结合的蛋白分子量是80、38.5ku;与勘察加帝王蟹血细胞结合的蛋白分子量是80、93ku;与中华绒螯蟹血细胞结合的蛋白分子量是82、41、30ku;与黄道蟹血细胞结合的蛋白分子量是70、43ku。     

抗禽流感病毒H5和H9亚型血凝素特异性单克隆抗体的研制及应用

以禽流感题H5和H9亚型病毒分别免疫Balh／c小鼠，取其脾细胞与SP2／0的骨髓瘤细胞融合，用血凝抑制试验(HI）检测细胞培养上清，结果获得了6株特异性单克隆抗体，其中抗禽流感题亚型病毒血凝素特异性单克隆抗体细胞株3株，分别命名为4B6、4A3、3H1；抗H9亚型病毒血凝素单克隆抗体细胞株3株，命名为6E6、6B6和5B4。这些单克隆抗体小鼠腹水HI效价为2^13-15，细胞培养上清抗体HI效价为2^7-8。研究结果表明，所有这些单克隆抗体仅与试验的相应题或ID亚型病毒株发生特异性反应，而不能与鸡新城疫病毒、鹅新城疫病毒、鹅腺病毒和鸡产蛋下降综禽征病毒(EDS76)等反应。实验室检测结果证明，应用这些单克隆抗体能在24h内迅速检测出相应的禽流感病毒。所有这些单克隆抗体将在禽流感的预警预报工作中发挥重要作用。     

分泌抗鸡Ig单抗杂交瘤细胞系的建立与单抗生物学特性的鉴定

从传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞系１Ｄ１０、１Ｇ１中得到了３株能稳定分泌抗鸡免疫球蛋白（Ｉｇ）ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系１Ｂ７、１Ｄ７、３Ｇ６。其抗体类和亚类均属ＩｇＧ２ｂ，腹水的ＥＬＩＳＡ效价≥１∶２５６００，琼扩效价为１∶８～１∶１６。３株ＭｃＡｂ能与鸡血清中的Ｉｇ出现沉淀反应，琼扩在２４ｈ以内出现清晰的沉淀线，而不能和鸭、鸽、鹌鹑等禽类及异种动物血清出现沉淀线。纯化的鸡ＩｇＧ、ＩｇＭ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后，分别用纯化并经辣根过氧化物酶（ＨＰＲ）标记的１Ｂ７、１Ｄ７、３Ｇ６单抗酶结合物进行免疫印迹试验证明，３株单抗识别的均为ＩｇＧ、ＩｇＭ分子的轻链